国际科技合作与交流专项项目(2004DFA05000)
- 作品数：9 被引量：41H指数：4
- 相关作者：陈集双吴鹏杜志游曾蓉廖乾生更多>>
- 相关机构：浙江理工大学浙江大学湖南农业大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 黄瓜花叶病毒辣椒分离物侵染性克隆构建被引量：4
- 2008年
- 【目的】鉴定引起辣椒产生褪绿黄化症状的病原物,构建侵染性克隆。【方法】大田辣椒样品通过ELISA检测,结合病毒外壳蛋白SDS-PAGE及病毒RNA分析,初步确定辣椒中病原物为黄瓜花叶病毒(CMV)Phy株系。以辣椒病毒粒子RNA为模板,采用含T7启动子的不同正向引物通过RT-PCR扩增CMV-Phy全长基因组RNA1、RNA2和RNA3。PCR产物经过双酶切后连接到pUC118载体,并分别比较5种(DH5α、HB101、JM109、LE392和NM522)感受态细胞的转化效率。体外转录CMV-Phy的基因组cDNA克隆(pUC-P1、pUC-P2和pUC-P3)成RNA分子(P1P2P3),分析其转录效率和侵染活性。P1P2P3与CMV的卫星RNA进行假重组,进一步确定CMV-Phy侵染性克隆的成功构建。【结果】引起辣椒产生褪绿黄化症状病原物为CMV,携带卫星RNA;心叶烟接种辣椒病毒粒子后同样产生褪绿黄化症状。HB101感受态细胞最适合CMV-Phy基因组转化。CMV-Phy基因组及其卫星RNA的大小如下:RNA1为3356nt、RNA2为3048nt和RNA3为2220nt,卫星RNAPz-satRNA为384nt(序列登陆号分别为:DQ402477,DQ412731,DQ412732EF363688)。CMV-Phy的cDNA克隆体外转录在5′端添加G有利于提高转录效率,但影响其侵染活性;P1P2P3在苋色藜和心叶烟产生的症状与其病毒粒子产生的症状相一致。除了Pz-satRNA,P1P2P3还能作为T1-satRNA、Rs-satRNA和Tsh-satRNA辅助病毒;T1-satRNA可加重CMV-Phy在心叶烟症状反应,而其它3个卫星RNA则对此起减弱作用。【结论】以病毒粒子RNA为模板,采用touch-upPCR扩增参数在1个反应管中同时获得CMV-Phy基因组RNA1、RNA2和RNA3;CMV-PhyRNA1、RNA2和RNA3的5′端添加1个G最有利于侵染性克隆构建。
- 廖乾生杜志游张华荣吴鹏朱丽萍陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒侵染性克隆
- 黄瓜花叶病毒2b蛋白对寄主光合速率和叶绿体结构的影响被引量：8
- 2007年
- 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)2b蛋白作为重要致病因子的角色在茄科模式植物上已为广泛描述,但其致病机理尚未廓清.从寄主叶绿体结构和光合特征的角度探索了病毒侵染过程中2b蛋白对心叶烟(Nicotiana glutinosa)的影响.首先利用PCR方法导入突变位点,构建了2b蛋白不表达的人工突变体Fny-CMV!2bpro,然后通过平行接种野生型Fny-CMV和Fny-CMV"2bpro,分析二者侵染后心叶烟的症状表现、叶绿素含量、光合速率以及叶绿体超微结构变化.结果显示:接种30天,Fny-CMV侵染的心叶烟表现重花叶、畸形和矮化症状,植株的光合速率和叶绿素含量显著降低,叶绿体形态和结构发生明显病变.但是,Fny-CMV#2bpro侵染的心叶烟植株仅表现轻微花叶或不表现明显症状,与健康对照相比,其光合速率和叶绿素含量没有显著差异,叶绿体形态和结构亦未出现明显病变.由此可见,野生型病毒侵染导致的相对低的光合速率和叶绿素含量,与2b蛋白引起的叶绿体形态和结构的破坏有一定的相关性.RNA杂交分析结果显示:2b蛋白的致病性与CMV子代RNA在寄主体内的积累量有关,不表达2b蛋白使得CMV基因组RNA1和RNA2含量显著下降,其亚基因组RNA4(编码CP蛋白)含量降低尤为显著.
- 陈斐斐杜志游刘歆谢礼陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒光合速率叶绿体结构
- 侵染半夏的黄瓜花叶病毒RNA3全序列分析及侵染性克隆构建
- 2008年
- 对从我国甘肃省天南星科植物半夏上获得的黄瓜花叶病毒分离物(CMV-PGs)的RNA3进行全长克隆和序列分析及侵染性克隆构建.结果表明:CMV-PGsRNA3序列全长2179nt,与CMV-Fny株系RNA3的同源性为83.1%.选取已报道CMV株系的38个RNA3全长序列,根据CP核苷酸序列进行同源性比较,系统进化树分析表明:CMV-PGs属于亚组ⅠB,但是相对独立.进一步构建CMV-PGsRNA3的侵染性克隆,通过体外转录获得具有侵染活性的RNA转录本,将CMV-PGsRNA3的侵染性转录本与CMV-FnyRNA1和RNA2的侵染性转录本混合接种烟草,成功获得假重组体F1F2P3.
- 陈集双尹雪鸿
- 关键词：半夏黄瓜花叶病毒全序列分析侵染性克隆
- 侵染白菜的黄瓜花叶病毒分离物基因组的全序列分析被引量：5
- 2008年
- 对浙江省杭州地区白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis var.commuis Tsenet Lee.)上获得的CMV分离物(CMV-CTL)进行了全长克隆和基因组序列分析。结果显示:CMV-CTL的RNA1(Gen-Bank序列号:EF213023)全长为3357个核苷酸(nt),编码993个氨基酸(aa)的1a蛋白;RNA2(Gen-Bank序列号:EF213024)全长为3047nt,编码858aa的2a蛋白和111aa的2b蛋白;RNA3(GenBank序列号:EF213025)全长为2217nt,编码278aa的MP蛋白和218aa的CP蛋白。序列相似性分析表明,CMV-CTL与CMV亚组B中株系IA相似性最高,RNA1、RNA2和RNA3与该株系的相似性分别为91·3%、91·3%和93·6%。CP基因和RNA3的5′NTR核酸序列系统发生树分析表明,CMV-CTL与中国大多数CMV分离物一样,属于CMV亚组IB。
- 曾蓉陈燕飞严师节黎定军陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒白菜基因组序列
- 黄瓜花叶病毒小青菜分离物RNA3全长序列分析被引量：2
- 2007年
- 对侵染十字花科小青菜的黄瓜花叶病毒YN分离物(CMV-YN)RNA3进行全长克隆和序列分析.CMV-YNRNA3全长2 220 nt,分别编码279个氨基酸的3a蛋白和218个氨基酸的CP.序列同源性比较结果如下:CMV-YNRNA3核苷酸及其编码蛋白的氨基酸序列与亚组IA株系CMV-Fny、亚组IB株系CMV-Nt9、亚组II株系CMV-Q的同源性,RNA3序列分别为92.7%、96.7%、74.2%,3a蛋白氨基酸序列分别为96.4%、98.6%、83.2%,CP氨基酸序列分别为97.7%、98.2%、83.1%.该结果表明CMV-YN与亚组IB株系CMV-Nt9的同源关系更密切.对CP核苷酸序列的系统进化树分析表明:CMV-YN归属于亚组IB.本研究为首次报道侵染我国十字花科植物的CMV基因组序列.
- 陈集双吴鹏
- 关键词：十字花科黄瓜花叶病毒全长克隆
- 番茄保守性microRNA及其对病毒侵染的反应
- microRNA（miRNA）是一类在真核生物中广泛存在、对基因表达具有调控作用的内源性的一类小分子 RNA。Sanger miRbase 9．0数据库收录了从拟南芥（Arabidopsis thaliana）、大豆 （...
- 陈集双张建光郎秋蕾廖乾生曾蓉陈绍宁
- 关键词：番茄黄瓜花叶病毒MIRNA
- 文献传递
- 萝卜中一种新dsRNA的全长cDNA克隆及序列分析
- 2008年
- 从‘一点红’萝卜（Raphanus sativus-root‘Yidianhong’）叶片中提取dsRNA，应用SPAT方法对各dsRNA条带进行cDNA克隆并测序，除获得先前报道的5条序列（RasR1～RasR5）以外，还得到一条新的全长序列，将其定名为RasR6（EU285027）。序列分析结果表明：RasR6全长为1778bp，其正义链编码1个由502个氨基酸组成、分子量约为55．1kD的蛋白质。该序列与前人报道的双分病毒科5个病毒序列具有相似性，且它们均编码双分病毒科病毒的外壳蛋白（eapsidprotein，CP）。核苷酸序列比对结果显示：RasR6与同时来源于萝b的RasR1和RasR2的5′UTR序列高度同源，且其3′末端具有polyA结构，而与RasR3、RasR4和RasR5的UTR则没有明显的相似性。因此，推测RasR6与RasR1、RasR2同属于双分病毒RasV1（Raphanus sativus virus 1），可能与RasR2共同编码该病毒的CP或作为RasV1的卫星RNA存在。
- 李露露李力强乔爱民陈亮陈集双
- 关键词：萝卜双链RNARAPHANUSSATIVUS
- 黄瓜花叶病毒卫星RNA T1株系的功能研究
- 2009年
- 采用RT-PCR在(cucumber mosaic virus,CMV)侵染番茄(Lycopersicon esculentum)中获得一卫星RNA(T1sat,登陆号DQ785472)。以CMV-Fny作为T1sat辅助病毒,CMV-Fny和CMV-Fny+T1sat分别接种烟草(Nicotiana tabacum)和番茄2种寄主植物。接种3 d后,RT-PCR检测寄主系统叶中卫星RNA发现,T1sat均存在于烟草和番茄中,处理寄主的总RNA电泳分析结果也表明:以CMV-Fny为辅助病毒,T1sat在烟草和番茄中均能高含量积累。其中T1sat减轻CMV-Fny在烟草中症状,而CMV-Fny与T1sat混和接种则引起番茄产生坏死症状。接种7 d和14 d后,采用Realtime RT-PCR分析T1sat对这2种寄主中CMV-Fny各基因组影响的结果显示,T1sat均减少烟草和番茄中病毒基因组的含量,但在番茄中T1sat的抑制效应比在烟草中明显。本研究结果提示:T1sat分别减轻和加重CMV-Fny在烟草和番茄中的病毒症状反应,且T1sat均降低CMV-Fny在烟草和番茄中的基因组含量。
- 朱丽萍曾蓉廖乾生吴鹏陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA
- 大豆花叶病毒研究进展被引量：9
- 2007年
- 大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)病是在世界范围内广泛分布并普遍发生的病毒病害之一,导致大豆严重减产和种质衰退。这引起了国内外许多学者的科研兴趣,研究内容涉及SMV株系划分与发生分布、传播流行方式、寄主上的症状和影响因素、基因组结构组成及各基因功能、植物生理生化抗性、大豆SMV抗性遗传育种等各方面。本文综述了近年来国内外SMV的科研方向和进展,旨在为进一步的研究提供依据。
- 孙浩华薛峰陈集双
- 关键词：大豆花叶病毒基因组结构基因组功能生化抗性遗传育种
- 半夏栽培品遗传差异的AFLP分析被引量：13
- 2007年
- 目的构建不同地区来源半夏栽培品的DNA指纹图谱,探讨利用AFLP分子标记在半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别上的可行性。方法运用扩增片段长度多态性技术(AFLP),对我国17个地区的51份半夏栽培品和4份掌叶半夏样品(外群)进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中筛选出8对多态性丰富、鉴别效率高的AFLP引物组合,构建了51份半夏栽培品的AFLP指纹图谱。聚类分析结果表明:所有半夏栽培品完全被区分开,来源地相同的种质表现出相对密切的亲缘关系,浙江等华东地区的栽培半夏同其他地区半夏有着明显遗传差异,聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持。结论AFLP分子标记可用于半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别分析,浙江、江苏等华东地区栽培半夏的遗传特性相对独立。
- 张杰徐涛张建光陈集双
- 关键词：半夏AFLPDNA指纹图谱种质鉴定
