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多基因编辑与多基因联合干预技术: 目的:动物性状特别是多基因性状的改良需要多基因联合干预。针对人类疾病的靶向药物治疗十分有效,那么针对其靶点的基因干预治疗效果也明显,因而多基因靶向干预将更加有效。本研究旨在寻找高表达、安全靶位点,建立高效多基因编辑与联合...; 唐冬生严爱芬朱向星刘连冯娟周宝珠; 关键词：TALEN; 文献传递

类转录激活因子效应物核酸酶介导的E-cad和Bmi-1基因联合干预鼻咽癌的体外研究被引量：8: 2018年; 目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1,Bmi-1)基因联合干预对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:构建多位点基因打靶载体p UC-DS1-E-cad-2ANeo-DS2(以下简称E-cad打靶载体)和p UC-DS1-Bmi-1 sh RNA-Zeo-DS2(以下简称Bmi-1打靶载体),将E-cad打靶载体、Bmi-1打靶载体及佛山科学技术学院分子医学研究院前期构建的TALEN载体以不同组合转染鼻咽癌CNE-2细胞。采用PCR检测靶基因的整合,Western印迹检测靶基因蛋白表达水平变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果:靶基因E-cad和Bmi-1 sh RNA表达元件成功整合到鼻咽癌CNE-2细胞的基因组中;转染后鼻咽癌CNE-2细胞中E-cad的蛋白表达水平明显上升,Bmi-1的蛋白表达水平明显下降;干预E-cad及Bmi-1不影响细胞的增殖、周期和凋亡,但显著抑制细胞的迁移和侵袭能力,且E-cad和Bmi-1联合干预比单独干预更能显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外迁移能力(均P<0.01)。结论:TALEN介导的E-cad和Bmi-1联合干预能有效抑制鼻咽癌CNE-2细胞的体外迁移和侵袭,可为人类癌症的基因治疗建立前期的实验基础。; 罗婷婷严爱芬严爱芬刘连蒋泓冯翠兰刘芳刘芳周天鸿; 关键词：鼻咽癌

人工转录激活子样效应因子核酸酶与多位点基因打靶载体的构建与鉴定被引量：3: 2015年; 目的构建并验证针对人类基因组核糖体DNA（rDNA）序列的转录激活子样效应因子核酸酶（TALEN）表达载体与人类通用多位点基因打靶载体。方法运用在线软件TALENs Targeter在rDNA序列上设计TALEN切割位点，并构建针对该位点的TALEN表达载体，利用细胞转染技术，筛选出一对有较高活性的TALEN，并计算其切割效率。将TALEN切割位点两侧的同源重组引导序列DSl、DS2以及GFP表达元件克隆到pUC-19质粒中，最终将TALEN与多位点基因打靶载体共转染293T细胞，经PCR与测序鉴定，对目的基因整合情况进行验证。结果经酶切、测序鉴定，成功获得一对切割活性高达78．5％的TALEN（TALEN-L1R2），成功构建人类细胞通用的多位点基因打靶载体pUC-DS1-EGFP-DS2；两种技术结合后将目的基因GFP成功整合于293T细胞基因组中。结论TALEN与多位点打靶技术结合，可有效将目的基因整合于基因组中。; 刘婉霞严爱芬刘芳蒋泓冯翠兰刘靖唐冬生张雅洁; 关键词：基因打靶核糖体DNA

蛋白芯片技术联合定量检测妇科肿瘤标志物的研究被引量：4: 2014年; 目的研究C12联合检测多种肿瘤标志物对妇科恶性肿瘤诊断的意义。方法选取100例妇科良性病变、73例健康女性和病理确诊的81例妇科恶性肿瘤(卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌)病例的血清标本,利用HD-2001A蛋白芯片仪进行12种肿瘤标志(包括CA199,NSE,CEA,CA242,CA125,CA153,AFP,Ferritin,Free-PSA,PSA,HGH andβ-HCG)的联合定量检测,对比C12芯片检测系统检测妇科恶性肿瘤与良性病变及正常对照组的差异性。结果妇科恶性肿瘤组中CA199、CEA水平及阳性率均高于良性病变组和正常对照组,统计学差异显著(p<0.05)。卵巢癌中CA199和CA125、子宫颈癌和子宫内膜癌中CEA水平高于正常对照组,差异有显著性(p<0.05)。卵巢癌中CA199和CA125联合检测能提高阳性率。结论利用C12联合检测多种肿瘤标志物可以提高恶性肿瘤诊断的准确性,其中卵巢癌中CA199和CA125、子宫颈癌和子宫内膜癌中CEA肿瘤标志物蛋白芯片检测对筛查妇科肿瘤高危人群具有重要意义。; 何宝贤陈姝刘芳蒋泓冯翠兰唐冬生; 关键词：妇科肿瘤标志物蛋白芯片分子诊断

果蝇优化算法对多峰函数求解性能的仿真研究被引量：24: 2014年; 多峰函数的寻优能力一直是衡量算法优越性的依据之一,许多传统的算法对其求解容易误将局部极值当做全局极值,针对这一问题,以Schaffer多峰函数为例,运用改进的果蝇优化算法(Improved Fruit Fly Optimization Algorithm,IFFOA)对Schaffer函数进行寻优求解,同时对其他4个测试函数进行求解.通过matlab软件测试、分析了改进的果蝇算法寻优能力的影响因素,最后通过相同的参数,分别采用遗传算法(GA)和改进的果蝇算法进行对比,通过对比发现,改进的果蝇优化算法在收敛精度和收敛速度方面,均优于和声搜索算法(HS)算法,从而验证了IFFOA算法的优越性和有效性,可以将IFFOA算法应用于其他领域.; 张勇夏树发唐冬生; 关键词：多峰函数仿真遗传算法

基于高斯函数与分级学习的D-FNN算法研究: 2014年; D-FNN基本思想是构造一个基于扩展的RBF神经网络,它可以看成是一个TSK模糊系统,也可以看做是基于归一化的高斯RBF神经网络。该文提出的算法,学习前,模糊神经网络不需要预先确定,在学习的过程中,参数估计与结构辨识同时进行,并根据系统精度要求及模糊规则的重要性,自动地产生或者删除一条模糊规则。在学习速度、系统结构和泛化能力方面进行了仿真实验,仿真结果表明D-FNN具有更简洁的结构和优良的性能。; 张勇孙亚民吴建洪; 关键词：动态模糊神经网络模糊规则高斯函数

多基因编辑与多基因联合干预: I.问题的提出:靶向药物治疗十分有效,但靶向药物的数量实在太少。既然针对靶点的靶向药物有效,那么针对靶点基因的干预治疗也将有效,多基因靶向干预也将更加有效。本研究旨在寻找高表达位点、安全靶位点,建立高效基因定点插入技术。...; 唐冬生严爱芬刘连冯娟冯翠兰; 关键词：TALEN E-CADHERIN BMI-1 基因打靶; 文献传递

基于TALEN技术的多位点基因打靶载体构建和鉴定: 人类基因治疗和转基因动物等都需要外源基因高效、持续稳定表达,本课题组前期建立了独特的多位点基因打靶技术,获得稳定表达的靶位点,但其基因定点插入效率需要进一步提高.转录激活因子样效应因子核酸酶(transcription ...; 刘婉霞严爱芬刘芳唐冬生; 关键词：转基因

Construction of TALEN Plasmids and The General Vector of Multiple Locus Gene Targeting of Human Cells: Construction of TALEN plasmids to knock out rDNA and the general vector of multiple locus gene targeting.Using...; 刘婉霞严爱芬LIU FangFENG Cui-lanLIU Jing张雅洁唐冬生; 关键词：TALEN; 文献传递

TALEN质粒转染HEK-293T细胞的条件优化被引量：3: 2015年; 本研究探讨了TALEN质粒转染HEK-293T细胞的最佳转染条件。以TALEN质粒右臂中的绿色荧光蛋白为报告基因,分别研究转染试剂、质粒DNA的量、转染试剂与质粒DNA的比例对转染效果的影响,转染24 h后荧光显微镜下统计具有代表性视野的绿色荧光细胞,计算绿色荧光细胞/总细胞数的比例得出转染率,并利用CCK-8试剂盒检测细胞存活率。实验结果表明,TALEN质粒转染293T细胞,采用Fugene HD转染试剂比Lipofectamine 2000转染试剂细胞存活率高;以6孔板为例,转染质粒DNA量为4μg时转染效率最高(49.0±8.0)%;Fugene HD与质粒DNA比例(μg/μL)为3:1时转染效率最高。本研究建立TALEN表达质粒转染HEK-293T细胞的最佳转染条件,可作为相关研究或应用提供参考。; 严爱芬刘婉霞刘芳刘靖张雅洁唐冬生; 关键词：转染 TALEN

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