国家自然科学基金(30300455)
- 作品数：9 被引量：60H指数：4
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- 三氧化二砷诱导线粒体通透性转变孔道开放的机制研究被引量：21
- 2006年
- 背景与目的:线粒体通透性转变孔道(permeabilitytransitionpore,PTP)是线粒体释放细胞色素c和凋亡诱导因子的主要途径,亚砷酸盐可能通过PTP影响细胞凋亡,为了揭示其诱导PTP开放的机制,本实验研究了Ca2+介导的线粒体Ca2+释放(Ca2+-inducedCa2+releasefrommitochondria,mCICR)在As2O3介导的PTP开放及细胞色素C释放中的作用。方法:提取大鼠肝线粒体。通过紫外分光光度仪检测As2O3作用下线粒体的膨胀,测定线粒体PTP的开放状态;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测As2O3作用下测试体系内Ca2+浓度的变化引起的吸光度值的变化,以反映线粒体Ca2+的转运(即mCICR)情况;Westernblot检测线粒体上清液中细胞色素c的含量,反映线粒体释放细胞色素c的情况。结果:10μmol/LAs2O3和低浓度Ca2+不能引起PTP开放和细胞色素c释放,10μmol/LAs2O3和高浓度Ca2+诱导PTP开放和细胞色素c释放;当抑制mCICR时,As2O3和Ca2+对PTP开放和细胞色素c释放的作用完全抑制。结论:As2O3介导的PTP开放和细胞色素c释放依赖于mCICR。
- 马晓冬乔东访田雪梅晏芳马安德
- 关键词：白血病AS2O3钙转运线粒体细胞凋亡
- 白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡被引量：13
- 2006年
- 目的研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodamine123和TMRE标记细胞线粒体膜电位(ΔΨ),并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇(≤25 μmol/L)对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇(>25μmol/L)显著地抑制HepGZ细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性(F=18．532,P<0．05);流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0．05);白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。
- 马晓冬晏芳马安德王慧君
- 关键词：白藜芦醇细胞凋亡HEPG2细胞线粒体膜电位
- 白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡中线粒体差异蛋白鉴定被引量：2
- 2017年
- 文中分离提取白藜芦醇处理的HepG2细胞线粒体蛋白质,以未处理HepG2细胞为对照,利用双向电泳技术分离差异蛋白,飞行时间质谱分析鉴定差异蛋白点.初步分析鉴定了4个显著性差异蛋白,其中驱动蛋白和着丝粒相关蛋白CENP-E在白藜芦醇处理的HepG2细胞中表达降低,证明白藜芦醇对细胞周期有调节作用;线粒体加工肽酶表达降低,线粒体核糖体蛋白L7/L12表达升高,说明白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡与其影响线粒体功能有关.
- 欧单凤陈春霞马晓冬田雪梅
- 关键词：白藜芦醇HEPG2细胞线粒体蛋白质组
- 白藜芦醇对人肝癌HepG2细胞周期影响的实验研究被引量：10
- 2009年
- 目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对体外培养的人肝癌细胞(HepG2)细胞周期分布的影响,为Res抗癌作用提供实验依据。方法:人肝癌细胞系HepG2细胞经不同浓度Res(0、25、50、100μmol/L)培养24、48、72 h。在相差显微镜下观察细胞的形态变化。将作用于Res的细胞经PBS洗涤,70%冷乙醇固定,PI染色,流式细胞仪检测(FCM)细胞周期时相分布以及细胞周期素蛋白依赖性激酶CDK2,周期素Cyclin E水平的变化。结果:白藜芦醇可抑制肝癌HepG2细胞增殖,其作用具有一定的时间和浓度依赖性,伴随细胞周期分布变化,G0/G1期比例下降,S期、G2/M期比例上调,且与对照组相比,实验组CDK2及Cyclin E表达增加。结论:白藜芦醇可能通过影响CDK2及Cyclin E的活性使HepG2细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌HepG2细胞的增殖。
- 李科田雪梅王美芝
- 关键词：白藜芦醇细胞周期HEPG2
- 白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡中线粒体形态功能改变被引量：1
- 2009年
- 目的:研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体形态功能的改变。方法:采用AnnexinV-FITC/PI标记结合流式细胞仪测定白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的作用;电子显微镜观察白藜芦醇处理8h、12h和24h后线粒体的超微结构变化;rhodamine123标记结合流式细胞仪观察白藜芦醇处理后HepG2细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)的变化。结果:流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,并呈浓度依赖性。白藜芦醇处理细胞12h后,电子显微镜检测到线粒体外膜肿胀或破裂,并可伴有线粒体嵴数量减少或消失,24h后观察到明显的细胞线粒体消失、染色质浓缩、细胞核裂解为碎块等细胞凋亡特征。流式细胞仪结果显示,经白藜芦醇处理后,rhodamine123的荧光强度明显降低,说明白藜芦醇可使ΔΨm去极化。结论:线粒体的形态和结构变化在白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中起着重要作用,白藜芦醇诱导细胞凋亡的作用可能与其破坏ΔΨm和影响线粒体结构有关。
- 晏芳李建栋俞守义聂军
- 关键词：细胞凋亡白藜芦醇线粒体流式细胞仪
- 白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响被引量：9
- 2006年
- 目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的时相分布,使用荧光探针5'-CFDA/AM标记细胞,采用荧光漂白后重恢复技术(FRAP)和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后,HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制,抑制率最高达92.1%,各处理组间比较均有显著性差异(F=18.532,P<0.05);细胞周期分析显示,白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞,抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡;另外,白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能,且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖,使细胞停滞于S期,并能诱导细胞凋亡;白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用,提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。
- 晏芳田雪梅马晓冬
- 关键词：白藜芦醇细胞凋亡HEPG2细胞间通讯
- 白藜芦醇促进Ca^(2+)介导的线粒体Ca^(2+)转运发生被引量：3
- 2006年
- 目的为探讨白藜芦醇(Tesveratrol,Res)诱导细胞凋亡过程中线粒体的作用,Res对线粒体通透性的影响,研究了Res对线粒体通透性转变孔道及Ca2+诱导的线粒体内Ca2+释放(CICR)发生的影响。方法提取大鼠肝线粒体。通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀,借此测定线粒体PTP的开放状态;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测Res作用下测试体系内Ca2+浓度的变化引起的D(λ)值的变化,以反映线粒体Ca2+的转运情况(即CICR)。结果Res能促进Ca2+诱导的鼠肝线粒体PTP开放;并且Res可以加速Ca2+介导的线粒体Ca2+的转运(CICR);而Ca2+通道抑制剂trifluoperazine和钌红(RR)能分别部分或完全抑制Res的这种促进作用。结论Res能促进Ca2+诱导的鼠肝线粒体CICR过程。并且Res对PTP的作用依赖于Res对线粒体CICR的影响,Res促进线粒体膜的通透性可能是Res诱导细胞凋亡的一种途径。
- 田雪梅马晓冬晏芳
- 关键词：白藜芦醇线粒体CA^2+
- Zn^(2+)对PTP开放和细胞色素c释放的浓度依赖性双向调节
- 2005年
- 研究Zn2+对Ca2+介导线粒体通透过渡孔道(PTP)开放和线粒体细胞色素c释放的影响,及其与线粒体膜电位(ΔΨm)和Ca2+介导的线粒体Ca2+释放(mCICR)之间的关系.提取大鼠肝线粒体,通过紫外分光光度仪检测不同浓度Zn2+作用下Ca2+介导的PTP开放状态;采用荧光分光光度仪测定不同浓度Zn2+作用下线粒体膜电位的变化;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测不同浓度Zn2+作用下测试体系内Ca2+浓度的变化,以反映线粒体Ca2+的转运情况(即mCICR);通过免疫印迹法检测不同浓度Zn2+作用下Ca2+介导的线粒体细胞色素c的释放.高浓度Zn2+完全抑制Ca2+介导的PTP开放和细胞色素c释放.一定浓度的Zn2+部分抑制Ca2+介导的PTP开放和细胞色素c释放.适当浓度Zn2+自身介导PTP开放和细胞色素c释放.低浓度Zn2+加速Ca2+介导PTP开放和Ca2+释放;高浓度和一定浓度Zn2+分别完全或部分破坏ΔΨm;高浓度Zn2+完全抑制mCICR.当抑制mCICR时,Ca2+和Zn2+对PTP开放和细胞色素c释放的作用完全抑制.结果表明,Zn2+以浓度依赖方式双向调节PTP开放和细胞色素c释放.Zn2+的作用可能与Zn2+破坏ΔΨm和影响mCICR相关.
- 马晓冬乔东访晏芳马安德田雪梅
- 关键词：ZN^2+细胞色素C膜电位线粒体
- 流式细胞技术检测线粒体通透转变孔道开放被引量：1
- 2010年
- 目的通过白藜芦醇诱导线粒体通透过渡孔道(PTP)开放模型,介绍一种使用流式细胞技术检测线粒体PTP的新方法。方法提取大鼠肝脏线粒体,使用荧光探针NAO(nonylacridine orange)选择性的标记单个线粒体;TMRE标记检测线粒体膜电位的变化;流式细胞仪检测线粒体的侧向散射角(SSC)改变来反映白藜芦醇诱导的线粒体肿胀,即PTP的开放。结果 NAO标记线粒体结合流式细胞技术可以确定从细胞中分离线粒体的纯度;白藜芦醇处理线粒体后引起了TMRE荧光强度的降低以及SSC的减少,说明白藜芦醇可以诱导PTP开放,环孢霉素A(CsA)可以抑制白藜芦醇诱导的PTP开放。结论流式细胞技术可以准确的检测线粒体膜电位、线粒体的肿胀程度和PTP的开放。
- 晏芳马晓冬田雪梅
- 关键词：流式细胞技术线粒体
