上海市自然科学基金(044119659)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：卢奕褚仁远邹俊莫晓芬杨晋更多>>
- 相关机构：复旦大学上海交通大学附属第六人民医院中国科学院上海生命科学研究院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究
- 2008年
- 目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近"S"形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。
- 邹俊卢奕褚仁远
- 关键词：晶状体上皮细胞细胞培养人胚
- 风疹病毒感染人胚晶状体上皮细胞对热休克蛋白及其转录因子表达的影响
- 2010年
- 目的观察风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后对热休克蛋白及其转录因子表达的影响。方法风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后3、7、14 d,采用半定量Real-time PCR法检测受风疹病毒R16株感染的人胚晶状体上皮细胞热休克蛋白(heat shock protein 70,HSP70)及其转录因子(heat shock transcription factor 4,HSF4)的mRNA表达水平;Western blot方法检测HSP70的表达;利用DNA测序的方法检测病毒感染的人胚晶状体上皮细胞HSF4的DNA序列变化。结果风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后3、7 d的细胞内HSP70 mRNA和HSP70蛋白水平有所增高,而热休克蛋白转录因子HSF4的mRNA水平有所下降。病毒感染人胚晶状体上皮细胞14 d的细胞DNA中HSF4序列无明显变化。结论风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞可以直接诱导HSP70的表达增加,可能在保护细胞免受病毒感染损伤方面具有一定意义。热休克蛋白转录因子HSF4在转录水平对其有负调控作用,但是人胚晶状体上皮细胞受风疹病毒感染后的14 d内其细胞中HSF4的DNA序列不受影响。
- 邹俊卢奕褚仁远
- 关键词：风疹病毒热休克蛋白
- 风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的初步研究
- 2008年
- 目的观察风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法利用相差显微镜、透射电子显微镜、免疫细胞化学技术观察风疹病毒R16株在人胚晶状体上皮细胞中的形态学及生长特性。结果风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后,细胞不产生明显的病变效应。受病毒感染的人胚晶状体上皮细胞生长速度较慢,10d后可在细胞质内观察到呈不规则球形、由单层脂质膜包绕、直径60～80nm的病毒颗粒,包括致密核心和无致密核心两种颗粒。而在胞核中未发现病毒颗粒。结论风疹病毒R16株能在人胚晶状体上皮细胞中增殖,为进一步研究风疹病毒感染后先天性白内障的发生机制打下基础。
- 邹俊卢奕褚仁远
- 关键词：风疹病毒胚胎晶状体上皮细胞形态学
- 绿色荧光蛋白和胸苷激酶基因共表达的慢病毒载体的构建及表达被引量：4
- 2007年
- 目的构建人巨细胞病毒广谱启动子（CMV）调控的增强绿色荧光蛋白（EGFP）和自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—tk）共表达的慢病毒载体，获得高效的慢病毒转基因平台。方法采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法，将HSV-tk基因插入慢病毒载体Lenti-ires-EGFP中，构建广谱启动子CMV调控的HSV-tk和EGFP共表达的慢病毒载体（Lenti—CMV-HSV-tk-EGFP）。构建成功后的慢病毒三质粒系统通过磷酸钙沉淀法转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞-293T，28h后收集病毒颗粒，测定病毒滴度，并感染人晶状体上皮细胞株、视网膜母细胞瘤细胞株、神经母细胞株、Hela细胞等，荧光显微镜下观察EGFP的表达。RT-PCR检测HSV-tk与EGFP的表达。结果构建的慢病毒载体Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP能高效转染各类细胞并持续稳定的表达。RT-PCR的结果表明Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP感染细胞能共表达HSV-tk和EGFP，利用该慢病毒载体系统转染人晶状体上皮细胞株时，在复合感染度（MOI）为100时，转染效率接近100％，且传代培养6个月后仍能维持高转染效率。结论成功构建了能转染多种细胞的TK自杀基因和EGFP共表达的慢病毒载体，为眼科自杀基因治疗的实验研究提供高效稳定的转基因技术平台。
- 杨晋卢奕郭礼和刘天津莫晓芬
- 关键词：慢病毒属发光蛋白质类单纯疱疹病毒属胸苷激酶
- 慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷体系抑制人晶状体上皮细胞的研究被引量：5
- 2007年
- 目的探讨慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷体系（HSV—tk／GCV）对人晶状体上皮细胞（LECs）系的杀伤效应的机制。方法HSV—tk基因和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因共表达的慢病毒感染细胞为试验组，仅表达EGFP的慢病毒感染细胞和正常细胞为对照组。流式细胞仪检测病毒的转染效率，荧光显微镜观察及基因组PCR和RT-PCR检测基因在LECs内表达，DNA ladder和电镜观察该系统对LECs的杀伤作用，检测HSV—tk／GCV系统的浓度时间依赖性和旁观者效应。结果HSV—tk整合入LECs并高效表达。10～25μg／ml的GCV能明显诱导转染HSV—tk的细胞凋亡或坏死，且随GCV浓度升高和作用时间延长效应增强，且存在明显的旁观者效应，而对照组细胞无显著改变。当GCV浓度〉25μg／ml，对照组细胞的增殖也被显著抑制。结论GCV可高效杀伤表达HSV-tk的LECs，且旁观者效应显著增强了HSV—tk／GCV系统的杀伤效果。HSV—tk和EGFP共表达的慢病毒载体能高效稳定转染LECs。
- 杨晋卢奕郭礼和刘天津莫晓芬
- 关键词：慢病毒属发光蛋白质类单纯疱疹病毒属胸苷激酶上皮细胞
