山东省高等学校科技计划项目(J08LF07)
- 作品数：9 被引量：45H指数：4
- 相关作者：姜世金谢之景朱岩丽王鑫邹金峰更多>>
- 相关机构：山东农业大学佛山科学技术学院泰山医学院更多>>
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- 山东地区禽源致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药性及耐药基因的检测被引量：15
- 2011年
- 采用K-B纸片法对224株大肠杆菌进行5种氨基糖苷类药物的药敏试验,采用微量肉汤稀释法进行庆大霉素和阿米卡星最低抑菌浓度(MIC)的测定,三重PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib和aph(3’)-Ⅱa,普通PCR法检测16S甲基化酶基因。结果显示:山东省禽源大肠杆菌对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为84.4%、57.1%、55.8%、46.9%和40.2%;3种钝化酶基因ant(3’’)-Ia、aac(6’)和Ib、aph(3’)-Ⅱa的检出率依次为49.6%、25.0%和22.8%,介导高水平耐药的16S甲基化酶基因RmtB的检出率为11.6%(26/224),只有1株大肠杆菌检测到armA基因,没有检测到rmtA,且3种甲基化酶基因在低度耐药菌中检出率均为0;所检大肠杆菌中携带2种及2种以上耐药基因的菌株占33.5%(75/224),有1株大肠杆菌同时携带4种耐药基因。结果表明,氨基糖苷类钝化酶及16S甲基化酶广泛存在于禽源大肠杆菌菌中,其耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,表明还存在其他耐药机制。
- 孙慧雷战邹金峰魏宗王鑫谢之景姜世金
- 关键词：大肠杆菌耐药性
- 鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定被引量：4
- 2012年
- 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。
- 张兴晓邹金峰相琪旺王鑫陈琳谢之景姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒IFA
- 鸭甲肝病毒3型2012年山东分离株VP1基因的序列分析被引量：5
- 2013年
- 为揭示近年来鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)中国分离株VP1基因的遗传变异规律,本研究对2012年从山东省分离到的13株DHAV-3的VP1基因分别进行PCR扩增、序列测序与分析。结果显示,13株DHAV-3的VP1基因均由720个核苷酸组成,共编码240个氨基酸,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为94.6%～99.9%和95.0%～100%。与GenBank中公布的31株DHAV-3的VP1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.5%～100%和90.8%～100%。系统进化分析显示,DHAV-3可分为两个基因型,其中除疫苗毒B63之外所有中国分离株均属于GⅠ型,越南分离毒株主要属于GⅡ型S1亚型,而韩国分离株组成GⅡ型中的S2亚型,具有明显的地域特征。
- 徐倩陈琳琳张瑞华杨蕾谢之景朱岩丽姜世金司兴奎
- 关键词：VP1基因GENBANK
- 山东省禽源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型检测被引量：2
- 2013年
- 为研究山东省禽源大肠杆菌中产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum b-lactamases,ESBLs)的基因型分布及其对头孢类抗生素的耐药性,分别用针对TEM、SHV、OXA-2、OXA-10、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8与CTX-M-9等8个耐药基因的通用引物对118株禽源大肠杆菌进行了PCR检测,并对其进行了5种头孢类抗生素(头孢拉定、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋)的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种头孢类抗生素均产生了较高耐药性(54.24%～81.36%),其产ESBLs的耐药基因携带率达到75.42%(89/118),29.66%(35/118)的菌株携带2种产ESBLs基因,11.86%(14/118)的菌株携带3种产ESBLs基因。山东省禽源大肠杆菌中未检测到SHV、CTX-M-2、CTX-M-8与OXA-10基因,TEM、CTX-M-9、CTX-M-1和OXA-2基因的检出率依次为52.54%(62/118)、37.29%(44/118)、28.00%(33/118)和10.17%(12/118)。
- 郭翠平马明杰刘建民吕佳泓焦玉祥朱岩丽谢之景姜世金
- 关键词：禽源大肠杆菌药敏试验超广谱Β-内酰胺酶基因型
- 山东部分地区肉鸭群鸭圆环病毒血清学调查被引量：7
- 2012年
- 为了解鸭圆环病毒(DuCV)在山东地区的流行情况,本研究采用已建立的间接ELISA(iELISA)方法对山东省潍坊和泰安两个地区的17个肉鸭场1 130份血清进行DuCV抗体检测。结果显示,肉鸭场的DuCV抗体个体阳性率为2%～78%,平均为29.91%(338/1130),群体阳性率为100%(17/17)。潍坊地区的抗体阳性率(42.81%)明显高于泰安地区(17.73%),显示DuCV在老养殖区鸭群中污染更加严重。
- 王鑫相琪旺朱岩丽谢之景陈君豪周国梅成岩姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒间接ELISA血清学调查
- Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析
- 2010年
- 自山东寿光地区疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织中分离到一株鸭肝炎病毒,命名为SG株DHV-Ⅰ。该病毒能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和,该病毒第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2 mL,对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2 mL。全基因组序列比较分析发现,SG株DHV-Ⅰ基因组结构为5’UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3’UTR,与A型DHV-Ⅰ毒株的核苷酸同源性为94.9%~99.7%,氨基酸同源性为94.5%~99.7%,表明SG株DHV为一株A型DHV-Ⅰ强毒。
- 刘标高继明姜世金司兴奎辛英豪刘少宁谢之景朱岩丽周恩民
- 关键词：全基因组
- 改良菌落PCR法筛选、鉴定DHBV部分核衣壳蛋白基因的重组克隆被引量：1
- 2012年
- 目的优化并验证改良菌落PCR程序的有效性。方法经常规PCR扩增DHBV编码核衣壳蛋白与DNA多聚酶重叠区的部分核苷酸片段(DHBc-dp),纯化特异性扩增产物并连入pMD 18-T载体,转化DH5α感受态细胞后涂布于Amp加倍的LB平板,记为亲代样品(PS),37℃培养12h,室温放置4h～8h。无菌操作挑取细菌转入优化的PCR反应液扩增、鉴定;余菌体室温放置完成二次生长。PS剩余PCR鉴定产物继代转化并涂布LB平板,记为继1代样品(F1S),同样进行菌落PCR鉴定。选取PS和F1S中PCR强阳性样品进行扩增及菌液PCR、质粒PCR、质粒酶切和测序鉴定。结果挑菌后的菌落二次生长成面积扩大的菌苔;优化菌落PCR反应体系保持、甚或提高了原有方法的高度特应性和稳定性;携外源目的片段的重组质粒在菌落PCR反应过程中能保持结构完整,并能在继代转化宿主细胞中忠实复制与扩增。结论改进的菌落PCR程序,继承了既有菌落PCR程序鉴定重组克隆的特异性和高效性,并能有效预防阳性转化子的丢失;同时,在增加优势抗性菌落生长量的前提下有效地抑制了卫星菌落的生长。
- 王玉于爱莲姜世金施鲁笛陈国敏高鹏
- 关键词：DHBV核蛋白基因菌落PCR
- 检测DuCV抗体ELISA方法的建立及应用
- 鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)属于圆环病毒科圆环病毒属的成员之一,是一类没有囊膜的单链环状DNA病毒,该病毒最早于2003年由德国学者Hattermann测定了DuCV德国分离株的全基因组序列,随...
- 刘少宁张兴晓邹金峰谢之景朱岩丽赵钦周恩民姜世金
- 文献传递
- 山东省禽源致病性大肠杆菌血清型鉴定及喹诺酮类药物耐药性检测
- 大肠杆菌病在哺乳动物主要引起肠道疾病,而在禽类,当宿主防御能力下降时,常引起继发性局部或全身性感染。各个品种各个日龄的家禽均可发病,但肉仔鸡最易感,该病一年四季均可发生,但在冬季及夏季多发,饲养管理不良如氨气含量高,湿度...
- 李莎莎孙亚妮孙惠辛英豪朱岩丽谢之景姜世金
- 文献传递
- 山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测被引量：4
- 2012年
- 为了解山东省禽源致病性大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物耐药基因分布情况,对2004～2011年间分离的230株禽源致病性大肠杆菌进行了qnrA、qnrB、qnrS基因的PCR检测,结果发现未检出qnrA和qnrB,qnrS基因的检出率为25.22%(58/230)。对部分检出的qnrS基因测序后发现假阳性率较高(8/24),为了提高检测的特异性,建立了检测qnrS基因的套式PCR,测序结果表明该方法检出准确率为100%,使用该方法检出230株细菌中qnrS基因的携带率为16.52%(38/230),表明含qnrS基因的耐药质粒在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛。
- 苏晶杨芳芳孙慧朱岩丽王淑静谢之景毕海洋姜世金
- 关键词：大肠杆菌喹诺酮类药物耐药性套式PCR
