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来源于耐碱真菌Pseudallescheria sp.JSM-2的碱性木聚糖酶基因的克隆、表达及其性质研究被引量：4: 2011年; 从造纸废水中分离得到的耐碱真菌Pseudallescheria sp.JSM-2的DNA为模板,利用同源克隆和TAIL-PCR的方法,获得了一个碱性木聚糖酶基因xyl11-1。该基因DNA和cDNA分别为797bp和678bp。该基因的推测蛋白N-端有一个18个氨基酸的信号肽序列和一个含207个氨基酸的成熟蛋白。编码成熟蛋白的cDNA序列在毕赤酵母GS115中重组表达后,进一步纯化并进行酶学性质测定。重组XYL11-1的最适pH为6.5,在pH4.5～9.0范围有50%以上的酶活;在pH4.5～12.0范围具有良好的pH稳定性;最适温度为50℃;以燕麦木聚糖为底物,比活为2618U/mg;且对中性和碱性蛋白酶具有极好的抗性。该酶作用底物范围广,包括各种木聚糖、纤维素和葡聚糖,易于工业化发酵生产,具有在纸浆脱墨、动物饲料、鱼类饵料中的应用潜力。; 王坤罗会颖石鹏君王亚茹杨培龙姚斌; 关键词：PSEUDALLESCHERIA 碱性木聚糖酶基因克隆与表达毕赤酵母

水稻悬浮细胞再生及根癌农杆菌介导转化的影响因素(英文)被引量：3: 2009年; 已经成功报道的农杆菌介导的水稻遗传转化多以活力较高的胚性愈伤为材料,很少以水稻悬浮细胞作为受体.另外,利用农杆菌转化多数都是通过浸泡的方式进行侵染.本实验利用滴加浸染法进行农杆菌介导转化水稻悬浮细胞,探讨影响DNA转化效率的因素.研究显示,在转化前,将水稻悬浮细胞在愈伤诱导培养基上培养1～2周,诱导产生直径为2～3mm的微小愈伤组织对转化非常重要.微小愈伤组织大小不应小于2mm;对悬浮细胞短时间培养不但会缩短植株再生时间,而且会提高转化效率.此外,侵染农杆菌的浓度、侵染时间和不同侵染方法也影响T-DNA插入基因组的效率.用1mlA600值为0.5浓度的农杆菌悬液滴加在水稻悬浮细胞诱导的愈伤,培养3d或直到可见农杆菌菌落,此方法可以得到较高转化效率.将再生的潮霉素抗性的转化植株在含有50mg/L潮霉素的分化和生根培养基中筛选得到,并对转化植株gus基因的表达进行PCR检测.结果显示,用A600值为0.5浓度的农杆菌浸泡侵染20min和滴加浸染法,分别得到PCR阳性植株率为70%和92%.; PROMMEE Wittaya王梅珍朱登云赵倩敖光明于静娟; 关键词：根癌农杆菌水稻悬浮细胞

脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp. A15木聚糖酶基因xynA15的克隆表达及性质研究: 2010年; 从云南保山市的一眼温泉中分离到一株嗜热嗜酸菌,脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp. A15。通过同源克隆和TAIL-PCR方法,从该菌株中克隆得到一个木聚糖酶基因xynA15,全长990 bp,编码329个氨基酸和一个终止密码子。将xynA15基因克隆到原核表达载体pET-22b（＋）上,并转化至BL21（DE3）,经过IPTG诱导,其表达产物具有木聚糖酶的活性。对其酶学性质研究发现,XynA15的最适温度为50℃,最适pH为7.0,不仅在较广的温度范围（35℃-60℃）内具有较高的酶活,而且在50℃具有较好的热稳定性。; 王建设柏映国尹俊姚斌; 关键词：ALICYCLOBACILLUS

一种来源于Bispora betulina的酸性木聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究被引量：4: 2010年; 利用简并PCR和TAIL-PCR技术从嗜酸性真菌Bispora betulina中克隆得到一个酸性木聚糖酶基因xyn11BB。该基因全长1 207 bp,含有三段内含子、一段外显子和一个终止密码子,编码由297个氨基酸组成的蛋白质,推测蛋白质含有一个CBM1结构域。将不带原基因信号肽编码序列的cDNA基因以正确阅读框架克隆到表达载体pPIC9上,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中诱导表达,其表达活性达121.15 U/mL。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为4.5,在酸性条件下具有良好的活性和稳定性,可作为饲料用酶的备选。; 魁红罗会颖董守良姚斌; 关键词：毕赤酵母

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国家科技重大专项(2008ZX003-002)