福建省自然科学基金(2013J01124)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 培养条件对重组青霉素G酰化酶表达及后翻译的影响
- 2014年
- 青霉素G酰化酶(PGA)具有良好的催化酰化/去酰化特性,广泛应用于半合成及β-内酰胺抗生素工业中。由于嗜柠檬酸克鲁沃尔氏菌(Kc)产生的PGA具有良好的适于工业应用的特性,因此,对Kc来源的PGA在重组菌BL21(DE3)中的表达进行产酶条件优化。通过调整培养基装量、培养温度、起始pH值及诱导剂的浓度,结合对细胞生长量、蛋白表达量及酶活高低的检测,以期得到产生活性PGA的最优条件。发现起始pH值为7.0,装量30 mL,30℃培养,1.0 mmol/L IPTG诱导6 h时,菌浓为16.83,总酶活达到27 905 U/L,单位酶活1 658 U/L/OD600的最佳结果。通过分析培养条件对PGA蛋白表达量(SDS聚丙烯凝胶电泳)和酶活的影响,发现PGA前体表达后的后翻译过程是产生活性酶的关键因素,该结果将为后期研究和工业应用提供重要参考依据。
- 蒋咏梅贺望兴章文贤
- 关键词：青霉素G酰化酶酶活聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 灵芝14-3-3蛋白基因的电子克隆与表达分析被引量：2
- 2013年
- 通过电子克隆技术,获得14-3-3基因的cDNA序列全长,并采用生物信息学方法,借助电子计算机和相关的生物信息学软件,对该基因编码蛋白从基本理化性质、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜区结构、信号肽、高级结构及系统发育树分析等进行了预测和分析。该cDNA编码蛋白由257个氨基酸组成,相对分子质量为29.014 5 kDa,亲水性和疏水性比较平衡,定位于细胞质,不存在信号肽,无跨膜螺旋区,且二级结构由6.23%无规则卷曲,66.54%α-螺旋和27.24%延伸链组成。同源比对分析显示,该酶基因编码的氨基酸序列与污叉丝孔菌、双孢菇和木耳等蘑菇类高等真菌中的14-3-3基因所编码的氨基酸序列高度同源。实时荧光定量PCR结果表明,灵芝14-3-3基因在液体静置培养过程中的表达量显著高于振荡培养。
- 章文贤蒋咏梅贺望兴郭文燕黄晓菊郑素云
- 关键词：灵芝电子克隆生物信息学
