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国家教育部博士点基金(20100092110040)
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刘建娥
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经典H-2分子mRNA探针的制备及在C57小鼠中枢神经系统原位杂交中的应用
2013年
目的:研究经典H-2基因在C57小鼠中枢神经系统中的表达谱,设计合成地高辛标记的经典H-2mRNA探针。方法:利用PCR扩增出针对经典H-2分子的特异性保守片段,然后将PCR产物纯化后与pGEM-T Easy载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中。测序后获得目的基因的单克隆,扩增并提取质粒,采用体外转录的方法合成地高辛标记的经典H-2 mRNA的正、反义RNA探针。运用原位杂交方法分析经典H-2基因在C57小鼠中枢神经系统中的表达情况。结果:成功构建了321 bp经典H-2 mRNA的正、反义探针,原位杂交方法检测到经典H-2 mRNA在出生后15 d小鼠中枢神经系统中反义探针有杂交信号,正义探针无杂交信号。结论:正义探针无杂交信号表明合成的321 bp经典H-2 mRNA反义探针具有特异性。
刘建娥
沈宇清
李明莉
吴晓箐
史茜
张建琼
关键词:
中枢神经系统
原位杂交
探针
小鼠
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