国家自然科学基金(30170909)
- 作品数：7 被引量：68H指数：6
- 相关作者：李宗芳闫峰张澍苏清华刘效恭更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第二附属医院汕头大学医学院第一附属医院厦门大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“优秀青年教师资助计划”陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞数量及其吞噬功能的观察被引量：8
- 2006年
- 目的观察门静脉高压症（PH）脾亢脾脏巨噬细胞（MФ）数量及其吞噬功能的变化，为进一步探讨PH脾功能亢进（脾亢）的发病机制提供依据。方法取20例PH脾亢患者的手术脾脏作为PH组，按脾脏肿大程度的分级标准，再分为中度肿大组（11例）和重度肿大组（9例）。6例正常脾外伤性破裂患者的手术脾脏作为对照组。称重后贴壁法分离培养脾脏MФ，用细胞计数板在显微镜下计数MФ的相对数（每g脾脏组织中的MФ数）并计算MФ绝对数（整个脾脏内MФ的总数），鸡红细胞吞噬法计算MФ的吞噬率和吞噬指数。结果对照组、PH中度和重度脾大组MФ的相对数分别为（13．13±3．72）×10^5／g、（8．80±0.97）×10^5／g、（7．29±1．33）×10^5／g，PH组比对照组均显著减少（P〈0．01），但PH的两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；PH组脾脏的重量明显增加（P〈0．01），可达正常脾重的3．5～6．0倍（放血后）；各组MФ的绝对数分别为（1．94±0．55）×10^8、（4．91±1．12）×10^8、（6．86±0．77）×10^8，PH组比对照组均显著增多（P〈0．01），且PH重度肿大组也显著多于中度肿大组（P〈0．01）；各组MФ的吞噬率和吞噬指数分别为（6.33±0.58）％和（0．07±0．01）、（11．25±2.19）％和（0．14±0．03）、（13．00±2.38）％和（0．16±0．04），PH组比对照组均显著增强（P〈0.01），但PH的两组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论PH脾亢时，脾脏MФ的相对数虽然减少，但绝对数增多，MФ的吞噬功能增强。MФ在PH脾亢的形成中可能扮演着非常重要的角色。进一步支持了脾亢发病中的“脾内阻留学说”。
- 李宗芳高君张澍张煜孙云苏清华王宝太潘敦
- 关键词：门静脉高压巨噬细胞
- 基因芯片筛选门静脉高压症脾亢脾和正常脾巨噬细胞中差异表达基因被引量：9
- 2006年
- 目的运用基因芯片技术检测门静脉高压症脾亢脾和正常脾巨噬细胞中基因表达的差异,探讨其在门静脉高压症脾亢发生中的意义。方法提取门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞和正常脾巨噬细胞的总RNA,分别用标有荧光素的dCTP反转录制备cDNA探针,将探针与含有14112点cDNA的Biostar-H140scDNA表达谱芯片杂交后扫描荧光强度。上述方法重复3次,从而筛选出恒定的差异表达基因。结果3张芯片分别检测到896、1330和898个差异表达基因,恒定的差异表达基因共有121个,占总基因数的0.86%。其中表达上调的已知基因有21个,表达下调的已知基因有73个。差异表达基因涉及离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白类、细胞骨架和运动、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、代谢、免疫相关等多个方面。这些基因可能与门静脉高压症脾亢的发病机制有关。结论采用基因芯片技术筛选门静脉高压症脾亢脾和正常脾巨噬细胞中差异表达的基因,可能为其病因和发病机制的研究提供新思路。
- 闫峰李威陈君填曾永明郭毓文章斐然李宗芳
- 关键词：门静脉高压症脾功能亢进巨噬细胞基因芯片
- 人脾脏巨噬细胞总RNA的提取和产率研究被引量：6
- 2005年
- 目的 探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率。方法 收集 5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏 ,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞 (Mφ)后 ,采用TRIzol试剂一步法提取 5例脾脏Mφ样本的总RNA。分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量。最后计算出每 10 8个Mφ总RNA的产率。 结果 5例样本Mφ总RNA的A2 60nm与A2 80nm比值平均为 1.83± 0 .13 ,提示总RNA纯度较高 ,电泳结果提示总RNA无降解。每 10 8个Mφ平均可抽提 (4 1.5 8± 2 3 .13 ) μg总RNA。 结论 采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的 ,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多 ,可满足后续实验要求。
- 闫峰李宗芳苏清华马双余曹罡张澍
- 关键词：脾脏总RNA脾亢门静脉高压症培养法
- 门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞基因表达谱研究被引量：3
- 2006年
- 目的检测门静脉高压症(PHT)脾亢脾和正常脾巨噬细胞的差异表达基因,为从基因水平观察巨噬细胞在门静脉高压症脾亢发生中的作用奠定基础。方法提取门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞和正常脾巨噬细胞的总RNA,分别用标有荧光素的dCTP反转录制备cDNA探针,将探针与含有14112点cDNA的Biostar-H140s cDNA表达谱芯片杂交后扫描荧光强度,上述方法重复3次,从而筛选出恒定的差异表达基因。结果3张芯片分别检测到896、1 330和898个差异表达基因。恒定的差异表达基因共有121个,占总基因数的0．86%。其中表达上调的已知基因有21个,表达下调的已知基因有73个。差异表达基因涉及离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白类、细胞骨架和运动、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、代谢、免疫相关等多个方面。结论筛选出的差异表达基因,对了解脾脏巨噬细胞在门静脉高压症脾亢发生中的作用有重要意义。
- 闫峰李威陈君填曾永明郭毓文章斐然李宗芳
- 关键词：巨噬细胞基因表达
- 激光捕获显微切割技术应用研究新进展被引量：20
- 2004年
- 对疾病发生过程中的组织损害要进行分子水平分析,首要步骤就是纯净目标细胞的分离。近年发展起来的激光捕获显微切割(lasercapturemicrodissection,LCM)技术可以在显微镜直视下快速、准确地获取所需的单一细胞亚群,甚至单个细胞,从而成功解决了组织中细胞异质性问题。本文介绍了LCM技术的原理及其优缺点,并对其在DNA分析和基因表达分析两个方面的应用研究新进展进行综述,同时对LCM技术的发展和完善提出了可能的方向。
- 闫峰李宗芳
- 关键词：激光捕获显微切割DNA分析基因表达分析
- 人脾脏巨噬细胞的分离与纯化被引量：20
- 2004年
- 目的 探索分离纯化大量人脾脏巨噬细胞 (MΦ)的方法。方法 选取 10例手术切除的脾脏 ,机械研磨法获得脾脏组织细胞混悬液。采用贴壁培养的方法进行MΦ的分离与纯化 ,相差显微镜下动态观察 ,明确贴壁培养的合适时间 ,详细记录MΦ分离纯化过程各步骤所需时间。收获的MΦ ,台盼蓝染色判定活力并计数 ,统计出平均每克脾脏组织收获的MΦ数及其纯度。相差显微镜、透射电镜观察分离纯化MΦ的形态特征。结果 分析贴壁培养各时间段的细胞纯度及活力 ,确定MΦ培养的合适时间为 2～ 3h。贴壁培养纯化后 ,平均从每克脾脏组织可收获 (0 .2 5± 0 .0 3)× 10 8个MΦ ,纯度为 (90± 5 ) % ,细胞活力≥ 99% ,细胞结构及各种细胞器结构均完整。结论 贴壁培养方法分离纯化人脾脏MΦ是成功可行的 ,收获的MΦ数量大、纯度高、活力好 。
- 闫峰李宗芳张澍杨建辉李爱民刘效恭
- 关键词：脾脏巨噬细胞
- 门静脉高压症脾功能亢进脾巨噬细胞吞噬功能的变化及其与脾亢程度的相关性被引量：12
- 2005年
- 目的 观察门静脉高压症患者脾功能亢进(脾亢)时,脾脏巨噬细胞(MΦ)吞噬功能及其与外周血细胞计数变化的相关性。方法 肝硬化门静脉高压症脾亢患者20例(脾亢组),外伤性脾破裂患者6例(对照组)。术前检测患者外周血细胞计数,并收集其手术切除的脾脏,用玻片贴壁法分离培养脾脏MΦ,鸡红细胞吞噬法检测MΦ的吞噬功能。结果 脾脏MΦ吞噬率:脾亢组为(12 6±3 0)%,显著高于对照组(6 9±0 5)%,P<0 01;吞噬指数:脾亢组为0 146±0 035,显著高于对照组0 076±0 008,P<0 01。外周血白细胞计数与脾MΦ的吞噬率负相关(r=-0 472,P<0 05),与吞噬指数也呈负相关(r=-0 625,P<0 01);外周血血小板计数与脾MΦ吞噬率负相关(r=-0 485,P<0 05),与吞噬指数负相关(r=-0 523,P<0 05)。结论 门静脉高压症脾亢脾MΦ吞噬功能增强可能是引起脾亢发生及决定脾亢程度的重要因素。
- 张煜李宗芳孙晓力王继欣苏清华刘效恭
- 关键词：脾亢门静脉高压症脾脏脾功能亢进巨噬细胞外周血细胞
