国家自然科学基金(30600733)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：霍霞张宝李燕徐锡金齐宗利更多>>
- 相关机构：汕头大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- BLU基因慢病毒表达载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建BLU基因慢病毒表达载体。方法:采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出BLU基因,将其接入慢病毒载体(pSL6-IRES-EGFP)中,经菌落PCR、酶切和测序鉴定,然后转染293T细胞观察表达情况。结果:PCR、酶切和测序鉴定克隆了重组子(pSL6-BLU-IRES-EGFP),并在293T细胞中成功表达BLU基因。结论:成功地克隆了含有BLU基因的慢病毒表达载体。
- 陈刚建张宝李燕朴仲贤陈松建刘俊晓黄晋荣郑桂娜郭勇勇霍霞
- 关键词：慢病毒载体
- FUS1基因慢病毒载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建FUS1基因慢病毒载体,包装病毒,体外高效感染细胞。方法:采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入慢病毒载体pSL6-IRES-EGFP中,经PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备慢病毒。将病毒转染BEL7404和DLD-1细胞,观察病毒转染效果。结果:经过PCR测序鉴定,克隆了pSL6-FUS1-IRES-EGFP重组子;所包装的病毒对细胞的感染效率>90%。结论:成功地克隆FUS1基因于慢病毒载体,制备了高效感染细胞的慢病毒。
- 张宝霍霞彭琳齐宗利徐锡金李燕郑良楷丘波
- 关键词：慢病毒属转染
- CYP3A4基因原核表达质粒构建与诱导表达被引量：2
- 2007年
- 以质粒pCWNF14为模板,采用PCR技术扩增出CYP3A4基因,并将其接入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)载体中,经PCR测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2pLysS细菌,并用IPTG诱导表达.采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达,3个表达重组质粒中,只有pET-32a(+)-CYP3A4可以表达目的蛋白;在低浓度IPTG(50μmol/L)诱导6h,所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40%,且该蛋白不溶于8mol/L的尿素,而溶于去污剂10mmol/L3-((3-Cholamidopropyl)dimethylammonio propanesulfonic acid(CHAPS))和0.3%lauroyl sarcosine(SKL).成功地使CYP3A4基因在原核系统中高效表达.
- 张宝霍霞齐宗利徐锡金李燕林懿彭琳
- 关键词：CYP3A4
- CYP2 B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达
- 2007年
- 目的:构建CYP2 B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白。方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2 B6基因,并将其分别插入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2 B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b(+)-CYP2 B6未见目的蛋白表达;pET-28b(+)-CYP2 B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a(+)-CYP2 B6可以高效地表达CYP2 B6,在低浓度(50μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2 B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2 B6。结论:成功地使CYP2 B6基因在原核系统中高效表达。
- 张宝霍霞徐锡金齐宗利郑谨彭琳
- 关键词：CYP2B6大肠杆菌
- FUS1基因原核表达质粒构建与诱导表达
- 2007年
- 目的构建FUS1基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta(DE3)2plys]中高效表达重组蛋白。方法采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入pET-32a(+),经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2plys细菌,并用IPTG诱导表达。结果经过PCR、测序鉴定,克隆了pET32a(+)-FUS1重组子;在低浓度IPTG(25μmol/L)诱导3h,RosettaDE3可以高效地表达重组蛋白,约占细菌总蛋白的40%。结论成功地克隆到FUS1基因,并使其在原核系统中高效表达。
- 张宝霍霞彭琳齐宗利徐锡金李燕丘波郑良楷
- 关键词：基因表达原核表达质粒
