国家自然科学基金(30271450)
- 作品数：10 被引量：39H指数：3
- 相关作者：曹江郑树叶景佳曾苏曾蕾更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院浙江大学浙江大学医学院附属邵逸夫医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HAI-1过表达对SW620细胞体外生长和运动能力的影响被引量：3
- 2005年
- 肝细胞生长因子激活因子抑制因子1(hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1, HAI-1)能有效抑制肝细胞生长因子激活因子(hepatocyte growth factor activator,HGFA)和丝氨酸蛋白酶Matriptase的活性,并可通过对HGFA和Matriptase活性的调控参与HGF/c-Met信号传导途径。为了解HAL-1在肿瘤细胞的生长和运动中的作用,本研究将人HAI-1基因全长cDNA克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,并转染人肠癌SW620细胞,用Western blot验证了转染细胞中HAI-1的表达情况,并分别利用生长曲线、软琼脂集落形成、穿膜运动和扩散运动测定等方法检测了HAI-1 过表达对SW620细胞生长和运动能力的影响。生长曲线和软琼脂集落形成测定都显示出HAI-1 转染细胞与对照组相比差异不十分明显。穿膜运动和扩散运动测定则均显示了HAI-1过表达对细胞运动能力有明显的抑制。因此,HAI-1的过表达虽然在体外对肿瘤细胞生长影响较小,但可以抑制肿瘤细胞的运动迁移能力。
- 曹江叶景佳
- 关键词：过表达体外生长全长CDNA克隆PCDNA3
- HAI-1基因不同功能域的原核表达载体构建及融合蛋白表达
- 2006年
- 目的:分段克隆1型肝细胞生长因子激活剂抑制因子(HAI-1)基因的功能域并在大肠杆菌中表达,为进一步研究HAI-1的生物学功能打下基础。方法:针对HAI-1的不同功能域设计相应的5对引物,分别扩增KD1、KD1+LDLR、KD2、LDLR+KD2和KD1+LDLR+KD2片段。将PCR产物克隆至pGEM-TEasy载体中并经测序鉴定。将5个cDNA片段亚克隆至具有6个组氨酸标签(His-Tag)的原核表达载体pIVEX2.3-MCS中。以上述表达不同功能域的载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物以Westernblot进行鉴定,并进一步通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的KD1+LDLR+KD2融合蛋白。结果:成功地构建了HAI-1各功能域基因片段的原核表达载体。Westernblot分析证实,在大肠杆菌BL21(DE3)中分段表达了5种HAI-1不同功能域的His-Tag融合蛋白,并通过亲和层析法纯化到了相对分子质量为22200的KD1+LDLR+KD2融合蛋白。结论:重组质粒pIVEX2.3-MCS/HAI-1能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的融合蛋白可用于研究HAI-1不同功能域的生物学作用。
- 曾蕾曹江
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 自噬与非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的研究进展被引量：3
- 2016年
- 肺癌是目前世界上发病率和死亡率均居首位的恶性肿瘤,其中大多数是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。在对NSCLC的治疗中,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)的应用已成为靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的重要治疗手段。但由于获得性耐药问题的出现,使得这类靶向药物的作用受到限制。近年来大量研究表明,除了基因突变等分子水平的因素外,细胞自噬(autophagy)在非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向药物耐药中也发挥了重要的作用。该文重点就自噬与非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向药物耐药的研究进展进行分析,旨在为解决自噬相关的EGFR-TKI耐药提供更多思路。
- 谢雨琼李春春曹江
- 关键词：非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂获得性耐药自噬
- 丝氨酸蛋白酶SNC19及其抑制因子在胃癌中的表达被引量：8
- 2004年
- 曾蕾曹江张行
- 关键词：胃癌肝细胞基因表达癌组织
- 抑制PAR4表达对肠癌细胞SW620药敏性的影响
- 2015年
- 目的 探讨抑制PAR4表达对肠癌细胞SW620药敏性的影响.方法 采用MTT法测定SW620细胞、空载体转染细胞SW620/pcDNA3.1（＋）和针对人PAR4的人工microRNA表达载体转染细胞SW620-ml、SW620-m2对肠癌临床常用化疗药物5-氟尿嘧啶和顺铂的IC50,分析抑制PAR4的表达对SW620细胞药物敏感性的影响.结果 与SW620和SW620/pcDNA3.1（＋）两组对照细胞相比,PAR4表达受抑制的SW620-ml、 SW620-m2两组细胞对5-氟尿嘧啶的IC50均显著升高（p＜0.01）,对顺铂的IC50亦有明显升高（P＜0.01,P＜0.05）.结论 抑制肠癌SW620细胞PAR4的表达将增加其对5-氟尿嘧啶和顺铂的耐受,提示以PAR4为靶点的肠癌联合药物治疗研究需要综合考虑用药的合理性.
- 韩娜曹江
- 关键词：肠癌药敏
- HAI-1蛋白在人正常及肿瘤组织中的表达研究被引量：1
- 2008年
- 目的:肝细胞生长因子激活物抑制因子(Hepatocyte growth factor activator inhibitor 1,HAI-1)是一类细胞膜相关的Kunitz型丝氨酸蛋白酶的抑制因子,它可强效抑制多种丝氨酸蛋白酶的活性,包括:肝细胞生长因子的激活因子(HGFA)、matriptase,、hespsin、组织激肽释放酶和胰蛋白酶。其中,HGFA、matriptase和hepsin能激活作为酪氨酸激酶MET受体配体的肝细胞生长因子(HGF),研究显示HAI-1可能在肿瘤中发挥多方面的作用,因此检测HAI-1蛋白在人正常及肿瘤组织中的表达,分析与大肠癌临床病理的相关性,为进一步研究HAI-1在肿瘤的发生和发展中可能的作用及机制提供资料。方法:应用免疫组化方法,用抗HAI-1单克隆抗体检测HAI-1蛋白在人正常及肿瘤组织中的表达水平,并结合大肠癌患者的临床病理资料,统计分析HAI-1在大肠癌组织中的表达与其相关性。结果:HAI-1在各种上皮组织和/或相应的肿瘤组织中有不同程度表达,在38对大肠癌及其癌旁(正常)组织中大肠粘膜上皮和肿瘤组织表达较高,大肠腺体表达较低(P<0.001),HAI-1蛋白的表达水平与总共52例大肠癌的组织分化程度正相关(P<0.05),与大肠癌的分期及淋巴结转移无显著相关性。结论:HAI-1可能在正常上皮细胞分化以及大肠癌的分化中发挥重要的作用,并可能为上皮细胞分化成熟的一个标志。
- 程海霞曹江吴晴郑树
- 关键词：分化
- K562耐药细胞的建立及相关蛋白表达改变的研究被引量：17
- 2003年
- 为研究肿瘤细胞发生多药耐药后蛋白整体水平表达的改变,将K562细胞与阿霉素(ADR)共同培养,逐渐增加药物浓度,最后建立耐阿霉素的细胞K562/ADR株。MTT法检测阿霉素(ADR)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)和长春新碱(VCR)对K562和K562/ADR细胞的半数抑制率(IC_(50))。利用蛋白质组学技术,通过双向凝胶电泳分离K562和K562/ADR细胞的总蛋白,银染显色,分析差异蛋白,对部分蛋白点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析飞行时间质谱法得肽质量指纹图谱,用AutoMS-Fit软件查询NCBInr数据库鉴定蛋白质。结果表明K562细胞经ADR诱导后出现多药耐药现象,ADR、DDP、5-FU和VCR对K562/ADR细胞的IC_(50)明显高于K562。将K562和K562/ADR的双向电泳图谱进行差异比较,初步鉴定仅在K562/ADR图谱上出现的蛋白是一些与细胞分裂、基因转录有关的蛋白质。这些蛋白的变化与耐药细胞的特性相关,可能与临床化疗的多药耐药现象有联系。
- 王以曹江曾苏
- 关键词：双向凝胶电泳肿瘤细胞多药耐药蛋白阿霉素
- GST-HAI-1融合蛋白的表达及抗人HAI-1单克隆抗体的制备被引量：6
- 2004年
- 制备抗人肝细胞生长因子激活物抑制因子 (HAI 1 )单克隆抗体 ,为对HAI 1进行进一步的研究打下基础。将人HAI 1cDNA分段克隆 ,构建GST HAI 1融合蛋白原核表达载体 ,转化大肠杆菌后加IPTG诱导融合蛋白表达 ,经制备型SDS PAGE法分离表达的GST HAI 1融合蛋白 ,通过割胶、电洗脱回收融合蛋白 ,并以此为抗原免疫BALB c小鼠 ,应用细胞融合技术制备产生抗人HAI 1单克隆抗体的杂交瘤 ,以ELISA、Westernblot和免疫组织化学染色进行鉴定。最终获得抗人HAI 1单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC6 ,产生的单克隆抗体可特异性地与表达的GST HAI 1融合蛋白反应 ,并可识别大肠组织中的膜型及脱落型HAI 1蛋白。该单克隆抗体的制备成功 ,为深入研究HAI
- 程海霞曹江沈建根郑树
- 关键词：融合蛋白单克隆抗体
- 蛋白酶活化受体与肿瘤被引量：2
- 2009年
- 蛋白酶活化受体(protease-activated receptors,PARs)是一类独特的具有7个跨膜区的G蛋白偶联受体(G protein-coupled recepor),能够被特定的蛋白酶活化,进而通过其偶联的G蛋白调控相应的基因表达。在包括脉管、神经、胃肠、气管和皮肤等各种组织器官正常生理及病理状态下,PARs的表达会发生变化。近年研究表明在一些肿瘤组织中也存在PARs表达水平的变化,并且可以影响到肿瘤的发生、发展及侵袭和转移等肿瘤细胞的恶性生物学行为。对PARs与肿瘤的关系进行系统研究将丰富人们对肿瘤诊断治疗的相关知识,具有重要的意义。
- 张盛洁曹江
- 关键词：肿瘤肿瘤侵润肿瘤转移
- 蛋白酶活化受体4在肿瘤中的作用被引量：2
- 2016年
- 蛋白酶活化受体4(protease-activated receptor 4,PAR4)是蛋白酶活化受体家族成员之一,其N-端胞外区能够被特定的蛋白酶裂解,暴露出的新的N-末端可作为一种独特的配体(tethered ligand,TL)结合并激活自身受体,进而通过其偶联的G蛋白调控相应的下游信号通路。研究表明,PAR4在不同的恶性肿瘤可能呈现截然不同的作用。在肝癌、结肠癌、乳腺癌、软骨肉瘤等组织中表达上调,在胃癌、肺癌等组织中表达下调,说明其可能在肿瘤细胞的发生发展、侵袭转移中通过不同的途径发挥作用。随着PAR4与肿瘤的关系研究的深入,将对其在恶性肿瘤中的作用和机制有更明确的认识,为进一步的临床肿瘤诊断治疗提供更多的思路和依据。
- 吴凌燕叶景佳曹江
- 关键词：肿瘤蛋白酶抑制剂信号通路
