博士科研启动基金(2008C20)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：张平张振山刘斌钟志宏蔡道章更多>>
- 相关机构：广州医学院第三附属医院中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒在软骨细胞的表达
- 2011年
- 背景:白细胞介素1受体拮抗蛋白能延缓骨性关节炎进程,通过转基因方法可以使白细胞介素1受体拮抗蛋白表达的增加。目的:观察重组人重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况。方法:双酶切法切取重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的c-DNA片段,通过T4DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上。体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白质粒经脂质体转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果与结论:获得重组人pEGFP-C1-IL-1Ra真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞基因得到表达。
- 张平刘斌蔡道章钟志宏潘永谦张振山
- 关键词：基因转染荧光质粒软骨细胞
- 转IL-1Ra和TGF-β1基因治疗兔骨性关节炎的体外实验研究被引量：10
- 2011年
- 目的探讨重组人IL-1Ra和TGF-β1双基因在体外对兔骨性关节炎软骨退变的治疗效果。方法取新西兰大白兔关节软骨,经消化分离,软骨细胞以1.5×105/ml浓度培养于6孔培养板。软骨细胞分为5组,转染IL-1Ra组、转染TGF-β1组、转染IL-1Ra+TGF-β1双基因组、未转染组、空白组。上述转染组均以Lipofectamine TM 2000 Reagent脂质体为转染媒介。各组加入软骨块,除空白组外,其余各组均加入20ngIL-1β。于第6天后每组各取4孔1.5ml培养基,ELISA法检测TGF-β1和IL-1Ra的含量,RIA法检测IL-1β和TNF-α的含量。收集软骨块做HE染色、阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测等组织学观察。结果转染组IL-1Ra或TGF-β1有较高的表达水平;转染组IL-1β和TNF-α的表达水平降低,在双基因组降低最明显,与单基因组之间有显著性差异(P<0.05)。转基因组基质染色均比未转染组着色较深。在双基因组软骨细胞排列尚整齐,细胞数量多,基质深染。结论联合基因治疗效果优于单基因,为体外骨性关节炎的基因治疗提供实验基础。
- 张平蔡道章刘斌钟志宏潘永谦张振山
- 关键词：白细胞介素1转化生长因子基因转移技术软骨细胞
- 转染白细胞介素1受体拮抗剂与转化生长因子β1软骨细胞和致炎软骨块共培养后炎性因子的变化被引量：2
- 2011年
- 目的 观察重组人白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）和转化生长因子β1（TGF-β1）双基因在体外对兔骨关节炎（OA）的治疗效果.方法 取新西兰大白兔关节软骨经酶消化分离原代培养软骨细胞,并采用特异性细胞外基质Ⅱ型胶原免疫细胞染色进行鉴定.软骨细胞分为转染IL-1Ra组（A组）、转染TGF-β1组（B组）、转染IL-1Ra＋TGF-β1双基因组（C组）、未转染组（D组）、空白组（E组）.A、B、C 3组均以LipofectamineTM 2000 Reagent脂质体为转染媒介.各组加入软骨块与软骨细胞共培养,除E组外,其余各组均加入20 ng IL-1β,转染共培养后分别在12、24 h、2、4、6 d通过荧光显微镜观察软骨细胞转基因的表达.于共培养第2,4、6天后应用放射免疫分析（RIA）分别检测各组IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量.结果 成功分离培养软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞染色显示细胞胞质染成棕黄色.胞核基本不着色.荧光显微镜下A、B、C组均有绿色荧光蛋白的表达,转染后24 h,3组细胞的转染率最高分别为（16.16＋2.71）%、（16.54±2.91）%、（17.20±2.39）%,第2天后随时间的延长转染率逐渐降低.同时间点IL-1β水平D组＞B组＞A组＞C组＞E组;而第2、6天TNF-α水平D组＞A组＞B组＞C组＞E组,第4天E组＞A组＞B组＞C组＞D组,其中A组虽然略高于B组,但差异没有统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义.A、B、C组的IL-1β和TNF-α在第6天的水平明显低于第2、4天,D、E组IL-1β水平不随时间的延长而改变,TNF-α水平D组在第4天时最低,E组则最高.结论 转染IL-1Ra和TGF-β1基因均有降低炎性因子水平的作用.联合应用转染IL-1Ra和TGF-β1基因可能控制炎性反应,为体外OA的基因治疗提供实验基础.
- 张平刘斌蔡道章钟志宏潘永谦张振山
- 关键词：转化生长因子Β1软骨细胞转染
