国家自然科学基金(30772455)
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
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- GDP在体外对大鼠脑线粒体脱耦联蛋白活性和表达的影响被引量：1
- 2008年
- 本研究通过GDP体外处理大鼠脑组织块,观察GDP对脑线粒体脱耦联蛋白(uncoupling proteins,UCPs)活性、UCP4和UCP5表达的影响,以探讨嘌呤核苷酸对大鼠脑UCPs的调节作用。取Sprague-Dawley大鼠双侧大脑半球,将脑组织切成约8-10mm3的脑组织块,与含1 mmol/L GDP的孵育介质共孵育30min后,匀浆并差速离心分离提取大鼠脑组织线粒体,采用[3H]-GTP结合法测定UCPs活性,并以Scatchard作图法计算两者结合的解离常数(Kd)和最大结合量(Bmax);RT-PCR和Western blot分别检测UCP4和UCP5的mRNA和蛋白表达。结果显示,1mmol/LGDP可降低体外大鼠脑组织线粒体中UCPs与[3H]-GTP结合的Bmax,提高Kd,但对脑组织中UCP4和UCP5 mRNA和蛋白表达量的改变无统计学意义。上述结果提示,GDP可直接抑制体外大鼠脑组织中UCPs的活性,但并不影响UCP4和UCP5的表达。
- 夏琛柳君泽徐瑜
- 关键词：GDP
- 棕榈酸对模拟高原低氧大鼠离体脑线粒体解耦联蛋白活性及质子漏的影响被引量：7
- 2008年
- 本文旨在通过观察棕榈酸对模拟高原低氧大鼠离体脑线粒体解耦联蛋白(uncouplingproteins,UCPs)活性的影响及脑线粒体质子漏与膜电位的改变,探讨UCPs在介导游离脂肪酸对低氧时线粒体氧化磷酸化功能改变中的作用。将Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、急性低氧组和慢性低氧组。低氧大鼠于低压舱内模拟海拔5000m高原23h/d作低氧暴露,分别连续低氧3d和30d。用差速密度梯度离心法提取脑线粒体,[3H]-GTP法测定UCPs含量与活性,TPMP+电极与Clark氧电极结合法测量线粒体质子漏,罗丹明123荧光法测定线粒体膜电位。结果显示,低氧使脑线粒体内UCPs含量与活性升高、质子漏增加、线粒体膜电位降低;同时,低氧暴露降低脑线粒体对棕榈酸的反应性,UCPs活性的改变率低于对照组,且线粒体UCPs含量、质子漏、膜电位变化率亦出现相同趋势。线粒体质子漏与反映UCPs活性的Kd值呈线性负相关(P<0.01,r=-0.906),与反映UCPs含量的Bmax呈线性正相关(P<0.01,r=0.856),与膜电位呈线性负相关(P<0.01,r=-0.880)。以上结果提示,低氧导致的脑线粒体质子漏增加及膜电位降低与线粒体内UCPs活性升高有关,同时低氧暴露能降低脑线粒体对棕榈酸的反应性,提示在高原低氧环境下,游离脂肪酸升高在维持线粒体能量代谢中起着自身保护和调节机制。
- 徐瑜柳君泽夏琛
- 关键词：棕榈酸低氧高原病
- 大鼠脑线粒体UCPs活性改变对缺氧过程中氧化磷酸化效能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:通过观察GDP对缺氧大鼠离体脑线粒体UCPs活性的影响,探讨UCPs活性改变在高原缺氧大鼠脑线粒体氧化磷酸化效能改变中的作用。方法:健康成年SD大鼠随机分为对照组、急性缺氧组和慢性缺氧组,分别于模拟海拔5000米高原环境连续缺氧暴露0d、3d和30d,分离脑线粒体,通过体外GDP干预后采用[3H]-GTP结合法测定UCPs的活性(以Scatchard作图法计算两者结合的解离常数Kd和最大结合量Bmax),采用Rhodamine123法和Clark氧电极法分别测定线粒体膜电位(MMP)和线粒体呼吸氧耗。结果:急、慢性缺氧使大鼠脑组织线粒体UCPs与[3H]-GTP的最大结合量(Bmax)均显著升高,而解离常数(Kd)、线粒体膜电位(MMP)和呼吸控制率(RCR)均显著降低,但解偶联呼吸氧耗增加。给予GDP干预后,各组UCPs的活性均被显著抑制,表现为Kd升高,Bmax降低;而MMP和RCR则升高,其中急性缺氧组的变化最显著。结论:模拟高原缺氧条件下GDP能通过抑制UCPs的活性提高大鼠脑线粒体呼吸活性和膜电位,提示UCPs的活性改变是高原缺氧条件下脑线粒体氧化磷酸化效率改变的原因之一。
- 夏琛柳君泽徐瑜
- 关键词：缺氧线粒体
