国家自然科学基金(30571710)
- 作品数：4 被引量：3H指数：2
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- 相关机构：华中科技大学埃森大学华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
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- 体外诱导人类B细胞分泌HLA抗体的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的:探索体外诱导人类B细胞产生特异性HLA抗体的理想培养条件。方法:以EBV转化致敏肾移植患者B淋巴细胞系(BLCL)为模型,采用ELISA和ELISPOT方法,比较3种培养体系:(1)RPMI1640+抗OPTI单克隆抗体(mAb);(2)RPMI1640+0·1mmol/L非必需氨基酸液+1mmol/L丙酮酸钠+40mg/L转铁蛋白;(3)Hybridoma无血清培养液,以及3种培养条件:(1)对照组(仅培养液),(2)培养液+rIL-4+rIL-10+鼠抗人CD40(α-CD40),(3)培养液+rIL-4+rIL-10+重组人CD40配体(CD40L),人类B细胞产生免疫球蛋白(Ig)和特异性抗HLA抗体的能力。结果:BLCL细胞在Hybridoma SFM培养体系所产生的IgG和IgM浓度分别为25·2～28·1mg/L和7·14～7·95mg/L,高于其他两种培养条件(P<0·05)。BLCL细胞在添加了IL-4、IL-10和α-CD40或CD40L的杂交瘤无血清培养液中能产生特异性抗HLA-I抗体,所获得的斑点频数分别为3·06/每104个BLCL细胞和3·55/每104个BLCL细胞,高于对照组(1·77/每104个BLCL细胞)。结论:BLCL细胞在杂交瘤无血清培养液中和添加了IL-4、IL-10和α-CD40或CD40L的培养条件下,提高分泌IgG和IgM的能力和特异性抗HLA-I类分子的抗体。
- 廖爱华Vera RebmannHans Grosse-Wilde王燕张玲
- 关键词：B淋巴细胞HLA抗体酶联免疫斑点法
- 人类B细胞转化为抗体分泌浆细胞的体外研究被引量：2
- 2007年
- 目的体外示踪不同刺激条件下人类B细胞转化为抗体分泌浆细胞的能力。方法对5名健康自愿者采用B细胞阴性选择磁珠分离法分离和体外培养B细胞,观察4种培养条件下(培养液对照组、PWM组、细胞因子组及PWM+细胞因子组)、不同时间点B细胞转化为抗体分泌浆细胞的能力。采用双荧光标记(FITC-CD27、PE-CD38)流式细胞技术监测B细胞4种表面标志物的动态变化;采用酶联免疫法(ELISA)测定不同时间点培养上清液中Ig浓度;采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定不同时间点抗体分泌B细胞数。结果B细胞产生抗体浓度明显与培养条件有关。PWM刺激的B细胞培养上清液中Ig浓度最高(P=0.003);PWM+细胞因子组次之;细胞因子组与对照组差异无统计学意义。流式细胞分析结果显示,培养第7天浆细胞前体达峰,第10天浆细胞百分率达峰。活细胞数以细胞因子组最多,培养10d后仍呈增殖状态;而PWM组很快下降。ELISPOT法测定的lg分泌B细胞数也以PWM组最佳,PWM+细胞因子组次之。结论从Ig产生能力看,以PWM组最佳;从细胞增殖和浆细胞的存活来看,以细胞因子组最佳。表明体外诱导B细胞产生抗体不仅需要有效的刺激原,同时还需要必需的细胞因子信号促使细胞增殖和维持细胞的存活。
- 廖爱华王燕张玲
- 关键词：B淋巴细胞浆细胞流式细胞技术酶联免疫斑点法
- 记忆B细胞与血清记忆
- B细胞的记忆形成涉及静止记忆 B 细胞和长寿命浆细胞。尽管已知它们来源于生发中心,但它们怎样从生发中心迁出,怎样长期存活等的机制尚不清楚。本文将对记忆 B 细胞的形成、分类、在生理状态下和免疫应答过程中其向浆细胞转化及血...
- 丁文萍廖爱华
- 关键词：浆细胞
- 文献传递
- 记忆B细胞与血清记忆
- 2008年
- 记忆B细胞被认为是记忆干细胞，通过抗原依赖和非抗原依赖的方式，能转化为浆细胞而产生抗体。B细胞的记忆形成涉及静止记忆B细胞和长寿命浆细胞。尽管已知这些细胞来源于生发中心，但刺激生发中心B细胞进入并维持记忆池所需的信号和环境尚不清楚。且它们是怎样从生发中心迁出，哪些因素决定其长期存活，记忆B细胞池与浆细胞池的组成和容量是多少等都还不十分清楚。这些问题的解决对免疫调控，防治自身免疫性疾病有重要的价值。
- 丁文萍廖爱华
- 关键词：浆细胞免疫调控
- 体外诱导和检测人类B细胞产生抗HLA抗体的研究
- 2009年
- 目的体外诱导和采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测人类B细胞产生的抗HLA抗体。方法对7名健康志愿者采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）并体外培养5d，以B细胞多克隆刺激原美洲商陆丝裂原（PWM）、葡萄球菌A蛋白菌体（SAC）体外刺激PBMC，采用ELISA和ELISPOT方法分别测定培养上清中Ig浓度和抗体分泌B细胞数，探索体外诱导PBMC产生Ig的适宜方法。采用该刺激方法和HLA特异的ELISPOT法，诱导和检测9例拟行肾移植预致敏对象PBMC产生的抗HLA抗体。结果与PWM单刺激相比，PBMC在PWM和SAC联合刺激后，有更多细胞存活的趋势（P=0．052），且培养上清中IgM的水平明显增加（P=0．03），而IgG的水平无明显变化（P〉0．05）。6例预致敏对象诱导和检测到抗HLA抗体。其特异性与各自培养上清中检测到的抗HIA抗体一致。结论PWM和SAC体外刺激PBMC，结合HLA特异的ELISPOT方法，能诱导和检测到人类B细胞产生的HLA抗体。
- 廖爱华刘丽平黄伟陈栋王燕张玲
- 关键词：酶联免疫斑点法B淋巴细胞HLA抗体
