国家自然科学基金(30271457)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学西安交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备被引量：4
- 2005年
- 目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载体中。经过温度诱导获得restin表达蛋白。利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清。以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布。结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000。将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Westernblot检测其效价为1∶800。间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内。结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件。
- 路凡杨辉王孝功蒲勤李毅赵文明赵忠良
- 关键词：抗血清间接免疫荧光
- 全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞MAGE家族分子表达的影响被引量：1
- 2006年
- 研究全反式维甲酸(ATRA)在诱导乳腺癌MCF-7细胞分化和凋亡过程中黑色素瘤相关抗原基因(MelanomaAssociatedAntigen,MAGE)家族分子的表达水平的变化,从而为其功能研究提供线索。六孔培养板培养乳腺癌MCF-7细胞至对数生长期,给以终浓度为10-6mol/L的ATRA的刺激,于不同时间点(0h,12h,18h,24h,36h,48h)收集细胞,RT-PCR检测MAGE家族中(MAGE-A1、MAGE-C1、MAGE-D1、Necdin)分子的表达水平。结果ATRA诱导不同时间的MCF-7细胞MAGE家族分子表达水平呈现MAGE酸性亚家族(Ⅰ型抗原)表达逐步下调,而MAGE碱性亚家族(Ⅱ型抗原)表达逐步上升的趋势。说明MAGE家族酸性和碱性分子均参与ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡,而且可能发挥作用是相反的。
- 姚允怡杨国栋路凡雷初朝于芳黄博卢兹凡药立波
- 关键词：全反式维甲酸乳腺癌MCF-7细胞细胞分化
- p53对restin基因转录表达的调控作用被引量：1
- 2006年
- restin基因是Zhu等人从全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导肿瘤细胞分化时克隆得到的一种黑色素瘤抗原相关基因．前期研究表明,该基因与细胞周期阻滞有关．由于p53在细胞增殖调控中占据重要地位,并且与维甲酸具有诱导关系,因此本研究试图揭示维甲酸诱导restin基因表达是否与p53有关．将p53转染真核细胞,研究restin与p53的表达关系．结果表明p53能诱导restin基因转录增加．进一步分析发现,restin基因5′端上游约2 kb基因组序列中存在p53蛋白结合位点．扩增该序列构建荧光报告系统,检测到该报告系统可以接受维甲酸的诱导调控．在此基础上,研究p53对缺失p53结合位点的截短体报告质粒和p53结合位点突变后的报告质粒的作用,结果显示p53调控restin基因的表达与该基因上游序列区中的p53结合位点无关,推测p53对restin基因的表达调控可能还存在其他分子的相互作用．
- 王瑞华路凡傅海燕杨国栋吴有盛卢兹凡赵文明赵忠良
- 关键词：RESTINP53全反式维甲酸
- 黑色素瘤相关抗原家族新基因restin的组织表达谱被引量：3
- 2006年
- Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组织mRNA的Multiple TissueNorthern(MTN)膜和含76种成人、胎儿及常用细胞系mRNA的Multiple Tissue Expression(MTE)Array膜进行杂交分析,同时利用地高辛标记探针对11种常见肿瘤组织进行原位杂交检测.结果显示,MTN膜杂交中,12种组织显示均一杂交条带,约1.8 kb,提示该基因可能不存在剪接变异体;MTE膜杂交中,正常组织中均有不同程度的表达,但在肿瘤细胞系中均低表达或者不表达;原位杂交的结果显示,在8种恶性肿瘤组织中均不表达,而在3种良性肿瘤组织中呈现较低的表达.结果提示,该基因在正常组织中的表达明显高于肿瘤组织和肿瘤细胞系,完全不同于其它MAGE-A、B、C的组织表达方式.结合该基因在维甲酸诱导分化的肿瘤细胞中高表达,推测restin可能与正常细胞的分化、增殖有关.
- 路凡胡沛臻傅海燕赵文明赵忠良
- 关键词：杂交
- 肿瘤坏死因子α对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激对新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其机制。方法:采用消化法培养新生SD大鼠的CFs。实验分为4组,即5、10和20μg/L TNF-α处理组及空白对照组。将CFs培养36 h后,用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖;分别用半定量RT-PCR和Western blot技术检测在5μg/L和10μg/L TNF-α刺激下细胞周期蛋白D1(CyclinD1 mRNA及其蛋白)表达的变化。结果:随着TNF-α浓度的增高,MTT比色法检测的A490值呈明显递增趋势,其中5、10及20μg/L组的A490值,分别为0.417±0.011、0.622±0.015和0.602±0.013,与对照组(0.235±0.013)相比,有显著差异(P<0.05)。RT-PCR和免疫印迹检测表明,以5μg/L和10μg/L TNF-α刺激36 h后,CyclinD1 mRNA(0.706±0.113,1.698±0.135)和其蛋白(1.270±0.168,2.749±0.170)的水平均明显高于对照组CyclinD1mRNA(0.192±0.039)和蛋白(0.658±0.101)的表达水平(均P<0.01)。结论:TNF-α可通过上调CyclinD1的表达促进心肌成纤维细胞增殖,这可能为应用TNF-α信号通路抑制剂进行抗心肌纤维化治疗提供实验依据。
- 张杰杨国栋卢兹凡
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α心肌成纤维细胞周期蛋白D1增殖
