国家高技术研究发展计划(2002AA206111)
- 作品数：11 被引量：151H指数：7
- 相关作者：李宁王莉莉戴蕴平樊宝良朱化彬更多>>
- 相关机构：中国农业大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所科技公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学一般工业技术医药卫生更多>>
- 人α-乳清蛋白基因的克隆及其在转基因小鼠中高效表达被引量：7
- 2004年
- 从粘粒文库中筛选出人α 乳清蛋白基因 ,构建 9 5kb的转基因表达载体 .利用显微注射的方法获得 6 8只F0 代小鼠 ,经PCR检测和DNA印迹分析证实有 8只小鼠 (4 ♂ ,4♀ )为整合人α 乳清蛋白基因的转基因阳性小鼠 ,整合率为 11 7% ,整合拷贝数在 1至 8之间 .利用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和蛋白质印迹分析 ,4只雌性F0 代转基因阳性小鼠全部表达了人α 乳清蛋白 .放射免疫测定法测定 ,含量分别为 0 6 2g/L、 0 4 8g/L、0 5 6 g/L、 3 2 1g/L ;同时测定F0 代 5 0号转基因公鼠的后代阳性母鼠 (5 0 2号 )乳样中人α 乳清蛋白含量也达到 1 0 3g/L ,证明由原代转基因公鼠遗传给后代的人α 乳清蛋白基因亦获得了稳定的表达 .所构建的人α 乳清蛋白转基因载体具有结构较小 ,表达量高 ,可以稳定遗传等优点 .为利用人α 乳清蛋白基因改善牛乳成分和品质奠定了基础 .
- 于舒洋曹更生樊宝良李宁段颖莉戴蕴平王莉莉
- 关键词：基因克隆转基因小鼠乳汁
- 利用体细胞核移植技术生产转基因牛被引量：32
- 2003年
- 通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚发育率为49.1％.选择第7天转基因囊胚17枚移入17头同期发情的受体牛子宫角内,共有5头受体牛妊娠,妊娠率为29.4％.经过正常的体内发育,有3头转基因克隆牛出生,产犊率为17.6％.PCR和Southern检测结果表明,3头转基因克隆牛的基因组中都整合有外源目标基因.并且,绿色荧光蛋白在转基因克隆牛的耳部皮肤组织以及从耳部皮肤组织分离出的成纤维细胞中均有表达.上述结果显示,通过体细胞核移植技术可以有效生产转基因牛;所构建的双标记选择载体可以有效筛选出转基因细胞和转基因克隆胚胎,应用于转基因克隆动物的生产,确保所培育的克隆动物均为转基因动物.
- 龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王莉莉王海平汤波刘颖李荣万荣黄银花李宁
- 关键词：体细胞核移植转基因绿色荧光蛋白
- 转基因小鼠乳腺表达人乳过氧化物酶的初步研究被引量：6
- 2005年
- 从人基因组PAC文库中筛选出人乳过氧化物酶(hLPO)基因,利用长片段PCR的方法获得hLPO基因5'端约3kb片段,通过酶切方法获得hLPO基因3'端约27kb片段,将这两部分拼接并克隆到乳腺特异性表达载体pBC1上,构建以山羊β-casein启动区指导的hLPO的转基因表达载体pBC1-hLPO。利用显微注射的方法获得28只F0代小鼠,经PCR检测和Southern杂交分析证实,有5只小鼠(4♂,1♀)为整合hLPO基因的转基因阳性小鼠,整合率为17.86%,整合拷贝数在1至5之间。利用SDS-PAGE凝胶电泳和Westernblot印迹分析F0、F1代共3只雌性转基因小鼠乳样,结果表明hLPO重组蛋白的特异条带不明显。
- 余珊珊王毅彰于舒洋李宁
- 关键词：转基因小鼠显微注射
- 体细胞克隆牛和转基因体细胞克隆牛的遗传学分析(英文)被引量：4
- 2004年
- 分析了来自同一细胞系的体细胞克隆牛甜甜、庆庆、浒娃及来源同一培养转基因体细胞系转基因体细胞克隆牛九妹、乐娃和 1个妊娠 8个月转基因流产胎牛 8C2以及随机抽取的 1头鲁西黄牛 (LX)、 1头褐斯坦牛 (HS)在 2 4个微卫星位点标记牛的基因型 .结果表明 2 4个多态位点均表现出多态 ,等位基因数为 1～ 5个 ,平均为 3 17个 .根据网上公布的数据 ,按其最高频率计算 ,甜甜、庆庆、浒娃、九妹、乐娃、 8C2与培养细胞系、转基因细胞系间匹配概率为 1 17× 10 -3 6,根据本研究观察到的数据计算 ,匹配概率为 1 90× 10 -2 3 ;而与随机抽取的 1头鲁西黄牛及褐斯坦牛的基因型分别在 2 3和2
- 黄银花徐公瑾杜志强胡晓湘张磊涂剑锋程雪波李宁
- 关键词：体细胞克隆转基因遗传学等位基因
- 利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白研究被引量：14
- 2008年
- [目的]研究利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白,为利用转基因动物生产药用或食用蛋白提供依据。[方法]对已获得的人乳铁蛋白转基因牛进行人工催乳,用乳成分分析仪分析了转基因对乳汁的影响,并利用放免法检测了重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中的表达。[结果]重组人乳铁蛋白在牛乳中获得了高效表达,表达水平为(3.429±0.417)mg/ml。通过转基因牛乳的乳成分分析发现,转基因牛乳与常乳在乳脂、总蛋白、乳糖和干物质的含量上没有明显变化。[结论]重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中获得了高效表达,为大规模生产重组人乳铁蛋白奠定了基础。
- 杨鹏华倪凤娥李宁
- 关键词：转基因
- 不同化学激活方法对山羊卵母细胞激活效果的研究被引量：15
- 2003年
- 激活是体细胞核移植技术的关键步骤。本研究对常用化学激活剂乙醇、钙离子载体A2 3187和离子霉素以及添加 6 二甲基氨基嘌呤 (6 Dimethylaminopurine ,6 DMAP)和放线菌酮 (cycloheximide ,CHX)对山羊卵母细胞的激活效果以及不同卵龄的卵母细胞激活后体外发育效果进行了比较。结果表明 :离子霉素处理组激活率显著高于乙醇和A2 3187处理组 (89.6 %vs 6 3.5 % ,6 8.7% ;P <0 .0 5 ) ;离子霉素 +6 -DMAP处理组激活率显著高于离子霉素 +CHX和离子霉素 +CHX +细胞松弛素D处理组 (90 .1%vs 5 8.9% ,6 3.7% ;P <0 .0 1) ;体外成熟 2 4、2 6、2 8h组桑椹胚率分别为 16 .0 %、2 0 .6 %和 33.3% ,30h组桑椹胚率下降 (13.8% )。以上结果说明 ,在本研究的激活条件下 ,山羊卵母细胞适宜的激活方法为 :成熟起始后 2 8h使用离子霉素和 6 DMAP进行联合激活。
- 敖红王海连正兴李宁夏国良
- 关键词：山羊卵母细胞
- 以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎被引量：35
- 2003年
- 利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株.分别以未转基因牛颗粒细胞和4种细胞系的转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.结果表明:(i)转基因与未转基因牛颗粒细胞的重组胚的囊胚发育率(44.6％vs 42.8％)、移植妊娠率(19％ vs 25％)差异不显著(P>0.05);(ii)比较4种类型转基因细胞的重组胚的囊胚发育率,发现胎儿输卵管上皮细胞(49.1％)和颗粒细胞(44.6％)最高,牛胎儿成纤维细胞(37.2％)次之,胎儿卵巢上皮细胞的重组胚囊胚发育率(22.5％)最低,三者之间差异显著(P<0.05).以上结果显示,供体细胞的转基因与否对牛克隆胚胎的体外和体内早期发育影响不明显;通过体细胞核移植技术,牛胎儿输卵管上皮细胞和颗粒细胞可以有效地生产牛转基因囊胚,并且绿色荧光蛋白作为一种无毒性作用的筛选标记,可用于转基因胚胎的筛选.
- 龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王海平王莉莉方昌阁万荣刘颖李荣李宁
- 关键词：转基因细胞核供体核移植绿色荧光蛋白囊胚克隆胚胎
- 供体细胞类型对体细胞克隆牛生产效率的影响被引量：20
- 2004年
- 建立了中国红系冀南黄牛颗粒细胞系(YGR)、Holstein奶牛颗粒细胞系(HGR)、Holstein奶牛不同个体的成年成纤维细胞系(AFB)以及Holstein奶牛同一个体的胎儿成纤维细胞系(FFB)和胎儿输卵管上皮细胞系(FOV).以上述不同类型的体细胞为核供体,进行了体细胞核移植,共成功培育出12头体细胞克隆牛.比较了不同类型供体细胞的重构胚的发育潜能,结果表明:(ⅰ)YGR和HGR的重构胚的囊胚发育率(33.2%vs35.1%)无显著差异(P>0.05),妊娠率分别为33.3%和30.2%,产犊率分别为16.7%和11.6%;(ⅱ)Holstein奶牛不同个体AFB的重构胚的囊胚发育率(27.9%vs39.4%)差异显著(P<0.05),妊娠率分别为36.2%和36.4%,产犊率分别为14.9%和27.3%;(ⅲ)Holstein奶牛同一个体的FFB和FOV的重构胚的囊胚发育率(37.9%vs41.5%)差异显著(P<0.05),妊娠率分别为45.7%和24.1%,产犊率分别为22.9%和10.3%.综合比较Holstein奶牛的4种体细胞(HGR,AFB,FFB和FOV)的重构胚的发育情况,结果显示:在体外发育阶段,FOV的重组胚的囊胚发育率(41.5%)最高,FFB(37.9%)和HGR(35.1%)次之,AFB(29.4%)最低,三者之间差异显著(P<0.05).在体内发育阶段,4种供体细胞克隆胚胎的妊娠率分别为30.2%,36.2%,45.7%和24.1%,产犊率分别为11.6%,17.2%,22.9%和10.3%.
- 龚国春戴蕴平朱化彬王海平王莉莉李荣万荣刘颖李宁
- 关键词：体细胞克隆供体细胞成纤维细胞系重构胚核移植
- 外源激素催乳对小牛泌乳的影响被引量：1
- 2009年
- 利用外源激素刺激小牛泌乳的研究鲜有报道。研究对8月龄小牛进行外源激素注射,诱导小牛泌乳,并对催乳乳汁的乳脂、总蛋白、乳糖、干物质含量进行了分析。结果表明外源激素能有效刺激小牛泌乳,乳汁成分没有发生明显变化。这对快速鉴定转基因牛是否能生产活性蛋白具有一定意义。
- 杨鹏华倪凤娥李宁
- 关键词：激素催乳乳成分
- 转基因动物应用的研究现状与发展前景被引量：22
- 2005年
- 转基因动物的迅速发展使医药、农业、环保、生物材料等领域发生了巨大变革。综述了国际和国内转基因动物在这些领域中的研究历史、现状和产业化进展,同时也预测了转基因动物应用的发展前景以及给社会带来的深远影响。
- 张然徐慰倬孔平许红韬李宁
- 关键词：转基因动物生物医药农业生物材料环保
