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胚胎大鼠背根神经节神经元分离、纯化与培养被引量：2: 2010年; 目的建立一种简单、稳定、高效的胚胎大鼠背根神经节神经元原代培养方法。方法摘取14～16 d的胚胎大鼠背根神经节,采用0.25%胰蛋白酶加0.4%胶原酶II消化,制成单细胞悬液,接种于Neuralbasal培养基中,24h加入有丝分裂抑制剂阿糖胞苷纯化细胞,应用神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)进行免疫细胞化学染色,鉴定细胞纯度。结果体外培养的背根神经节神经元生长状态良好,可存活6周,纯度可达到(91.12±0.23)%。结论本实验方法简单、稳定、高效,可以获得高纯度的背根神经节神经元培养物。; 王士杰黄丽辉雷雳王鸿范尔钟李颖; 关键词：动物实验细胞培养

胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究被引量：5: 2010年; 目的探讨一种简便、快速、高效摘取胚胎大鼠背根神经节的方法。方法分别采用先剪除头部、四肢、腹部,后打开椎管的传统方法和直接固定打开椎管的方法摘取胚胎大鼠背根神经节,计算两种方法的用时和获得的神经节数量,并进行统计学比较。结果采用传统方法,每只胎鼠平均用时29.20±1.61min,平均获得20.40±1.17个神经节,每分钟可获得0.68±0.02个神经节,每个神经节平均用时1.44±0.01min;采用直接固定打开椎管法,每只胎鼠平均用时24.10±1.63min,平均获得30.50±0.97个神经节,每分钟可获得1.23±0.03个神经节,每个神经节平均用时0.79±0.01min,两种方法间的上述各项指标比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论直接固定打开椎管法能在更短时间内获得更多数量的背根神经节,操作简单,可为细胞培养奠定良好的基础。; 王士杰黄丽辉雷雳王鸿范尔钟李颖; 关键词：背根神经节椎管

胚胎大鼠背根神经节酶消化法的评价被引量：1: 2011年; 目的为胚胎大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元耳蜗植入建立优化的体外分离培养方法。方法①比较3种组合酶消化法对胚胎大鼠DRG神经细胞的分散度以及神经细胞存活时间的差异。实验组:木瓜蛋白酶、胶原酶II/胰蛋白酶、DNA酶I;对照组I:木瓜蛋白酶、胶原酶II/中性蛋白酶II、DNA酶I;对照组II:胶原酶II、胰蛋白酶。②通过激光共聚焦显微镜观察体外培养神经元神经烯醇化酶(neuronal speci?c enolase,NSE)、高分子量神经微丝(neuro?lament H,NF-H)的表达,比较不同酶消化法对神经元轴突长度的影响。结果 DRG神经细胞分散度分别为:实验组80%～90%,对照组I 60%～70%,对照组II 30%～40%;神经细胞存活时间:实验组(12.0±3.0)d,对照组I(7.5±1.5)d,对照组II(4.5±0.5)d。3种组合酶处理的神经元均有NSE和NF-H阳性表达,实验组轴突长度在培养第3、5、7天均明显长于另外两组,差异有统计学意义(F分别为32.612、6.093、9.334,P均<0.05),神经元轴突长度测量:实验组>对照组I>对照组II。结论木瓜蛋白酶、胶原酶II/胰蛋白酶、DNA酶I组合消化法对胚胎大鼠DRG神经细胞体外分离最为理想,可为基因修饰神经元耳蜗植入的实验提供大量的、存活时间长且活性好的细胞来源。; 王鸿张伟张伟黄丽辉雷雳矫健; 关键词：动物实验细胞培养

干细胞移植与感音神经性聋: 2009年; 绝大多数感音神经性聋是由于耳蜗感觉上皮和螺旋神经节神经元的退行性变导致的，通过干细胞移植来补充螺旋神经节神经元是治疗聋病的理想选择之一。随着干细胞研究的深入，给感音神经性聋的治疗带来了希望。本文就干细胞内耳移植与螺旋神经节神经元的修复方面的进展作一综述。; 刘大英雷雳; 关键词：听觉丧失

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国家自然科学基金(30772406)

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