国家自然科学基金(30700713)
- 作品数：8 被引量：117H指数：4
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- 乙型肝炎病毒表面蛋白反式调节作用的研究进展
- 2010年
- 纪冬徐东平辛绍杰
- 关键词：反式调节HBV感染公共卫生问题肝细胞肝癌慢性携带者感染者
- 恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎病毒感染患者50例的短期疗效观察被引量：4
- 2008年
- 目的分析恩替卡韦对慢性HBV感染患者的早期疗效,提高治疗水平。方法根据化验结果选取慢性HBV感染患者,给予恩替卡韦抗病毒治疗,将其分为HBeAg阳性组(30例)及HBeAg阴性组(20例)进行观察,在用药2周后检测血清HBV DNA水平及肝功能的变化。结果恩替卡韦在开始治疗2周后即有显著的抗病毒效果。用聚合酶链反应(PCR)定量法检测患者HBV DNA的平均下降幅度,HBeAg阳性、阴性组分别为3.005log10和3.410log10,与用药前比较P值均<0.001。HBV DNA<500拷贝/ml者分别为1例及8例。没有发生药物相关的不良反应。结论恩替卡韦进行慢性HBV感染者抗病毒治疗,疗效确切,且起效快,安全性好。
- 纪冬陈国凤李永纲邵清韩萍
- 关键词：恩替卡韦抗病毒治疗慢性乙型肝炎病毒感染
- 实时荧光定量PCR的发展和数据分析被引量：99
- 2009年
- 实时荧光定量PCR技术是基因时代一项用于检测mRNA的常用技术,是临床检测和基础研究中不可缺少的重要研究方法,包括绝对定量PCR和相对定量PCR。该技术的特点是可以减少PCR后操作,在比较不同浓度的mRNA方面具有非常宽的动力学范围。我们就目前实时荧光定量PCR的发展及数据的分析进行综述。
- 纪冬辛绍杰
- 关键词：实时荧光PCR
- HBV前S2蛋白对胰岛素受体基因下调作用的研究被引量：8
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒前S2蛋白(pre-S2)对胰岛素受体(INSR)基因的转录调节作用。方法以pGEM-Teasy-65-2质粒为模板,扩增乙型肝炎病毒(HBV)pre-S2基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-preS2,以不同剂量(1.0、1.5、2.0μg)转染肝癌细胞系HepG2和Huh7,36h及72h后分别提取转染后细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR检测细胞内的INSR mRNA水平,观察HBV的pre-S2蛋白对INSR基因的转录调节作用,同时观察阻断pre-S2蛋白后INSR的表达情况。结果转染不同剂量pcDNA3.1-preS2后,HepG2细胞内INSR基因的表达水平分别为对照的61%、20%、11%(转染后36h)和92%、69%、37%(转染后72h),Huh7细胞内INSR基因的表达水平分别为对照的63%、47%、35%(转染后36h)和83%、73%、34%(转染后72h);细胞INSR mRNA水平随真核表达载体pcDNA3.1-preS2转染剂量的增加而降低。在转染2μgpcDNA3.1-preS2的同时,将抗pre-S2单克隆抗体加入培养上清,可部分阻断pre-S2蛋白对INSRmRNA表达的抑制,HepG2细胞中的INSRmRNA水平分别恢复到转染空质粒对照的65%(转染后36h)和81%(转染后72h),Huh7细胞中的INSRmRNA水平则分别恢复到69%(转染后36h)和96%(转染后72h)。结论HBVpre-S2蛋白对肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞的INSR基因有明显下调作用,抗pre-S2抗体能部分阻断这种下调作用,此机制可以在分子水平部分解释肝源性糖尿病的发生。
- 苏何玲纪冬韩萍刘妍张健陈国凤钟彦伟徐东平
- 关键词：前S2蛋白基因调节
- 乙型肝炎病毒前S2蛋白下调胰岛素受体启动子的研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）前s2蛋白对胰岛素受体（INSR）启动子转录的下调作用。方法HBV前s2蛋白真核表达质粒pcDNA3．1（-）-preS2及INSR启动子真核报告质粒pCAT3-INSRp使用常规分子生物学方法进行构建，并经酶切、测序证实。接下来，将构建好的pcDNA3．1（-）-preS2质粒以1．0、1．5、2．0μg转染HepG2细胞，提取总RNA后进行相对实时荧光定量PCR检测以明确前S2蛋白mRNA的表达量。然后，分别将pCAT3-INSRp质粒以0．2μg递增量（0～2．0μg）转染HepG2、Huh7细胞系，CAT-ELISA法检测转染细胞的氯霉素乙酰转移酶（CAT）表达量以制作pCAT3-INSRp的量-效曲线。最后，根据量一效曲线选择合适的pCAT3-INSRp转染剂量（1．0μg）与不同剂量的pcDNA3．1（-）-preS2（1．0、1．5、2．0、2．5、3．0μg）共转染HepG2及Huh7细胞，同时使用抗前S2蛋白单克隆抗体以阻断前S2蛋白的作用，使用CAT-ELISA方法检测转染细胞的CAT表达量，以观察前S2蛋白对于INSR启动子的调节作用。结果转染了pcDNA3．1（-）-preS2的细胞可以正确表达HBV前s2蛋白的mRNA。pCAT3-INSRp质粒转染细胞后CAT的表达随着转染剂量的增加而增加，量-效曲线为S形。转染不同剂量pcDNA3．1（-）-preS2后，HepG2细胞内CAT基因的表达水平分别为对照的69．8％、60．1％、19．7％、10．3％、5．6％（转染后36h）和68．6％、56．O％、10．3％、8．6％、3．2％（转染后72h）。同时，在转染2．0txgpcDNA3．1（-）-preS2的细胞培养上清中加入前S2单抗后，其CAT的表达量恢复为对照的55．4％（36h）和69．7％（72h）。Huh7细胞的结果同HepG2细胞结果相似。结论克隆的INSR启动子有顺式激活下游基因的活性；HBV的前S2蛋白对INSR启动子转录具有下调作用，可以在分子水平解释肝源性糖尿病发病机制的一部分。
- 纪冬韩萍张健邵清刘妍王琳陈国凤
- 关键词：肝炎乙型肝炎病毒乙型
- 噬菌体展示技术在HBV前-S1蛋白反式激活基因1启动子DNA的结合蛋白筛选中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的应用噬菌体展示技术筛选HBV前-S1蛋白反式激活基因1(PS1TP1)的启动子DNA结合蛋白,进一步阐述PS1TP1在慢性乙型肝炎发病机制中的作用。方法根据GenBank中的PS1TP1启动子DNA序列设计引物,运用PCR技术以人基因组DNA为模板,扩增获得PS1TP1启动子的DNA片段,并通过亚克隆方法构建真核报告载体pCAT3-PS1TP1p后转染HepG2细胞系,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以验证所获得的DNA片段具有启动子活性;将PS1TP1启动子DNA片段进行固相化,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,将所获得的噬斑裂解液进行PCR扩增,测序后进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索。结果 pCAT3-PS1TP1p瞬时转染的HepG2细胞中CAT表达活性是对照组(pCAT3-Basic空载体)的32.9倍,是pCAT3-promoter的4.2倍,提示所获得的DNA片段具有启动子活性;经4轮筛选共得到阳性克隆18个,经PCR扩增、测序,并经生物信息学分析后筛选出PS1TP1的启动子DNA结合蛋白编码基因共15个。结论 PCR扩增后所获得的PS1TP1启动子DNA片段具有顺式激活下游基因表达的作用,为研究PS1TP1启动子功能奠定了基础;噬菌体展示筛选结果提示PS1TP1可能参与了细胞周期调节、MAPK信号转导通路,并且有可能在辅助性T细胞亚群的发育和B细胞分化过程中发挥作用。
- 纪冬成军韩萍邵清陈国凤
- 关键词：前-S1蛋白转录启动子DNA结合蛋白质类
- 乙型肝炎病毒前-S2蛋白反式激活蛋白1基因的克隆化研究被引量：3
- 2010年
- 目的应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法以HBV前-S2蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-PreS2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总RNA进行基因表达谱芯片分析。并克隆HBV前-S2反式激活作用的新的靶基因。结果获得该新基因的全长序列,并测序证实,因其可以被前-S2蛋白反式激活,故命名为前S2反式激活蛋白1(PS2TP1),已在GenBank中注册,注册号:AY561706。PS2TP1基因的编码序列全长为1113个核苷酸(nt),编码产物由370个氨基酸残基(aa)组成。结论HBV前-S2蛋白具有反式激活功能,调节宿主细胞某些基因的表达,从而改变宿主正常的应答水平,引起病变。
- 纪冬刘妍韩萍陈国凤辛绍杰
- 关键词：蛋白基因
- 乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白上调硫氧还蛋白还原酶1基因的表达被引量：2
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原主蛋白(SHBs)对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用。方法以我室构建的SHBs基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-SHBs共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果pCAT3-TXNRD1p与pcDNA3.1(-)-SHBs瞬时共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-TXNRD1p的7.4倍,是pCAT3-TXNRD1p与pcDNA3.1(-)-empty共转染的2.5倍。结论我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HBV的SHBs蛋白可以上调TXNRD1的启动子活性。
- 韩萍纪冬陈国凤李永纲刘妍
- 关键词：启动子
