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流体剪应力作用下VWF-A1A2A3介导的血小板P-选择素的原位表达被引量：9: 2017年; 目的探讨流体剪应力(fluid shear stress,FSS)对VWF-A1A2A3介导的血小板表面P-选择素表达的影响。方法利用平行平板流动腔实验系统,以CD62P:FITC作为血小板表面P-选择素表达的指示剂,采用荧光显微镜观察分析在不同FSS条件(0、1、2 Pa)下,血小板经由VWF-A1A2A3特异介导黏附后P-选择素表达随时间的变化过程,提取特征参数。结果 FSS扣动了血小板激活并产生P-选择素表达的扳机,激活比率受FSS大小和持续时间的正向调节,在1 Pa和2 Pa时的最高激活比率分别为9.42%和14.59%;P-选择素表达水平随FSS作用时间的延长先提高后降低,呈现一个"双相"的变化过程,最佳作用时间为7.5 min;P-选择素表达的荧光峰值随剪应力的增加而上升。结论血小板P-选择素表达受FSS和VWF-A1A2A3的协同调控,表达水平与力信号的持续时间相关。; 刘思璐刘晓玲吴建华方颖; 关键词：血小板P-选择素血管性血友病因子流体剪应力血小板活化

一种基于分子动力学模拟来识别GPⅥ与10B12结合面上的重要残基的新方法: ＜正＞血小板粘附到血管受损部位由不同的受体与配体相互作用所介导。在高剪切力下,首先由GPIb复合物与血管内皮细胞上的血管性血友病因子（v WF）结合介导血小板的初始黏附,但血小板上免疫球样受体GPVI与胶原的相互作用是导...; Wen-Ping LiuYing FangJian-hua Wu; 文献传递

流体剪切力下趋化因子CXCL12诱导Jurkat T细胞的钙响应机制被引量：2: 2020年; 目的探究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)条件下趋化因子诱导Jurkat T细胞钙响应的力-化学耦合调控机制。方法通过流动腔系统与荧光显微镜结合,在静止或流场条件下,观察分析有或无胞外Ca2+时固定化趋化因子CXCL12诱导的Jurkat T细胞钙响应过程,提取相应特征参数。结果 CXCL12可以介导Jurkat T细胞的稳定黏附且呈现浓度依赖性;力是细胞钙响应的开关,当FSS从0提高到20 mPa时,钙响应激活比率从约4%提高到约75%;在20 mPa FSS下,胞外Ca2+可以通过缩短延迟时间(缩短约23 s)加快钙响应,增加爬坡时间(约7 s)和半衰期(约20 s)提高钙响应强度。结论 FSS和胞外Ca2+协同作用,加快、加强CXCL12介导的Jurkat T细胞钙响应,提示一条依赖机械敏感钙离子通道的"外钙内流-内质网钙库释放"的快速通路。研究结果有助于深入理解T细胞的活化过程,为相应病理和药物研究提供参考。; 胡兵吴建华凌颖琛方颖; 关键词：流体剪切力

Regulation of shear stress on rolling behaviors of HL-60 cells on P-selectin被引量：4: 2014年; Circulating leukocytes in trafficking to the inflammatory sites, will be first tether to, and then roll on the vascular surface. This event is mediated through specific interaction of P-selectin and P-selectin glycoprotein ligand-1 （PSGL-1）, and regulated by hemodynamics. Poor data were reported in understanding P-selectin-mediated rolling. With the flow chamber technique, we herein observed HL-60 cell rolling on P-selectin with or without 3% Ficoll at various wall shear stresses from 0.05 to 0.4 dyn/cm：. The results demonstrated that force rather than transport regulated the rolling, similar to rolling on L- and E-selectin. The rolling was accelerated quickly by an increasing force below the optimal shear threshold of 0.15 dyn/cm2 first and then followed by a slowly decelerating phase starting at the optimum, showing a catch-slip transition and serving as a mechanism for the rolling. The catch-slip transition was completely reflected to the tether lifetime and other rolling parameters, such as the mean and fractional stop time. The narrow catch bond regime stabilized the rolling quickly, through steeply increasing frac- tional stop time to a plateau of about 0.85. Data presented here suggest that the low shear stress threshold serves as a mecha- nism for most cell rolling events through P-selectin.; LING YingChenFANG YingYANG XiaoFangLI QuHuanLIN QinYongWU JianHua; 关键词：P-SELECTIN

流体剪应力作用下趋化因子CXCL12诱导的白细胞整合素LFA-1的激活被引量：5: 2017年; 目的探究剪应力下趋化因子诱导的白细胞上整合素LFA-1激活过程。方法采用平行平板流动腔系统在10~30 mPa剪应力下,观察分析可溶性及固定趋化因子CXCL12对Jurkat细胞在ICAM-1上瞬时黏附行为的影响,提取特征参数。结果 CXCL12仅能介导Jurkat细胞的短暂栓缚(0.13~0.20 s)。只有固定的CXCL12才能有效激活Jurkat细胞上LFA-1与ICAM-1键合,从而提高栓缚事件的发生率,并大大延长细胞的栓缚时间(0.8~1.2 s)。激活的LFA-1/ICAM-1解离速率呈现明显双态性:k_1(1.09~1.24 s^(-1)),k_2(0.28~0.7 s^(-1)),剪应力主要通过调节k_2及k_2对整个黏附时间的贡献率β来控制细胞的瞬时黏附行为。结论剪应力通过G蛋白偶联受体与CXCL12的作用可在0.2 s内快速激活整合素LFA-1,进而调控白细胞的黏附过程。研究结果有助于深化趋化因子-力偶联调控整合素激活机制的认识。; 陈岱琳吴建华方颖; 关键词：趋化因子CXCL12 细胞黏附

流体剪应力作用下E-选择素介导的中性粒细胞钙响应被引量：2: 2018年; 目的探讨流场下E-选择素介导的中性粒细胞钙响应过程。方法采用平行平板流动腔结合荧光显微镜,在0~600 m Pa流体剪应力（fluid shear stress,FSS）下,实时观察中性粒细胞在不同浓度E-选择素上的黏附及随后产生的钙响应。结果在流场环境下E-选择素可特异性介导中性粒细胞的稳定黏附和钙响应,细胞的黏附数和激活比率随浓度的提高而逐渐增加。只有固定的E-选择素才能传递力信号来有效触发细胞的钙响应,FSS的增加不仅提高了细胞的激活比率（从23%增至70%）,增加了钙响应的强度（从0.92增至1.45）,而且大大缩短了细胞自黏附到钙响应启动的时间（从70 s减为27 s）。结论 FSS和E-选择素协同调控中性粒细胞的钙响应,FSS对钙响应的速度和水平实行正向调节。研究结果可深化血流环境下白细胞免疫响应过程的理解。; 张力吴建华方颖; 关键词：中性粒细胞 E-选择素流体剪应力

β3整合素/Talin F3复合物拉伸分子动力学模拟: 2019年; 目的血小板上β3整合素作为膜上重要的信号分子,以独特的转导通路双向传递跨膜信号,在血小板凝止血功能的发挥中起着重要的作用。通常在Inside-out通路中,Talin在PIP3激酶的作用下与β3整合素结合,并桥接actin以力-化学偶联的调控机制诱导整合素的活化。研究β3整合素与Talin F3复合物在不同受力状态下的构象变化和力学稳定性,揭示其分子动力学机制,对深入了解Talin介导的整合素活化的结构基础有重要意义。方法从晶体结构(PDB:1MK7)出发,构建整合素β3/Talin F3复合物的分子体系,利用VMD软件添加水框,采用周期性边界条件、CHARMM22力场,以NAMD 2.13软件对体系施行热平衡、恒速度拉伸分子动力学模拟;选取拉伸过程中对应的不同受力构象进行恒力拉伸模拟,分析比较不同拉伸情况下的构象稳定性、氢键网络变化。结果恒速拉伸过程中,复合物表现出两种不同的解离状态,其在断裂力、断裂时间和断裂方式上存在明显差异,氢键Asp740-Arg359在抗拉力解离过程中发挥了关键作用。在小于60 PN的低力拉伸下,复合物表现为逆锁键,解离概率随力的增加而降低,氢键数目、结合面SASA值则逐步上升,当力大于60 PN,表现为滑移键,其中残基Ala742、Asn744、Tyr747在力稳定性调控中扮演重要角色。结论:整合素β3/Talin F3复合物结合亲和力存在双相力依赖特性,不同的恒力可以诱导出具有不同亲和力的复合物构象,适当力的施加有利于提高β3整合素与Talin的结合亲和力。; 苏水秀吴建华方颖; 关键词：分子动力学模拟 Β3整合素 TALIN

采用分子动力学模拟方法探究Ca2+对VWF-A2结构域稳定性的影响被引量：4: 2018年; 目的探究Ca^2＋对VWF-A2结构域稳定性的影响。方法 A2和A2/Ca^2＋的晶体结构取自PDB数据库。通过恒力拉伸分子动力学模拟,比较分析Ca^2＋结合引起的构象变化、解折叠路径的差异以及酶切位点的暴露程度。结果 A2结构域的解折叠路径和酶切位点的暴露过程是力依赖的。Ca^2＋结合不影响A2结构域的前期解折叠,但由于α3β4-环链局部构象重排所致柔性降低,约束了β1-β4-β5片层的运动,导致进一步解折叠受阻而停留在中间稳态,影响酶切位点的充分暴露。结论力可诱导A2结构域中β5片层的解折叠使酶切位点暴露,而Ca^2＋的结合则通过稳定疏水核心结构,阻碍酶切位点的暴露,最终降低ADAMTS13的酶切效率。研究结果有助于加深对ADAMTS13酶切VWF-A2结构域进而调控VWF止血能力过程的理解,并为相关抗血栓药物设计提供指导。; 谢旭斌刘文平吴建华方颖; 关键词：血管性血友病因子分子动力学模拟解折叠

用^(125)I测定低水平P-选择素平面位点密度新方法: 2014年; 建立了一种基于125I放射性标记并与Infinia Hawkeye 4ECT检测相结合的检测蛋白分子位点密度的新方法。实验结果显示,P-选择素的位点密度与吸附浓度呈线性关系,且P-选择素在玻璃平面上的吸附能力高于在聚苯乙烯平面上的吸附。在相同P-选择素浓度下,对比标记P-选择素和P-选择素单克隆抗体9E1的放射性强度,结果发现,物理吸附作用下大概只有10%的P-选择素是头部向上分布的。对比传统方法,新方法更为快速有效,且应用范围更广,新方法所测定的位点密度结果可以与流动腔实验相结合,从而获得一系列二维分子动力学参数。; 凌颖琛李趣欢黄冰张金赫方颖; 关键词：蛋白分子 P-选择素碘125标记 SPECT

A3/A1复合物对接及结构域之间相互作用的分子动力学研究被引量：4: 2020年; 目的探究血管性血友病因子(von Willbrand factor,v WF)A1、A3结构域间的相互作用及A3的2 M型突变W1745C对A3/A1热稳定性和机械稳定性的影响。方法A1、A3的晶体结构取自PDB数据库,首先通过柔性对接获得WT-A3/A1(野生型)复合物结构;再利用计算机突变技术构建W1745C-A3/A1复合物体系;最后采用拉伸分子动力学模拟,观察接触面氢键和盐桥的形成与演化,对比分析WT-A3/A1与W1745C-A3/A1在复合物构象、解离力和解离时间的差异。结果WT-A3/A1接触面之间存在5对生存率大于0.2的氢键和1对生存率大于0.5的盐桥;W1745C-A3突变提高了结合面氢键的生存率并增加1对稳定盐桥,从而能够抵抗更大的拉伸力,延缓A1/A3的解离。结论v WF分子内部A1与A3的相互作用阻碍A1与血小板的结合,而W1745C-A3突变则强化这种分子内部的相互作用,降低A1对血小板的亲和力。研究结果为深入揭示临床中突变导致的血管性血友病的分子机制及相应药物研制提供参考。; 李圆圆宁志龙吴建华方颖; 关键词：血管性血友病因子分子动力学模拟机械稳定性

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国家自然科学基金(11272125)

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