广东省自然科学基金(034046)
- 作品数：6 被引量：24H指数：2
- 相关作者：邵红伟黄树林吴凤麟沈晗王辉更多>>
- 相关机构：广东药学院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TCR Vβ7.1基因转染外周血单个核细胞后表达及抗癌作用被引量：2
- 2005年
- 目的研究TCRVβ7.1基因在恢复肝癌病人细胞毒性T细胞(CTL)功能方面的作用。方法以RTPCR方法扩增TCRVβ7.1基因并构建Vβ7.1-pLXSN表达载体。重组体以脂质体转染外周血单个核细胞(PBLs),流式细胞仪检测转染效率,DNALadder实验和透射电镜观察转染后T细胞诱导肿瘤细胞凋亡情况。结果TCRVβ7.1基因转染PBLs后可有效表达并诱导肿瘤细胞凋亡。结论该方法为T细胞介导的肿瘤基因治疗提供了有效途径。
- 王辉罗利琼林月霞肖兰凤
- 关键词：TCR转染凋亡
- 人类TCRαβ家族V基因的进化研究被引量：8
- 2008年
- 目的:了解人类TCRα家族V基因(TCRAV)和TCRβ家族V基因(TCRBV)的进化特征。方法:采用MEGA3.1软件对人类TCRAV和TCRBV基因分别构建进化树,并估算基因复制的发生时间;采用FEL法检测TCRAV和TCRBV编码序列正选择和负选择位点。结果:进化树显示TCRAV和TCRBV的基因分组在进化过程中已经维持了相当长的时间。TCRAV已经不受正选择作用,TCRBV基因序列的CDRs区域检测到两个正选择位点。结论:人类TCRαβ家族V基因的进化特征为研究TCR基因在机体免疫及疾病防治提供了理论分析基础。
- 陶嫦立邵红伟沈晗吴凤麟黄树林
- 关键词：TCR进化正选择负选择
- 肿瘤特异性T细胞受体基因转染诱导记忆性T细胞体外分化的研究
- 2008年
- 目的探讨肝癌特异性T细胞受体基因转染对记忆性T细胞体外诱导分化的影响。方法以肝癌特异性T细胞受体Vβ7.1转染PBMC,流式细胞术检测目的基因表达。肝癌细胞BEL-7402刺激诱导记忆性T细胞;以流式细胞术检测记忆性T细胞标志性表面分子表达验证记忆性T细胞表型及分化亚群;以AnnexinV-PI双染检测肿瘤细胞的凋亡,ELISA检测细胞因子IFN-γ分泌探讨记忆性T细胞免疫功能。结果TCRVβ7.1基因成功转染到T细胞并得到有效表达。与PBMC对照组相比,TCRVβ7.1转染组CD45RO表达显著上升。以CD45RA及CCR7表达分析记忆性T细胞亚群显示其表型主要为效应型记忆性T细胞。分化后的记忆性T细胞诱导肿瘤细胞凋亡率及IFN-γ分泌显著上升。结论肿瘤特异性TCR基因转染可促进以效应型记忆性T细胞(TEM)为主的记忆性T细胞分化,TEM将通过诱导凋亡与分泌细胞因子作用发挥其免疫功能。
- 吴凤麟邵红伟林敬明黄树林
- 关键词：T细胞受体转染记忆性T细胞分化
- 细胞活性检测方法优化被引量：11
- 2008年
- 目的在不吸出培养基的前提下,探讨MTT比色实验最佳溶解条件,以提高检测灵敏度和稳定性,降低本底,为悬浮细胞活性检测打下基础。方法在96孔板接种不同密度肿瘤细胞,用MTT比色实验来测定。比较不同溶解液溶解Formazan能力,并与传统溶解液进行比较。结果当用10%SDS（pH4～5）作为溶解液所得OD值与细胞数目很高的相关性,43h后测定与12h后测定所得OD值差异无显著性。结论在MTT实验中,可以用10%SDS（pH4～5）作为溶解Formazan的溶解液,与传统溶解液相比可提高检测灵敏度、稳定性和降低本底。
- 薄华本邵红伟胡凌波黄树林
- 关键词：MTT比色法SDS细胞活性
- TCRVβ7．1基因转染对肝癌细胞刺激的外周血单个核细胞ERK信号通路和IFN-γ表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:研究肝癌特异性识别基因TCRVβ7.1表达重组体转染外周血单个核细胞(PBMCs)后对T细胞细胞因子表达的影响和信号通路的激活作用。方法:以肝癌特异性T细胞受体Vβ7.1转染PBMCs,流式细胞仪检测TCRVβ7.1表达量;Western blotting检测ERK1/2表达量及磷酸化水平(p-ERK)的改变;用ELISA法检测白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)的表达量。结果:TCRVβ7.1基因转染健康人PBMCs并得到有效表达,转染TCRVβ7.1基因的PBMCs与肝癌细胞共培养后ERK蛋白磷酸化水平明显高于未转染组(P<0.01)。p-ERK1/2水平与T细胞激活有关。ELISA结果表明,转染PBMCs细胞与肝癌细胞共培养后,IFN-γ水平明显高于未转染组,而IL-4无明显改变。结论:TCRVβ7.1转染PBMCs与肝癌细胞共培养后,ERK信号通路被激活,IFN-γ表达增高。
- 张帆邵红伟沈晗张文峰吴凤麟黄树林
- 关键词：细胞外信号调节激酶类干扰素Γ
- TCR Vβ15基因转染外周血单个核细胞体外抗肝癌作用的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨肝癌特异性识别基因TCR Vβ15表达重组体转染外周血单个核细胞后的体外抑瘤作用。方法TCR Vβ15基因表达重组体转染外周血单个核细胞(PBMC),激光共聚焦显微镜观察TCR Vβ15表达情况。淋巴细胞和肿瘤细胞共培养后倒置显微镜观察淋巴细胞诱导肿瘤细胞死亡的情况,MTT法观察淋巴细胞的杀伤活性。结果TCR Vβ15基因转染后的淋巴细胞与未经处理的淋巴细胞相比跨膜蛋白表达增加。倒置显微镜下可见基因转染组肿瘤细胞皱缩,细胞间隙增加。淋巴细胞杀伤活性明显增高,实验组与对照组相比有显著性差异。结论TCR Vβ15基因转染PBMC细胞后可有效表达并明显杀伤肿瘤细胞,导致肿瘤细胞死亡,为该研究方法临床应用提供了实验依据。
- 王辉罗利琼林月霞肖兰凤
- 关键词：TCR激光共聚焦显微镜抑瘤作用
