国家自然科学基金(30440059)
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
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- 相关机构：中国人民解放军总医院军事医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 变形链球菌葡糖基转移酶催化活性区的分子克隆及表达被引量：6
- 2005年
- 目的:克隆变形链球菌葡糖基转移酶中催化活性区(CAT)的基因片段,并在大肠杆菌中表达。方法:通过PCR技术克隆CAT的基因片段并通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌中表达。结果:成功克隆了CAT的基因片段,并在大肠杆菌中得到其融合蛋白的表达。结论:成功克隆葡糖基转移酶CAT基因并获得其融合蛋白的表达,为后续研究奠定了基础。
- 夏伟王成龙董洁高亚萍杨光邵宁生刘洪臣
- 关键词：变形链球菌葡糖基转移酶克隆分子克隆
- 磁珠-流式细胞术SELEX技术的建立被引量：3
- 2007年
- 目的:建立磁珠—流式细胞术SELEX技术方法。方法:不对称PCR扩增并制备ssDNA文库,选用商品化的、表面包被链霉亲合素的磁珠作为分离介质进行SELEX筛选,流式细胞术检测筛选得到的配基与链霉亲合素结合的特异性,及配基竞争生物素与链霉亲合素的结合情况。结果:筛选获得了特异识别链霉亲合素的ssDNA配基,流式细胞术检测确定:筛选得到的配基与链霉亲合素特异结合,并能竞争生物素与链霉亲合素的结合。结论:成功建立了磁珠—流式细胞术SELEX技术方法。
- 汪林王成龙储冰峰邵宁生杨光董洁高亚萍
- 关键词：SELEX技术磁珠流式细胞术龋病
- 矿化液对人脂肪基质细胞(hADSCs)成骨分化的影响
- 2010年
- 目的:比较人脂肪基质细胞(human adipose-derived mesenehymal stem cells,hADSCs)在矿化条件与非矿化条件下分别培养,评价矿化液对其增殖和分化的影响。方法:酶消法原代培养人脂肪基质细胞,再以含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的矿化液进行诱导,MTT检测矿化液对细胞增殖的影响,细胞培养上清液检测碱性磷酸酶(ALP)活性及骨钙素(OCN)含量。结果:矿化液抑制细胞的增殖,提高人脂肪基质细胞ALP活性和骨钙素的含量。结论:人脂肪基质细胞在矿化条件下可以表现出成骨细胞特性。
- 张勇刘洪臣鄂玲玲王东胜
- 关键词：人脂肪基质细胞矿化液分化
- IPTG诱导变形链球菌葡糖基转移酶可溶性表达及活性初步测定被引量：4
- 2010年
- 目的:提取变形链球菌GS5葡糖基转移酶GTF(glucosyltransferase)催化活性区(CAT)的基因,利用IPTG诱导后获得可溶性表达,并检测活性。方法:利用PCR技术克隆CAT的基因片段,通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌BL21中表达,利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含有质粒pET32-NusA-CAT的大肠杆菌,SDS-PAGE电泳进行检测;采用蒽酮硫酸法验证活性。结果:成功将CAT基因连入大肠杆菌BL21,获得可溶性的融合蛋白表达;并且融合蛋白具有生物学活性。结论:IPTG成功诱导克隆的变形链球菌葡糖基转移酶催化活性区基因并获得可溶性融合蛋白的表达,具有生物学活性。
- 汪林储冰峰王成龙刘洪臣邵宁生杨光董洁刘玉
- 关键词：变形链球菌葡糖基转移酶大肠杆菌
- 重组变形链球菌葡糖基转移酶催化活性区的活性研究
- 2010年
- 目的:测定重组变形链球菌GS5葡糖基转移酶GTF(glucosyltransferase)催化活性区的活性。方法:通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含有质粒pET32-NusA-CAT的大肠杆菌,制备可溶性的重组GTF;利用蒽酮硫酸液测定重组GTF与对照样品活性,酶联仪读取OD630数值。结果:蒽酮硫酸液测定重组GTF,对照样品和蔗糖孵育后所得产物OD630数值有明显统计学差异(P<0.05)。结论:重组GTF的CAT区具有催化蔗糖生成葡聚糖的生物学活性。
- 汪林储冰峰王成龙刘洪臣邵宁生杨光董洁刘玉
- 关键词：变形链球菌葡糖基转移酶
