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国家自然科学基金(30971875)

作品数：13 被引量：99H指数：7
相关作者：殷幼平王中康李佳李颜方王芳更多>>
相关机构：重庆大学全国农业技术推广服务中心生物技术公司更多>>
发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项公益性行业科研专项更多>>
相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 13篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 12篇农业科学
  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 11篇黄龙病
  • 11篇柑橘
  • 7篇柑橘黄龙病
  • 6篇内生细菌
  • 6篇病菌
  • 4篇黄龙病菌
  • 2篇优势菌
  • 2篇植株
  • 2篇侵染
  • 2篇群分析
  • 2篇克隆
  • 2篇溃疡病
  • 2篇溃疡病菌
  • 2篇基因
  • 2篇兼性厌氧
  • 2篇检疫
  • 2篇柑橘溃疡病
  • 2篇柑橘溃疡病菌
  • 2篇RFLP
  • 1篇叠氮

机构

  • 14篇重庆大学
  • 3篇全国农业技术...
  • 2篇生物技术公司
  • 1篇南昌大学

作者

  • 14篇王中康
  • 14篇殷幼平
  • 6篇李佳
  • 4篇李颜方
  • 3篇林亚玉
  • 3篇王芳
  • 3篇孙丽琴
  • 2篇吴晓芳
  • 2篇熊书
  • 2篇王玉玺
  • 2篇谢攀
  • 1篇胡修峰
  • 1篇王爱华
  • 1篇吴瑜佳
  • 1篇熊红利
  • 1篇刘婷婷
  • 1篇张仑
  • 1篇郑莉萍
  • 1篇向晟
  • 1篇孙梦黎

传媒

  • 4篇微生物学通报
  • 2篇中国农业科学
  • 2篇植物保护
  • 2篇微生物学报
  • 1篇植物保护学报
  • 1篇植物病理学报
  • 1篇植物研究
  • 1篇中国植物病理...

年份

  • 3篇2014
  • 2篇2013
  • 5篇2012
  • 3篇2011
  • 1篇2010
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
基于EMA-qPCR的茄科青枯菌活体检测技术的建立被引量：9
2013年
【目的】利用特异性核酸染料叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合,建立一种能有效区分青枯菌死活细胞的检测方法。【方法】样品DNA制备前经EMA渗透预处理,再进行实时荧光定量PCR特异扩增菌体DNA。【结果】终浓度为2.0 mg/L的EMA能有效排除1.0×107CFU/mL灭活青枯菌细胞DNA的扩增,对活细胞和不可培养状态(Viable but non-culturable,VBNC)活菌的DNA扩增均没有影响。当每个定量PCR反应体系中的活细胞在5.0×100 5.0×104CFU范围内时,扩增Ct值与定量PCR反应体系中活细胞CFU对数值呈良好的负相关性(R2=0.992 5)。比较EMA-qPCR法和平板计数法对经过不同温度短期保存的青枯菌检测结果发现,待检样品可在24°C与4°C冷藏条件下短期保存。【结论】本研究建立的EMA-qPCR方法能有效检测青枯菌VBNC细胞和有效区分死活菌,避免或减少青枯菌PCR检测的假阳性和假阴性。
熊书殷幼平王芳王中康
关键词：实时荧光定量PCR
广西柑橘黄龙病植株韧皮部内生细菌多样性分析被引量：24
2010年
【目的】对柑橘健康植株和感染黄龙病植株的韧皮部内生细菌的多样性进行比较分析,为研究柑橘植株韧皮部内生细菌与黄龙病菌之间的相互关系奠定基础。【方法】采用常规分离培养与分子鉴定的方法和基于16S rDNA基因的限制性酶切长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析的方法。【结果】用常规分离与分子鉴定方法获得10个属细菌类群,其中芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、考克氏菌属(Kocuria sp.)为无症健株的优势菌群;微杆菌属(Microbacterium sp.)、芽孢杆菌属、假单胞菌属和考克氏菌属.为黄龙病罹病植株的优势菌群。PCR-RFLP方法得到29种酶切图谱,共鉴定出10属可培养细菌以及11种不可培养细菌。健株与病株中Dyella sp.、Pseudomonas sp.、Serratia sp.和未培养细菌所占比例均大于5%。柑橘健株与病株中细菌的种群密度和菌群种类存在明显差异。【结论】研究结果表明柑橘健株和病株韧皮部组织中的内生细菌优势菌群存在明显差异,而伴生细菌的优势菌群与黄龙病菌的相互关系正在深入分析研究。
王爱华殷幼平熊红利李颜方李佳贤家旭王中康
关键词：黄龙病内生细菌RFLP种群多样性
长春花内生细菌多样性与柑橘黄龙病菌的相关性被引量：11
2012年
【目的】分析感柑橘黄龙病长春花植株与健康长春花植株不同部位内生细菌菌群结构变化,为柑橘黄龙病菌与长春花内生细菌的相关性研究提供理论基础。【方法】本研究利用兼性厌氧可培养技术、16S rDNA限制性片段长度多态性分析(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)以及16S rDNA序列分析相结合的方法。【结果】分别从感病和健康长春花叶、茎、根的组织中分离获得67株内生细菌,与GenBank中29种细菌的相似性达到97%-100%。其中短小杆菌属(Curtobacterium sp.)、欧文氏菌属(Erwinia sp.)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)为感病长春花内生细菌的优势菌群,鞘胺醇单胞菌属(Brevundimonas sp.)、芽胞杆菌属(Bacillus sp.)为健康长春花内生细菌的优势菌群;马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)为两者的共同优势菌群。通过RFLP方法分析,感病株得到16个、健株得到23个操作分类单元(Operational TaxonomicUnits,OTUs),感病植株中除柑橘黄龙病菌Candidatus Liberibacter asiaticus外,还有丰富的CandidatusLiberibacter sp.存在。【结论】感病与健康长春花植株中均含有丰富的内生细菌,黄龙病菌的存在改变了长春花原有内生细菌的菌群结构,且菌群多样性下降。可见长春花内生细菌在一定程度上受到柑橘黄龙病菌的抑制。
李佳王中康谢攀吴东殷幼平
关键词：FRAGMENT
柑橘黄龙病侵染相关抗病基因同源序列的克隆鉴定与表达分析被引量：1
2012年
[目的]从黄龙病耐病寄主植物cDNA中筛选抗病基因相关序列并对其进行表达分析研究。[方法]根据已克隆的植物抗性基因表达产物NBS-LRR保守区域设计简并引物,以耐HLB的柑橘属柚cDNA为模板扩增RGAs,并进行实时荧光定量PCR。[结果]通过RFLP分析及克隆测序共得到5个NBS类抗病基因相似序列(RGAs)片段,在GenBank上登录号为HM777043～HM777047。通过Clustalx、DNAMAN等软件分析5个RGAs及其推导的氨基酸的相似性,结果显示它们均含有典型NBS-LRR类抗性基因所具有的保守区域:P-loop、Kinase-2a、GL-PLAL,其与已克隆的烟草N、亚麻L6、拟南芥RPS2、RPS5、RPP8、RPM1等抗病基因在保守区域氨基酸水平上的相似性为19.71%～42.86%。根据得到的序列设计特异性引物,对5个RGAs在HLB侵染过程中的表达进行定量PCR,结果显示嫁接病芽接穗后的8次连续采样中5个RGA的表达受到不同程度的调控。[结论]表明5个RGAs可能与黄龙病的侵染有关。
刘婷婷殷幼平林亚玉贤家旭陈世伟王中康
关键词：定量PCR
黄龙病菌侵染过程中柑橘CsMYB基因克隆及表达分析被引量：3
2011年
MYB类蛋白是一类与植物防卫反应有关的转录因子家族,本研究利用构建的甜橙健株与感染黄龙病的病株差减(SSH)文库,采用RACE技术克隆了一个MYB类基因的cDNA全长序列,命名为CsMYB(GenBank登录号为HQ841074)。柑橘CsMYB基因的cDNA全长为1 306 bp,生物信息学分析显示,该基因包括一个909 bp的完整开放读码框以及一个典型的26 bp poly-A,编码302个氨基酸,分子量为32.97 kD,等电点为8.5。同时,还有MYB类基因的保守特征区域,即在N端有两个典型的MYB DNA结合域:R2和R3。实时荧光定量PCR分析表明,柑橘CsMYB基因受到黄龙病菌侵染后的不同时期表达量不同,伴随着黄龙病病程的变化呈现不同的表达变化。推测CsMYB基因是一个转录因子,可能参与柑橘对黄龙病菌的防御反应过程。
胡修峰殷幼平石小刚李颜方王中康
关键词：甜橙黄龙病MYB
柑橘溃疡病菌的普通LAMP及快速LAMP检测方法的建立被引量：11
2013年
建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP和快速LAMP检测方法,使其能应用于基层检验检疫部门对病害的快速检测。利用柑橘溃疡病菌基因组特有的保守区域设计LAMP引物,通过优化反应条件,建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP检测体系;在普通LAMP引物的基础上设计一对环引物,建立柑橘溃疡病菌的快速LAMP检测体系,并以多种参比菌DNA以及健康柑橘叶片基因组DNA为模板对普通LAMP和快速LAMP检测体系的特异性进行了验证,利用柑橘溃疡病菌菌液和DNA溶液梯度稀释液对普通LAMP和快速LAMP检测体系的灵敏度进行了验证。普通LAMP检测体系菌体和DNA检测灵敏度分别达到了2.25×104cfu和2.03×10-1 ng,快速LAMP检测体系菌体和DNA检测灵敏度分别达到了2.25cfu和2.03×10-5 ng。在特异性测试中,普通LAMP检测体系与快速LAMP检测体系均仅对柑橘溃疡病菌进行扩增,对非靶标菌和柑橘叶片基因组DNA不产生扩增,普通LAMP与快速LAMP检测体系特异性测试结果一致。快速LAMP检测体系在0.5h内就可以达到普通LAMP检测体系的扩增量,是普通LAMP检测体系反应时间的一半,大大提高了检测的效率;快速LAMP检测体系菌悬液和DNA检测灵敏度均比普通LAMP检测体系提高了10 000倍。成功地建立了柑橘溃疡病菌的普通LAMP及快速LAMP检测方法,为柑橘溃疡病菌的检测提供了一种新的简便、快速的检测手段。
张仑殷幼平吴瑜佳王中康
关键词：柑橘溃疡病菌环介导等温扩增LAMP检疫
柑橘黄龙病罹病植株显症差异组织内生细菌群落结构分析被引量：9
2014年
【目的】分离鉴定同株罹病柑橘黄龙病植株不同显症状况组织的内生细菌,寻找与黄龙病菌[‘Candidatus Liberibacter asiaticus’(Ca.Las)]相互作用的优势菌株。【方法】利用基于16S rDNA的PCRDGGE(Denaturing gradient gel electrophoresis)分析同一柑橘黄龙病罹病植株的显症和未显症组织内生细菌多样性,并用定量PCR方法,对果、枝、叶3种组织黄龙病菌、优势菌株及细菌总数进行检测。【结果】结果显示显症和无症组织所带黄龙病菌差异很大,显症部位病菌量明显高于无症部位。分析显症和无症组织内生细菌DGGE图谱显示,同一组织内生菌群结构基本相同;对图谱中17条明显条带回收克隆测序,发现其中8个条带均属于沙雷氏菌属(Serratia),占总条带数的47.06%。序列分析显示这8条序列为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)不同的菌株(序列相似性为99.63%)。定量分析各差异显症部位单位组织内的粘质沙雷氏菌和细菌总数,发现相同部位的总细菌量差异不显著,但粘质沙雷氏菌与黄龙病菌的量呈负相关。【结论】柑橘黄龙病病株中,各部位所带病菌量不均匀,是否显症与组织内柑橘黄龙病菌的量呈正相关,内生菌群总量与显症无相关性,但粘质沙雷氏菌与黄龙病菌的量呈负相关。粘质沙雷氏菌与黄龙病菌在韧皮部细胞内增殖过程中的相互作用值得深入研究。
王芳殷幼平孙丽琴吴晓芳王中康
关键词：柑橘黄龙病内生细菌细菌多样性粘质沙雷氏菌
柑橘黄龙病兼性厌氧型伴生细菌的分离及优势菌群分析被引量：2
2011年
柑橘黄龙病是世界柑橘生产上最具毁灭性的病害,主要由难人工培养的韧皮杆菌所引起（Candidatus Liberibacter asiaticus）[1]。近年的研究结果表明黄龙病发病组织内除了韧皮杆菌外,
李颜方殷幼平王玉玺李佳陈世伟王中康
关键词：柑橘黄龙病伴生细菌群分析优势菌柑橘生产
三种分子检测体系的比较及柑橘果园黄龙病监测被引量：13
2012年
为了评价3种PCR分子检测体系对柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)大田诊断效果,综合比较了常规PCR、巢式PCR和SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(SG Ⅰ-qPCR)方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度、特异性和准确度等参数,并用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和巢式PCR监测广西柑橘园疑似HLB样品425个,比较了2种检测体系的阳性检出率。基于CQULA04F/CQULA04R引物对的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR的灵敏度可达10 ag/μL;而巢式PCR灵敏度为100 ag/μL,巢式PCR较常规PCR检测灵敏度高104倍。疑似样品的HLB病原SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和巢式PCR检出率分别为46.6%、40.0%。各检测体系的灵敏性、特异性、符合度依次为SYBRGreen Ⅰ荧光定量PCR>巢式PCR>常规PCR。研究表明,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR可作为果园大规模HLB早期诊断和监测的首选,而在缺乏定量检测仪器时,巢式PCR也可用于HLB的检测,但需注意避免空气污染导致的假阳性。
林亚玉殷幼平陈世钦王中康
关键词：柑橘黄龙病常规PCR巢式PCR
基于EMA-PCR/qPCR的检疫性有害生物传病风险评估新技术的建立
柑橘溃疡病(Xanthomnas citri subsp.citri)是严重为害柑橘产业发展的重要病害之一.茄科植物青枯病(Ralstonia solanacearum)寄主范围广泛,病原菌在土壤中长期存活,造成巨大的经...
熊书谢攀孙丽琴殷幼平王中康
关键词：柑橘溃疡病菌风险评估番茄溃疡病菌
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