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国家科技重大专项(2012ZXl0001002-002-011)

作品数:1 被引量:0H指数:0
相关作者:陈德喜袁霖石英徐树莹李庆更多>>
相关机构:首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇点突变
  • 1篇抑制剂
  • 1篇整合酶
  • 1篇整合酶抑制剂
  • 1篇制剂
  • 1篇人类免疫
  • 1篇人类免疫缺陷
  • 1篇人类免疫缺陷...
  • 1篇人类免疫缺陷...
  • 1篇突变
  • 1篇突变株
  • 1篇缺陷病
  • 1篇酶抑制剂
  • 1篇免疫缺陷
  • 1篇免疫缺陷病
  • 1篇免疫缺陷病毒
  • 1篇HIV-1
  • 1篇HIV整合酶...
  • 1篇病毒

机构

  • 1篇首都医科大学...

作者

  • 1篇丁渭
  • 1篇乔录新
  • 1篇徐萌
  • 1篇李庆
  • 1篇徐树莹
  • 1篇石英
  • 1篇袁霖
  • 1篇陈德喜

传媒

  • 1篇中华传染病杂...

年份

  • 1篇2014
1 条 记 录,以下是 1-1
排序方式:
人类免疫缺陷病毒-1整合酶区标准突变株真核表达载体的构建及其应用
2014年
目的构建整合酶区标准突变株真核表达载体,并进行初步功能验证,为HIV-1表型耐药研究提供技术方法。方法采用点突变的方法,以质粒pNL4-3.Luc.R-E为模板,扩增整合酶区片段(含突变位点Y143、Q148),经过BamHI和XhoI双酶切,通过T4DNA连接酶将纯化的PCR产物与经过BglⅡ和XhoI双酶切的pcDNA6.2-LTRgagpolSl连接,命名为pcDNA6.2-LTRgagpol,经过GatewayTM技术的BP/LR反应,将LTRgagpol片段重组到pNL4-3-attR,构成整合酶区标准突变质粒。在聚乙烯亚胺(PEI)转染试剂介导下,与水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白质粒共转染HEK293细胞,得到HIV-1假病毒,应用整合酶抑制剂拉替拉韦与野生株假病毒进行表型耐药比较,将制备的病毒效价按4:1的比例感染HEK293细胞,同时加入拉替拉韦,终浓度为1μmol/L,感染48h后测荧光素酶报告基因。样本间抑制率比较采用单因素方差分析。结果带有整合酶区主要突变位点的HIV-l标准耐药株(pNL4-3-Q148R、pNL4-3-Y143H)构建成功。应用1μmol/L拉替拉韦进行表型耐药检测时,野生型病毒对拉替拉韦最为敏感,报告基因数值平均为1.72×10^3,Y143H耐药株(1.18×10。)和Q148R耐药株(2.82×10。)对拉替拉韦表现为耐药,对三者相对荧光素酶单位取对数值做统计学分析,野生株与Y143H耐药株相比差异有统计学意义(F=38.800,P=0.025),野生株与Q148R耐药株相比差异有统计学意义(F=174.355,P=0.006)。Y143H耐药株与Q148R耐药株相比,Q148R耐药株对拉替拉韦敏感性更低,差异具有统计学意义(F=22.551,P=0.042)。结论成功构建了带有整合酶区主要突变位点的HIV一1标准耐药株载体,并成功表达,为研究临床HIV-1标本表型耐药典定了基础。
徐树莹乔录新徐萌袁霖李庆丁渭石英陈德喜
关键词:HIV-1HIV整合酶抑制剂点突变病毒
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