四川省卫生厅研究基金(060119)
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
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- 辛伐他汀通过Caspase-12活化途径诱导K562细胞凋亡的实验研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨Caspase-12在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用。方法在K562细胞培养液中分别加入毒胡萝卜素(阳性对照组)和辛伐他汀10、20、30μmol/L(辛伐他汀组)培养72 h,采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,Annexin-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度,RT-PCR检测GRP78、Calpain基因mRNA表达水平,Western blot检测GRP78、Caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白水平。结果10、20、30μmol/L辛伐他汀作用K562细胞72 h后,细胞出现典型的凋亡形态,凋亡率分别为12.41%±0.32%、19.08±0.26%、23.41±0.36%;细胞内Ca2+浓度增加,荧光强度分别为43±2.9、54±2.7、64±2.6;GRP78、Calpain基因mRNA表达上调;Western blot检测显示:Caspase-3,-6,-7,-9,-12剪切活化,GRP78表达增强。结论Caspase-12作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡。
- 胥国强蒲泽宴刘华杨永长黄文芳
- 关键词：辛伐他汀CASPASE-12K562细胞凋亡
- 辛伐他汀对K562细胞Ras-MAPK信号通路的体内外研究被引量：2
- 2008年
- 目的通过体内、外实验研究辛伐他汀对K562细胞Ras-MAPK信号通路的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的可能机制。方法体外培养CML细胞株K562细胞,做以下实验:①用流式细胞术(FCM)检测辛伐他汀处理K562细胞后其凋亡率的变化,②18只Balb/c-nu/nu裸小鼠皮下接种K562细胞,构建裸鼠的K562细胞移植瘤模型,③TUNEL法检测辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞早期凋亡的变化,④RT-PCR检测裸鼠体内外K562细胞N-ras、c-Raf-1、ERK1mRNA水平的变化。结果辛伐他汀在体外能明显诱导K562细胞凋亡,Ras-MAPK通路大多数基因出现差异表达。不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P<0.01);辛伐他汀能够引起N-ras、c-Raf-1、ERK1mRNA水平的明显差异表达(P<0.01)。结论辛伐他汀在体内外均能够引起参与K562细胞凋亡的Ras分子和Ras分子下游分子mRNA水平的变化,从一定角度说明辛伐他汀能依赖Ras-MAPK信号通路诱导K562细胞凋亡。
- 刘文黄文芳周定安杨永长传良敏曾娅莉余招焱
- 关键词：辛伐他汀K562细胞
- 辛伐他汀对人慢性粒细胞白血病细胞K562基因表达的影响
- 2008年
- 目的应用基因芯片技术研究辛伐他汀对K562细胞基因表达的影响,初步探讨其作用机理。方法辛伐他汀作用K562细胞48h后,提取细胞总RNA。纯化mRNA后再逆转录为cDNA,将cDNA在体外转录合成cRNA,用随机引物反转录为cDNA,用Klenow酶标记Cy3、Cy5,与定制的包含人全基因组的基因芯片杂交,扫描芯片荧光信号,用GenePixPro4.0图像分析软件对芯片图像进行分析。定量RT-PCR验证芯片结果中两个差异表达基因。结果基因芯片检测发现共有176条基因表达发生明显改变,包括16条未知基因表达改变。其中151条基因表达上调,25条基因表达下调。根据基因功能的不同,我们初步将其分为凋亡相关、信号转导相关、细胞周期相关等几大类。定量RT-PCR验证的基因表达变化趋势与表达谱芯片的结果相吻合。结论辛伐他汀作用K562细胞后能引起多种基因表达改变,这为探讨其作用机制提供了新的依据。
- 黄文芳杨永长传良敏刘华曾娅莉周定安胥国强刘文
- 关键词：K562细胞辛伐他汀基因芯片慢性粒细胞性白血病
- 辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究
- 2009年
- 目的:探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制。方法:取浓度为0(阴性对照组)、10、20、30μmol·L-1的辛伐他汀作用K562细胞72h后,双染色法检测细胞凋亡率;DNALadder实验检测细胞凋亡条带;用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白;逆转录-聚合酶链反应法检测GRP78、caspase-9、caspase-3、GADD153mRNA表达;Western blot法检测GRP78、caspase-12、caspase-9、caspase-3、GADD153、细胞色素C蛋白水平。结果:与阴性对照组比较,10、20、30μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞72h后出现典型的凋亡条带,凋亡率分别为12.41%、19.08%、23.41%(P<0.01),GRP78、caspase-9、caspase-3和GADD153 mRNA表达上调(P<0.05),caspase-12、caspase-9、caspase-3蛋白水平下降,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放,GRP78、GADD153蛋白表达上调。结论:辛伐他汀可通过内质网和线粒体途径诱导K562细胞凋亡。
- 胥国强黄文芳蒲泽宴丁波涂建华陈小东
- 关键词：辛伐他汀内质网线粒体K562细胞凋亡
- 辛伐他汀通过内质网应激途径诱导K562细胞凋亡被引量：2
- 2008年
- 探讨内质网应激在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度,RT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、钙蛋白酶(calpain)基因mRNA表达水平,Western blotting检测GRP78、calpain、caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白水平。结果显示,10、20、30μmol.L-1辛伐他汀(simvastatin,Sim)作用K562细胞72 h后,细胞出现典型的凋亡形态,凋亡率分别为12.41%、19.08%和23.41%;细胞内Ca2+浓度增加,荧光强度分别为43、54和64;GRP78、calpain基因mRNA表达上调;calpain、caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白剪切活化、GRP78蛋白表达增强。以上结果表明,内质网作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡。辛伐他汀将可能被用于临床治疗白血病。
- 胥国强黄文芳刘华杨永长刘文
- 关键词：辛伐他汀内质网应激K562细胞凋亡
- 辛伐他汀抑制K562细胞MAPK1、cyclin D1、E2F1、c-myc mRNA的表达被引量：1
- 2009年
- 目的探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制。方法不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-myc mRNA表达。结果辛伐他汀能抑制K562细胞增殖,增殖抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增大(P<0.05)。与对照组比较,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48h和72h后能明显增加细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05),表明辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡。10、20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞72h后,MAPK1、cyclinD1、E2F1、c-mycmRNA表达水平明显降低。结论辛伐他汀可能通过调节Ras-MAPK途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡。
- 杨永长传良敏黄文芳刘华曾娅莉胥国强刘文
- 关键词：辛伐他汀K562细胞CYCLINE2F1C-MYC
- 辛伐他汀对K562细胞端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶表达的影响
- 2008年
- 目的探讨辛伐他汀治疗慢性粒细胞白血病可能的作用机制。方法辛伐他汀10和20μmol.L-1与K562细胞作用48或72 h后,用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡百分率;提取细胞端粒酶,用PCR-ELISA检测端粒酶活性;实时荧光定量PCR检测人端粒酶逆转录酶(hTERT),c-myc和bcl2-mRNA表达。结果辛伐他汀10和20μmo.lL-1与K562细胞作用48 h后,细胞凋亡率分别为(6.24±0.18)%和(9.41±0.22)%,与对照组(1.88±0.14)%比较明显增加;作用72 h后细胞凋亡率分别为(12.41±0.32)%和(19.08±0.26)%,与对照组(4.20±0.19)%比较明显增加。辛伐他汀10和20μmo.lL-1与K562细胞作用48或72 h后,端粒酶活性,hTERT,c-myc和bcl-2 mRNA表达明显低于对照组。结论辛伐他汀可使K562细胞端粒酶活性降低,其机制可能与下调hTERT mRNA表达有关。
- 杨永长黄文芳刘华曾娅莉胥国强刘文
- 关键词：辛伐他汀端粒酶
- 辛伐他汀通过氧化应激诱导K562细胞凋亡被引量：1
- 2009年
- 目的：观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响，探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制。方法：不同浓度辛伐他汀处理K562细胞，AnnexinV—FITC／PI双染法检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响。辛伐他汀处理K562细胞48h，流式细胞仪检测活性氧（Reactive oxygen species，ROS）浓度，免疫组织化学法测定突变P53蛋白表达。RT—PCR测定c-junmRNA表达。结果：AnnexinV—FITC／PI双染法检测结果显示，5、10、20μmol／L辛伐他汀作用K562细胞48～72h能诱导其凋亡。辛伐他汀作用K562细胞后，与对照组比较，处理组细胞内ROS明显升高。辛伐他汀处理．K562细胞后突变P53蛋白表达明显下调，c—jun mRNA表达上调。结论：辛伐他汀改变K562细胞内氧化还原状态，细胞氧化应激，下调突变P53蛋白表达，上调c-jun表达诱导K562细胞凋亡。
- 黄文芳杨永长曾娅莉刘华肖代雯胥国强刘文
- 关键词：辛伐他汀氧化应激细胞凋亡
- 基因芯片技术筛选辛伐他汀作用K562细胞的差异表达基因
- 2008年
- 黄文芳杨永长刘华曾娅莉周定安胥国强刘文
- 关键词：K562细胞辛伐他汀基因芯片
