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GeXP多重基因表达分析系统及其应用被引量：2: 2013年; 介绍了GeXP多重基因表达分析系统图的基本原理,重点阐述了该系统在多重基因表达分析和病毒检测方面的应用,并对该系统在病毒检测方面的应用前景进行了展望。; 卢昌吴国华颜新敏赵志荀李应国聂福平张强; 关键词：RT-PCR 基因表达分析病毒检测

山羊痘病毒A6L基因的克隆及序列分析被引量：2: 2015年; 为了分析山羊痘病毒A6蛋白的分子特征,本试验提取了山羊痘病毒古浪分离株的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,克隆A6L基因的DNA序列。将PCR产物连接到pGEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A6L基因序列进行预测分析。结果显示,A6L基因序列含有1个由1 128个核苷酸组成的开放阅读框,编码375个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为43.68ku,理论等电点为7.50。该蛋白的二级结构中,α螺旋占53.30%,β折叠占10.24%,其余39.46%为无规则卷曲。多序列比对分析结果显示,不同羊痘病毒分离株A6L序列高度保守,同源性在97%以上。上述研究结果为进一步研究A6蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础。; 赵银龙吴国华朱海霞吴健颜新敏赵志荀李健吴娜穆晓峰张强; 关键词：山羊痘病毒基因克隆

山羊痘病毒A11R基因的克隆及生物信息学分析: 2016年; 为了分析绵羊痘病毒A11R蛋白质的分子特征,提取了山羊痘病毒古浪分离株(GL)的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A11R基因序列进行预测分析。结果显示,A11R基因序列由954个核苷酸组成的开放阅读框,编码317个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为36 091.7,理论等电点为5.14。A11R蛋白质的二级结构中,α螺旋占29.02%,β折叠占10.41%,其余60.57%为无规则卷曲。多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株A11R序列高度保守,同源性在98%以上。进化树分析结果显示,GL株与NK株、TU株以及SA株在一个分支,说明它们之间具有较近的亲缘关系,上述研究结果为进一步研究A11R蛋白质的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白质分子间相互作用奠定了基础。; 吴健朱海霞赵志荀颜新敏赵银龙吴娜李健张志东张强李影吴国华; 关键词：羊痘病毒基因克隆生物信息学

蛋白质互作研究技术被引量：2: 2016年; 蛋白质在生物体的机制中是必不可少的,担任着生物系统内启动以及执行的任务。生物体的每一个生物过程,从遗传物质复制到细胞衰老与死亡,依赖于几种甚至几百种蛋白质之间的功能协调。蛋白质的功能,结构的改变会破坏这种平衡,导致疾病的发生,通常这种情况是由于蛋白间的相互作用引起的。目前有很多蛋白质的结构功能是未知的,所以蛋白质组学发展的也尤为迅速。论文主要综述了双向电泳、噬菌体展示技术、GST pull-down、酵母双杂交、串联亲和纯化、双分子荧光互补技术、蛋白质芯片、Far Western blot、免疫共沉淀9个蛋白质组学相关研究技术,并简单介绍了近几年这些技术在生物学中的应用。; 吴健朱海霞赵志荀颜新敏赵银龙吴娜李健张志东张强李影吴国华; 关键词：蛋白质相互作用生物信息学

蓝舌病、口蹄疫、小反刍兽疫和水泡性口炎多重PCR检测方法的建立被引量：5: 2015年; 为建立一种检测并鉴别蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒和水泡性口炎病毒感染的方法,针对蓝舌病病毒NS3基因、口蹄疫病毒3D基因、小反刍兽疫病毒N基因和水泡性口炎病毒N基因序列设计引物,优化反应体系和扩增条件,建立了一种同时检测4种病毒的多重PCR方法。对建立的多重PCR检测方法的特异性及敏感性进行检验,结果表明建立的多重PCR检测方法敏感性强、特异性良好,对4种病毒的最低检出限分别为PPRV 103 copies/μL、BTV 103 copies/μL、VSV 103 copies/μL和FMDV 102 copies/μL。本方法的建立对临床感染蓝舌病等4种病毒的病畜进行快速检测具有十分重要的意义。; 秦敏邹丰才杨云庆祝贺聂福平王煜杨俊叶玲玲周晓黎艾军; 关键词：蓝舌病口蹄疫小反刍兽疫水泡性口炎多重PCR

四种猪呼吸道疾病综合征病原多重PCR检测方法的建立及应用被引量：6: 2015年; 为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)和猪肺炎支原体(M.hyo)的多重PCR方法,分别针对PRRSV的ORF1a基因、PCV2的ORF2基因、APP的OMLA基因和M.hyo的P46基因的保守区域设计4对特异性引物,优化反应体系及条件,建立了可同时扩增PRRSV(225bp)、PCV2(337bp)、APP(107bp)、M.hyo(176bp)相应基因的四重PCR方法。结果显示,该方法能单管同时特异地鉴别检测PRRSV、PCV2、APP、M.hyo 4种病原体,对猪瘟病毒、副猪嗜血杆菌、猪呼吸道冠状病毒、猪流感病毒、猪细环病毒及猪细小病毒等无特异性扩增,说明该PCR具有良好的特异性;方法的灵敏度分别为195、272、241、321pg/μL。应用该方法对重庆市的61份样品进行检测,其中PRRSV、PCV2、APP、M.hyo的阳性率分别为22.9%(14/61)、18.0%(11/61)、8.2%(5/61)和18.0%(11/61)。该方法的建立为临床上4个病原的快速鉴别诊断提供了有力的技术手段。; 陈玉燕杨俊聂福平王昱张姜琳秦敏肖进文王国民李应国蔡家利; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型胸膜肺炎放线杆菌猪肺炎支原体

绵羊痘病毒固原株的分离与鉴定被引量：3: 2015年; 取发病绵羊的皮肤痘疹研磨制成病料样品悬液,将该悬液感染未免疫的健康绵羊,同时接种原代绵羊羔羊睾丸(LT)细胞,盲传5代后,转接Vero细胞,进行间接免疫荧光试验和PCR鉴定。样品悬液感染未免疫的健康绵羊后出现绵羊痘的典型发病症状,经过LT细胞传代后转接Vero细胞,出现了特征性细胞病变;间接免疫荧光试验和PCR均检测出病毒存在。PCR产物的核酸序列测定结果显示,分离毒株的RPO30基因与已发表的绵羊痘病毒毒株的相应基因的同源性在99%以上。上述结果表明,本研究从宁夏固原市疑似绵羊痘病毒感染的绵羊体内成功分离到1株绵羊痘病毒,并将其命名为绵羊痘病毒固原株。; 王曼叶奕优赵志荀吴国华颜新敏朱学亮李应国朱海霞李健张强; 关键词：绵羊痘病毒间接免疫荧光试验 PCR

痘病毒F10L基因的克隆及生物信息学分析: 2014年; 将古浪山羊痘病毒的基因组DNA提取出来,并设计引物进行PCR扩增,克隆F10L基因的DNA序列.为了分析山羊痘病毒F10蛋白的分子特征,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对F10L基因序列进行预测分析.结果显示,F10L基因序列由1 335个核苷酸组成的开放阅读框,编码444个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值53.01 ku,理论等电点为7.14.该蛋白的二级结构中,α螺旋占12.44%,β折叠占15.73%,其余71.83%为无规则卷曲.多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株F10L序列高度保守,一致性在97%以上.此研究结果为进一步研究F10蛋白的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白的分子相互作用奠定了基础.; 赵银龙吴国华吴健朱海霞颜新敏赵志荀李健吴娜张强穆晓峰; 关键词：痘病毒基因克隆生物信息学分析

蛋白激酶PKR在HeLa细胞中的过表达及其siRNA干扰的鉴定: 2016年; 为了研究双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)信号通路对羊痘病毒复制的影响,试验构建了PKR基因的真核表达载体,并在He La细胞中实现了PKR的过表达;从相关文献中筛选了靶向PKR的2对siRNA,检测其对PKR的干扰效果,以RT-PCR方法扩增PKR基因,克隆入表达载体pc DNA3.1(-)/Myc-His(B),对重组质粒进行双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒或siRNAs分别转染He La细胞,Western-blot检测PKR蛋白的表达水平。结果表明:试验成功构建了PKR基因的真核表达载体pc DNA3.1(-)-PKR,重组质粒在He La细胞中得到了表达;2对siRNA具有较好的干扰效果,其中siRNA1、siRNA2对PKR的干扰效率分别达到76%和52%。; 吴娜赵志荀吴国华颜新敏叶奕优李应国朱海霞李健张志东张强; 关键词：羊痘病毒真核表达 SIRNA HELA细胞

同源重组介导的重组病毒研究进展被引量：3: 2016年; 病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行了概述,对重组病毒构建的难点进行了分析,全面系统地阐述了重组病毒的构建模式,针对基因框(启动子-报告基因-目的基因-调控元件-终止子)给出具体的构建方案,同时对其未来发展前景进行了展望,以期为今后重组病毒的构建提供理论基础。; 赵银龙李健朱海霞颜新敏赵志荀吴健张强穆晓峰吴国华; 关键词：同源重组重组病毒病毒载体

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国家质检公益性行业科研专项(201310093)

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