江苏省自然科学基金(L2134051511)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 沙门菌基因突变株的构建方法研究
- 2012年
- 目的研究沙门菌基因突变株构建的方法,为利用基因工程技术对细菌进行遗传性状改造,深入研究沙门菌防治手段提供工具。方法选用不同感受态细菌培养时间、培养基、感受态细胞浓度和电击参数等条件,以小分子质粒pMDT-GFP电转化受试菌,通过计算转化效率确定优化的电转条件。在此基础上用大分子质粒pGBM151-spvB电转化受试菌,再以蔗糖诱导同源重组,筛选突变株。结果以含15 g/LNaCl的高渗LB培养基培养细菌至A600为0.3,制备浓度为1010cfu/ml的感受态细胞,在参数为2.5 kV、400Ω、50μF条件下,小质粒pMDT-GFP电转鼠伤寒沙门菌可获得高转化效率。以往难以转化的大质粒pGBM151-spvB在该条件下成功获得转化子,进而成功构建突变株。结论上述方法能用于高效构建沙门菌基因突变株。
- 叶颖邱桥成李嫄渊吴淑燕黄瑞
- 关键词：沙门菌基因突变
- 鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株的构建被引量：1
- 2012年
- 高度保守的spvB基因,其编码产物具有ADP核糖基转移酶活性,是导致受染后细胞发生凋亡的重要毒力因子。为进一步研究该基因致病机制,构建了鼠伤寒沙门菌spvB基因缺陷突变株。根据GenBank鼠伤寒沙门菌spvB基因序列,用PrimerPremier 5.0设计PCR特异性引物,获得spvB基因缺陷性核苷酸片段后连接至自杀质粒PGMB151。将构建的自杀载体导入含有spvB基因的鼠伤寒沙门菌标准株SR-11中进行同源重组,PCR筛选缺陷突变株。经PCR和DNA序列测定,成功获得了spvB基因缺陷的鼠伤寒沙门菌突变株。
- 邱桥成叶颖储元元廖莉吴淑燕黄瑞
- 关键词：鼠伤寒沙门菌同源重组基因敲除
