国家自然科学基金(30872833)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 大鼠视网膜神经节细胞中内源性α晶状体蛋白的表达及其变化规律
- 2010年
- 目的观察大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中内源性α晶状体蛋白的表达情况。方法原代培养大鼠RGCs,取胰酶消化后即刻的细胞以及原代培养1～7d的细胞行免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察,并通过RT-PCR方法检测原代培养1～7d、9d、12d的RGCs中内源性α晶状体蛋白mRNA的表达情况。结果免疫荧光染色结果显示在原代培养后2d的RGCs中,内源性α晶状体蛋白在少许RGCs膜上表达阳性;原代培养3～5d,内源性α晶状体蛋白表达明显增强并达到高峰,呈"戒环状"分布,然后逐渐降低。mRNA检测结果表明,在RGCs原代培养过程中均有内源性α晶状体蛋白的表达,且在培养第3-5天其表达达到高峰,后逐渐降低。结论大鼠RGCs可表达内源性α晶状体蛋白,在离体培养的RGCs中呈一过性高表达,其表达可能与细胞增殖及细胞活力有关。
- 应希王一曾玉晓吴燕
- 关键词：视网膜神经节细胞内源性
- αA晶状体蛋白重组腺病毒载体的构建和鉴定
- 2011年
- 目的构建携带鼠αA晶状体蛋白的腺病毒表达载体,为进一步研究αA晶状体蛋白高表达对损伤条件下神经细胞的保护作用提供实验基础。方法采用RT-PCR扩增的方法获取鼠源性的αA晶状体蛋白基因,并克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建携带外源性αA晶状体蛋白编码基因的重组腺病毒载体pAd-CRYAA。脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒Ad-CRYAA。应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒。以腺病毒感染滴度快速测定试剂盒测定病毒滴度。结果 PCR、序列测定以及限制性酶切证实αA晶状体蛋白基因正确插入腺病毒表达载体,并在人胚肾293细胞中包装出重组腺病毒。收获病毒的滴度为1.143×1012ifu·L-1。结论成功构建Ad-CRYAA重组腺病毒表达载体,可作为后续研究中可靠的基因转染工具。
- 应希王一
- 关键词：腺病毒载体基因转染
- 视网膜铺片小胶质细胞2种染色计数方法的比较
- 2011年
- 目的比较2种视神经损伤后行视网膜铺片小胶质细胞染色计数方法的准确性。方法取Long Evans大鼠6只,荧光金经双侧上丘及外侧膝状体逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs),7 d后制作视神经钳夹伤模型。钳夹伤后2周麻醉处死大鼠,将大鼠灌注固定后取眼球剥离完整视网膜,置于4%多聚甲醛中后固定2 h,3只大鼠行视网膜铺片对荧光金标记的小胶质细胞进行计数,其余3只在视网膜固定后运用CD11b单克隆抗体免疫组化双重标记小胶质细胞后再行铺片计数。结果视神经损伤后,活化的小胶质细胞吞噬了死亡RGCs碎屑而被荧光金着色,联合小胶质细胞免疫组化的染色方法能够更加清楚地在视网膜铺片上分辨出活化的小胶质细胞和存活的RGCs,荧光金标记与双重标记小胶质细胞的计数分别为(240.0±7.9)、(406.0±9.1)个/mm2。结论运用荧光金联合免疫组化双重标记小胶质细胞能够较为准确地对视神经损伤后活化的小胶质细胞进行计数,是研究小胶质细胞更准确有效的染色方法。
- 于嘉吴楠王一
- 关键词：小神经胶质细胞视网膜铺片染色方法
