国家自然科学基金(30571719)
- 作品数：13 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：中国医科大学沈阳大学沈阳医学院更多>>
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- 口服免疫Ag85A脂质体DNA诱导T细胞亚群应答效应研究被引量：2
- 2009年
- 目的:拟采用构建的可在真核细胞内表达Ag85A基因的质粒,以阳离子脂质体为运载体,制成DNA疫苗,经口途径投予小鼠,以观察Ag85A脂质体DNA疫苗诱导免疫应答效应,为口服DNA疫苗的临床应用提供理论和实验依据。方法:ELISA方法检测Ag85A特异性抗体产生水平及血清Th1型细胞因子IFN-γ及Th2型细胞因子IL-4的分泌水平,ELISPOT技术检测口服DNA疫苗后小鼠可分泌IFN-γ和IL-4脾淋巴细胞数量。流式细胞术观察口服DNA疫苗后小鼠脾淋巴细胞CD4+ T细胞及CD8+ T细胞亚群的变化,从而判断口服DNA疫苗的免疫效果及脂质体是否有免疫增强作用。结果:口服自制Ag85A DNA疫苗可见血清中抗Ag85A特异性抗体的产生;下调了脾CD4+ T细胞和CD8+T细胞亚群的数量;分泌IFN-γ的Th1型细胞比率和血清中的IFN-γ水平下降,而分泌IL-4的Th2型细胞比率和血清中的IL-4水平升高。口服DNA疫苗组诱导Ag85A特异性抗体产生,脂质体具有免疫佐剂作用。结论:应用阳离子脂质体为运载体,重组Ag85A DNA疫苗口服免疫C57BL/6小鼠,诱导了CD4+及CD8+ T细胞亚群的下调及IFN-γ的表达减少,而IL-4的分泌呈增高趋势;疫苗可诱导Ag85A特异性抗体的分泌,产生了明显的体液应答。
- 姜燕吕昌龙
- 关键词：DNA疫苗阳离子脂质体T细胞亚群
- Ag85A真核表达重组体的构建及稳定转染细胞系的建立被引量：2
- 2009年
- 构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)的真核表达重组体,转染L929细胞,建立稳定转染细胞系。从质粒V1Jns.tPA-Ag85A中经PCR扩增出Ag85A基因,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染L929细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,Western Blot检测Ag85A的表达。成功构建pcDNA3.1/myc-HisA-Ag85A真核表达载体并稳定转染L929细胞,成功表达了目的基因。为进一步研究Ag85ADNA疫苗对结核杆菌的免疫防护作用奠定了基础。
- 刘滢张佩冯永辉王大南徐佳吕昌龙
- 关键词：AG85A真核表达载体转染
- 结核分枝杆菌Ag85A DNA的克隆与原核表达被引量：4
- 2007年
- 抗原85(Ag85)复合体是BCG合成分泌的可刺激机体产生细胞免疫和体液免疫应答。Ag85A是抗原85复合体组成成分之一,可显著刺激细胞免疫功能增强。研究构建了高效表达的pTrcHisB-Ag85A基因重组质粒,并将其转化至大肠埃希菌TOP10中进行重组蛋白的表达,筛选转化物,SDS-PAGE进行蛋白表达的分子量检测,并通过Western Blotting方法,应用抗Ag85A的单克隆抗体进一步确认重组Ag85A蛋白的表达,建立了Ag85A的原核表达体系,为进一步制备出有效的重组Ag85A疫苗奠定基础。
- 姜燕Azuma Kalu吕昌龙单风平
- 关键词：重组DNAAG85A结核分枝杆菌
- 肠黏膜免疫与炎症性肠病研究现状被引量：4
- 2007年
- 炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一组慢性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）和克罗恩病（Crohn＇s disease）。近年来，在黏膜免疫研究方面特别是在IBD发生的免疫因素与治疗方法方面提出了一些新见解。
- 吕昌龙
- 关键词：炎症性肠病黏膜免疫肠道炎症性疾病免疫因素IBD
- 结核分枝杆菌Ag85A口服脂质体DNA疫苗安全性的初步验证
- 2011年
- 对重组pcDNA3.1+/Ag85A DNA阳离子脂质体疫苗的安全性进行初步评价,为临床经口接种DNA疫苗提供理论和实验依据。取质粒存在最丰富的2个部位,即脾、小肠,提取基因组中DNA,并以此为模板进行PCR扩增。分析质粒重组体是否与基因组DNA整合,同时将受试动物实验组与对照组在受试期间体重、食量、一般活动等方面比较;受试小鼠脏器重量与对照组进行比较。结果显示,质粒重组体并未与基因组DNA整合,同时受试动物实验组与对照组之间,无论受试期还是恢复期之间体重、食量、一般活动等方面未见明显改变。受试小鼠脏器重量与对照组相比,无明显差别,从而证明脂质体pcDNA3.1+/Ag85A DNA未与宿主基因组整合,间接说明pcDNA3.1+/Ag85A DNA疫苗对免疫动物并没有潜在的致癌作用。
- 姜燕
- 关键词：阳离子脂质体DNA疫苗
- 口服Ag85A DNA疫苗表达产物在脾脏的分布被引量：3
- 2009年
- 目的 检测口服Ag85A DNA疫苗表达产物在脾脏内的分布，为阐明口服DNA疫苗可诱导全身性免疫应答的机制提供依据。方法 将本实验室构建的pCDNA3．1^＋-Ag85A真核表达重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α进行扩增，无内毒素抽提纯化，进一步用脂质体包裹制成口服重组Ag85A DNA疫苗。将C57BL／6小鼠随机分为2组，即生理盐水组和DNA疫苗组。分别将生理盐水和Ag85A DNA疫苗以灌胃方式投给各组小鼠，共免疫3次，每次间隔14d，末次免疫后14d处死小鼠，取脾，免疫组化、免疫荧光法检测Ag85A表达产物在脾脏的分布情况。结果 Ag85A重组DNA疫苗的表达产物在小鼠脾脏白髓、边缘区和红髓的脾索处有广泛分布，在边缘区及红髓的脾索处的检出强度高于白髓。免疫组化结果中边缘区与白髓比较t=3．039，P〈0．05；红髓的脾索与白髓比较t=3．068，P〈0．05；边缘区与红髓的脾索比较t=1．750，P〉0．05。免疫荧光结果中边缘区与白髓比较t=3．144，P〈0．05；红髓的脾索与白髓比较t=3．098，P〈0．05；边缘区与红髓的脾索比较t=1．369，P〉0．05。结论口服脂质体包裹的DNA疫苗的表达产物存在于脾脏，表明经口途径接种的DNA疫苗可能会在脾脏诱导全身性免疫应答的产生。
- 徐佳刘滢王大南于森冯永辉单风平吕昌龙
- 关键词：AG85ADNA疫苗脾脏
- γδ T淋巴细胞的抗肿瘤作用被引量：3
- 2006年
- 粘膜免疫和固有免疫在对肿瘤的防御中起着重要作用。γδ型T细胞大量的分布于粘膜相关淋巴组织,其作用介于固有免疫和适应性免疫之间并且是MHC非限制性的。因此其在抗肿瘤免疫中的作用也是不可忽视的。以下将对其两个主要的功能亚群VγVδ2 T细胞和Vδ1 T细胞向肿瘤组织内浸润、对肿瘤细胞的识别及杀伤机制进行简要综述。
- 曹妍吕昌龙
- 关键词：ΓΔT细胞肿瘤免疫T细胞
- 口服疫苗与肠粘膜免疫效应机制被引量：8
- 2006年
- 口服疫苗可有效激发肠粘膜免疫,给药途径简单、安全,且种类繁多,主要包括菌苗、病毒疫苗、蛋白质亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因缺失疫苗、DNA疫苗及转基因植物疫苗等,口服疫苗运载体由病毒运载体、细菌运载体和微粒子运载体组成,口服疫苗佐剂在粘膜免疫中发挥重要作用。口服疫苗首先要克服的障碍就是口服无反应性,口服疫苗产生的免疫力可以通过共同膜机制遍布全身膜系统,可明显刺激全身性的细胞免疫和体液免疫应答。
- 姜燕吕昌龙
- 关键词：口服疫苗肠粘膜免疫佐剂
- 口服Ag85A DNA疫苗在小鼠肠道M细胞的表达被引量：2
- 2010年
- 目的:检测Ag85A DNA疫苗在小鼠肠道M细胞的表达,探索口服疫苗在肠道局部的摄取方式。方法:将C57BL/6小鼠随机分为2组,即生理盐水组和脂质体包裹重组质粒组。分别将生理盐水和脂质体包裹pCDNA3.1+/Ag85A以灌胃方式投给各组小鼠,共免疫3次,每次间隔14 d,末次免疫后14 d处死小鼠,取肠,用免疫荧光方法检测Ag85A在肠道局部M细胞的表达。结果:Ag85A DNA疫苗在小鼠肠道局部M细胞有表达。结论:口服脂质体包裹的DNA疫苗可以被肠道M细胞摄取。
- 徐佳
- 关键词：AG85ADNA疫苗脂质体M细胞小鼠
- 口服脂质体包裹Ag85A DNA疫苗诱导抗体的产生
- 2009年
- 制备脂质体包裹的Ag85A口服DNA疫苗,并观察小鼠口服后所诱生的抗体产生情况。用脂质体包裹重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ag85A制备口服DNA疫苗,并用脂质体包裹空质粒pcDNA3.1/myc-HisA作为对照。将C57BL/6小鼠随机分为3组,即生理盐水组、空质粒组和重组质粒DNA疫苗组。分别将生理盐水、空质粒和重组质粒DNA疫苗以灌胃方式投给各组小鼠,共免疫3次,每次间隔14d,末次免疫后14d处死小鼠,ELISA法检测血清中Ag85A特异性抗体水平,放射免疫法测定肠组织中分泌型IgA(sIgA)含量。重组质粒组血清中Ag85A特异性抗体滴度为1160,空质粒组和生理盐水组血清中均未捡出Ag85A特异性抗体。重组质粒组肠组织中sIgA含量(0.3761±0.0456)μg/mL较空质粒组(0.2374±0.0414)μg/mL和生理盐水(0.1993±0.0899)μg/mL组显著增高(P<0.05),而空质粒组和生理盐水组未见有意义的变化(P>0.05)。口服脂质体包裹Ag85ADNA疫苗可诱导外周特异性抗体的产生和肠道黏膜局部sIgA的水平的升高。
- 王大南刘滢张佩冯永辉单风平Seif S.Salum Mchenga吕昌龙
- 关键词：AG85ADNA疫苗脂质体
