天津市自然科学基金(09JCYBJC13300)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 基于差异蛋白质组学技术解析xCT缺陷诱导的细胞死亡机制
- 2014年
- 目的对Sut黑色素细胞和野生型黑色素细胞进行高分辨率差异蛋白质组学分析,探讨xCT缺陷引起细胞生长抑制的机制。方法分离Sut黑色素细胞和野生型黑色素细胞总蛋白,进行双向电泳和串联质谱分析,获得数值经Mascot软件处理后通过NCBI及Swiss-Prot蛋白质数据库检索,结合双向凝胶电泳相应点的表观等电点、相对分子质量、匹配肽段的多少和序列覆盖率等综合分析筛选差异蛋白质;逆转录-PCR分析Sut细胞差异蛋白mRNA表达水平,用蛋白免疫印迹法对xCT缺陷的Sut黑色素细胞进行自体吞噬分析。结果与结论得到20个明显上调或下调的蛋白,经MALDI-TOF质谱分析鉴定差异蛋白质,发现与自体吞噬和囊泡运输相关的调控因子(Anxa3、Hist1h2bk、NDRG1、CaM)以及与细胞转移相关的调控因子(S100A-4、S100A-6、波形蛋白)表达发生了改变;对自噬标志蛋白分析发现,在xCT缺陷的Sut细胞中发生了自体吞噬。结果表明,xCT缺陷可能通过与细胞外基质的黏附异常以及激活Sut黑色素细胞中自噬相关的信号通路,从而导致细胞的生长抑制和自噬性死亡。
- 齐建利李杨赵立平乔海晅
- 关键词：蛋白质组学自体吞噬
- xCT调节乳腺癌细胞转移的作用机制研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨x CT调节人类乳腺癌细胞株MDA-MB-231转移的作用及其机制。方法采用细胞划痕实验和Transwell实验分析x CT受到抑制和敲低后,人类高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移及侵袭能力的改变。用Western印迹法和RT-PCR检测其自噬相关标志物LC3,上皮细胞间充质化(EMT)过程相关标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)以及Snail表达水平的改变。结果抑制和敲低MDA-MB-231细胞株中x CT的表达后,钙黏蛋白E表达升高,波形蛋白表达降低,转录因子Snail的蛋白水平降低,但其mRNA水平无明显变化,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高。结论抑制和敲低x CT的表达可使MDA-MB-231细胞株发生自噬,降解转录因子Snail,从而抑制EMT,降低MDA-MB-231细胞株的转移能力。
- 郑雪婷赵飞赵瑞赵立平乔海晅
- 关键词：乳腺癌细胞株MDA-MB-231自体吞噬RNA干扰
