国家自然科学基金(30271444)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张海鹏宋晓宇于艳秋丁旭东郑宁宁更多>>
- 相关机构：中国医科大学沈阳医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低氧培养小鼠肝细胞膜蛋白的蛋白质组学研究被引量：2
- 2011年
- 目的:采用蛋白质组学方法研究低氧条件下培养小鼠肝细胞膜蛋白表达的变化情况并探讨其病理生理学意义。方法:直接消化法分离C57BL/6小鼠肝细胞,于低氧条件下(5%CO2,4.5 mg/L O2)培养8 h后提取膜蛋白,然后采用双向电泳法分离差异表达的蛋白,凝胶银染后切取差异蛋白点进行MALDI-TOF质谱检测,对获取的数据采用Mascot软件在NCBInr数据库内检索,并采用Western blottng方法验证差异蛋白的表达。结果:发现低氧组小鼠肝细胞膜蛋白图谱中有28个蛋白点表达量与对照组有显著差异(P<0.05),根据数据库检索结果,鉴定了低氧时低表达的膜蛋白9个和低氧时高表达的膜蛋白7个。Western blotting验证结果与蛋白质组学分析一致。结论:低氧时,抑素、细胞色素b-c1复合体亚单位1和血红素结合蛋白p22HBP可能在细胞感受外界环境的氧变化及随后的细胞内低氧信号传递的过程中起到了非常重要的作用。
- 孙鲁宁张静萍孙娇张海鹏
- 关键词：低氧膜蛋白质蛋白质组
- 靶向TNF-α RNA干扰重组体的构建及序列分析被引量：3
- 2009年
- 目的:利用RNA干扰技术,筛选出可以高效、特异性抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的小发夹状RNA(shRNA)片段,设计并构建质粒重组体,进行序列分析,为探索TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。方法:原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,15%DMEM培养液调细胞浓度为2×107cells/L接种于6孔板,3 mL/well;细胞用脂多糖(LPS)激活,ELISA法测不同时间培养上清中TNF-α的浓度;将针对TNF-α基因的5段shRNA干扰片段的表达框经PCR扩增、纯化后,与转染试剂混合转染入巨噬细胞,细胞用LPS激活24 h后ELISA法测培养上清中TNF-α的浓度、RT-PCR法测细胞TNF-α mRNA的表达;将最有效抑制TNF-α表达的干扰片段克隆入质粒载体,转化DH5α感受态菌株,提取质粒,进行测序分析。结果:LPS刺激巨噬细胞24 h后,细胞分泌TNF-α达高峰;转染了干扰序列1的细胞培养上清中TNF-α浓度较对照组下降最明显(P<0.05),达59.46%,TNF-α mRNA的表达较对照组被抑制了61.20%;将干扰序列1DNA序列克隆到载体上,经测序鉴定确实为所需序列。结论:成功筛选出靶向TNF-α基因的shRNA干扰片段并构建质粒,可进一步利用克隆所得到的shRNA干扰TNF-αmRNA的表达,为TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。
- 宋晓宇李铁钢于艳秋张海鹏
- 关键词：肿瘤坏死因子RNA干扰
- RNA干扰对小鼠脾淋巴细胞分泌TNF-α的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨小干扰RN(A siRNA)对小鼠脾淋巴细胞分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抑制效果。方法:体外PCR扩增合成针对TNF-α靶位点的DNA表达盒,转染经脂多糖(LPS)激活的小鼠脾淋巴细胞,在细胞内源性RNA聚合酶III作用下转录形成siRNA,诱发目标mRNA的降解。于转染后48 h收集细胞培养上清。TNF-α浓度用ELISA方法测定。结果:与空白对照组和无关干扰组相比,干扰组TNF-α分泌量明显降低(P<0.05),抑制率约为16%。结论:RNA干扰技术可以在原代培养的小鼠脾淋巴细胞中发挥特异性干扰作用,产生抑制TNF-α分泌的效果,为TNF-α的基因治疗开拓新途径。
- 郑宁宁丁旭东宋晓宇杜莉莉孙杰金玉楠张海鹏
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA转录后基因沉默肿瘤坏死因子Α
- RNA干扰抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL -1α被引量：1
- 2007年
- 目的:确定针对IL-1α的siRNA在细胞内与其具有同源互补序列的靶标位点结合后,特异性降解IL-1α的mRNA,从而抑制其表达的效果。方法:体外PCR扩增合成针对IL-1α靶位点的DNA表达盒,纯化后转染经LPS激活的小鼠脾淋巴细胞,在细胞内源性RNA聚合酶Ⅲ作用下转录形成siRNA,诱发目标mRNA的降解。于转染后48h收集细胞培养上清。用ELISA法测定IL-1α浓度。结果:干扰组IL-1α分泌量明显低于对照组和无关干扰组(P<0.05),抑制率约为15%。结论:RNA干扰技术可以在原代培养的小鼠脾淋巴细胞中发挥特异性干扰作用,产生抑制IL-1α分泌的效果,为IL-1α的基因治疗开拓了新途径。
- 郑宁宁于艳秋宋晓宇丁旭东张海鹏
- 关键词：RNA干扰转录后基因沉默白细胞介素1
- 细胞因子浓度改变在高压氧抗小鼠急性移植物抗宿主病中的作用
- 2004年
- 目的 :观察高压氧 (HBO)对异基因骨髓移植小鼠血清IL 2 ,TNF α ,IL 4及IL 10浓度的影响 ,探讨HBO防治急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的机制。方法 :受鼠移植前接受高强度预处理。HBO组移植前 3d及移植后 2周接受高压氧处理。 2周后用ELISA法检测受鼠血清细胞因子的浓度。结果 :对照组均出现aGVHD ,而HBO组没有出现aGVHD。HBO组血清IL 2和TNF α浓度均明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;而IL 4和IL 10则明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :HBO可有效预防异基因骨髓移植小鼠出现aGVHD ,其机制可能与HBO显著降低受鼠血清IL 2和TNF α浓度及升高IL 4和IL 10浓度有关。
- 赵成海王东宁张海鹏
- 关键词：高压氧急性移植物抗宿主病骨髓移植细胞因子
