广州市医药卫生科技项目(201102A212025)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- Gateway非放射标记法构建小鼠破骨细胞前体细胞cDNA文库被引量：2
- 2012年
- 背景：作者前期研究发现一个在破骨细胞形成中起关键作用的基因,其在细胞之间相互识别及膜融合中发挥关键作用。目的：采用Gateway的非放射标记技术构建小鼠破骨细胞早期形成细胞的cDNA基因文库,并检测文库质量。方法：采集C57BL/6小鼠长骨骨髓,收集贴壁的骨髓单核细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子和RANKL诱导形成破骨细胞,在巨噬细胞开始融合至形成破骨细胞的不同阶段开始收集细胞,提取总RNA,用CloneMinerTMcDNA文库构建试剂盒,采用非放射标记方法构建小鼠破骨细胞全长cDNA文库。结果与结论：构建的小鼠骨髓巨噬细胞cDNA文库滴度为2.15×107CFU/mL,库容量为10.5×107CFU,重组率为100%,重组子插入cDNA平均片段大小约为1.7kb,范围为0.1~5.8kb。表明非放射标记法构建同样可以构建小鼠骨髓巨噬细胞全长cDNA质粒文库,避免了放射性物质的接触,且文库质量良好。
- 张玉平王顺清王彩霞许艳丽谢健晋毛平
- 关键词：小鼠破骨细胞
- 小鼠破骨细胞前体细胞酵母双杂交筛选文库的构建
- 2011年
- 目的为研究巨噬细胞(Macrophage,Mφ)细胞在形成破骨细胞时细胞膜膜蛋白的表达及相互作用机制。方法C57BL/6小鼠长骨骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导形成破骨细胞,在Mφ细胞开始融合至形成破骨细胞的不同阶段开始收集细胞,提取总RNA,用CloneMiner TM cDNA文库构建试剂盒,采用Gateway非放射标记方法构建小鼠破骨细胞前体细胞全长cDNA文库及酵母表达文库,并将其转化酵母,观察其在酵母中的表达情况。结果构建的小鼠骨髓破骨细胞前体细胞cDNA入门文库滴度为6×106cfu/ml,库容量为3.5×107cfu,重组率为100%,重组子插入cDNA平均片段大小约为1.76kb。利用此入门文库构建的酵母表达文库,重组率100%,插入片段平均长度为1.82kb,绝大多数(87.5%)插入片段在1kb以上,酵母转化实验证实其可在酵母中完整表达。结论 Gateway非放射标记法构建的小鼠骨髓破骨细胞前体细胞cDNA入门文库和酵母表达文库均符合高质量文库要求,且可避免放射性物质的接触。
- 张玉平毛平王顺清陈晓燕王彩霞许艳丽杜庆华谢健晋邓婷芳黎宇苗
- 关键词：小鼠破骨细胞
