国家自然科学基金(81372096)
- 作品数：27 被引量：85H指数：6
- 相关作者：余剑波史佳宫丽荣张圆董树安更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津市南开医院天津中西医结合急腹症研究所更多>>
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- 一氧化碳对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨一氧化碳(CO)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响及可能机制。方法用含有10%胎牛血清的细胞培养基,在37℃、5%CO2细胞培养孵箱内培养大鼠肺巨噬细胞,采用随机数字表法将其分为4组(n=10):空白对照组(C组)、CO组、LPS组、LPS+CO组。CO组加入体外一氧化碳释放分子-2(CORM-2)100μmol/L孵育,LPS组加入LPS 10 mg/L,LPS+CO组加入CORM-2 100μmol/L预处理1 h后加入LPS 10 mg/L孵育,C组加入等量PBS液作为对照。每组细胞处理完毕后继续孵育24 h,采用MTT法测定细胞活力;流式细胞仪测定细胞凋亡率和线粒体膜电位;ATP酶含量试剂盒测定细胞内ATP含量;RT-PCR法测定细胞中线粒体分裂相关蛋白Drp1的m RNA含量;Western blot法测定Drp1的蛋白表达。结果与C组相比,LPS组和LPS+CO组细胞活力、ATP含量和线粒体膜电位下降,细胞凋亡率、线粒体分裂蛋白Drp1 m RNA及蛋白表达增加(P<0.05),CO组上述指标比较差异无统计学意义;与LPS组比较,LPS+CO组细胞活力、ATP含量和线粒体膜电位增加(P<0.05),细胞凋亡率、Drp1 m RNA及蛋白表达减少(P<0.05)。结论 CO可减轻LPS诱导的大鼠肺巨噬细胞损伤,其机制与下调线粒体分裂相关蛋白Drp1和改善线粒体功能有关。
- 刘伟余剑波王丹史佳
- 关键词：一氧化碳脂多糖类肺泡腺苷三磷酸膜电位
- PKCα／HO-1信号通路在内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤中的作用：与Mfn1的关系被引量：1
- 2017年
- 目的评价蛋白激酶Cα（PKCα）／血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路在内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤中的作用及其与线粒体融合蛋白-1（Mfnl）的关系。方法将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞以1×104个／ml密度接种于96孔板中。采用随机数字表法分为5组（n=15）：对照组（C组）、内毒素攻击模型组（E组）、PKCα抑制剂G06976组（G组）、PKCα激动剂PMA组（P组）和二甲基亚砜组（D组）。采用给予10μg／mlLPS刺激NR8383细胞的方法制备肺泡巨噬细胞内毒素攻击模型。G组、P组和D组于LPS刺激前30min分别给予5txmol／LG06976、100nmol／LPMA、0．1％二甲基亚砜预处理30min，再给予10μg／mlLPS，各组均孵育24h后收集细胞，检测丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）的含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，采用Westernblot法及q-PCR法检测PKCα、HO-1和Mfnl的表达。结果与C组比较，E组、G组、P组和D组MDA和ROS含量升高，SOD活性降低，PKCα、HO-1及其mRNA表达上调，Mfnl及其mRNA表达下调（P〈0．05）；与E组比较，G组MDA和ROS含量升高，SOD活性降低，PKCα、HO-1、Mfnl及其mRNA表达下调，P组MDA和ROS含量降低，SOD活性升高，PKCα、HO-1、Mfnl及其mRNA表达上调（P〈0．05），D组上述指标差异无统计学意义（P〉O．05）。结论PKCαHO-1信号通路激活后促进Mfnl表达是内毒素诱发大鼠肺泡巨噬细胞损伤时的内源性保护机制。
- 李香云王曼余剑波吴丽丽王丹史佳
- 关键词：蛋白激酶CΑ血红素加氧酶-1内毒素类线粒体蛋白质类
- 蛋白激酶C在电针干预内毒素休克肺损伤兔Nrf2表达的作用
- 2015年
- 内毒素休克可致急性肺损伤，严重者可导致急性呼吸窘迫综合征（ARDS）甚至多器官功能衰竭，病死率较高。因此，探索其具体的发病机制有利于启发新的临床治疗思路。研究证实，电针刺激足三里和肺俞穴，
- 宋凯余剑波宫丽荣史佳张圆徐妍曹新顺吴丽丽王曼
- 关键词：内毒素休克电针刺激蛋白激酶CNRF2多器官功能衰竭干预
- 内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时P13K／Akt信号通路在线粒体分裂中的作用被引量：4
- 2018年
- 目的评价内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（P13K／Akt）信号通路在线粒体分裂中的作用。方法将肺泡Ⅱ型上皮细胞以密度2×10^5／ml接种于6孔板，采用随机数字表法将其分为6组（n=10）：空白对照组（C组）、LPS组（L组）、LPS＋CORM一2组（L＋CO组）、LPS＋I｜Y294002组（L＋LY组）、LPS＋无活性的CORM-2（iCORM-2）组（L＋iCO组）、LPS＋甲基亚砜组（L＋D组）。L组、L＋CO组、L＋LY组、L＋iCO组和L＋D组采用10Ixg／mlLPS孵育24h；于LPS孵育前1h时，L＋CO组、L＋LY组、LPS＋iCO组分别加入CORM-2100μmol、LY29400225I-Lg、iCORM-2100μmol：L＋D组于LPS孵育前1h加入0．1％二甲基亚砜100Ixmol。细胞孵育结束后，采用ELISA法测定培养液TNF-a和IL-6浓度。采用Westernbolt法测定细胞磷酸化Akt（p-Akt）、血红素加氧酶-1（HO-1）、线粒体动力相关蛋白1（Drpl）、线粒体分裂相关蛋白1（Fisl）的表达。结果与C组比较，L组、L＋CO组、L＋LY组、L＋iCO组和L＋D组培养液TNF-a和IL-6浓度升高，p-Akt、HO-1、Drpl和Fisl表达上调（P〈0．05）。与L组比较，L＋C0组TNF-a和IL-6浓度降低，p-Akt和HO-1表达上调。Drpl和Fisl表达下调．L＋LY组TNF-a和IL-6浓度升高，p-Akt和HO．1表达下调，Drpl和Fisl表达上调（P〈0．05）。结论内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时P13K／Akt信号通路激活可抑制线粒体分裂。
- 曹涵冰史佳宫丽荣张圆董树安余剑波
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶内毒素类肺泡
- p38MAPK信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用：与Nrf2的关系被引量：6
- 2015年
- 目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用及其与核因子E2相关因子2（Nrf2）的关系.方法 健康雄性新西兰大白兔70只,2月龄,体重1.5 ～ 2.5 kg,采用随机数字表法分为7组（n=10）：对照组（C组）、内毒素休克诱发急性肺损伤模型组（A组）、p38MAPK抑制剂组（SB组）、模型＋p38MAPK抑制剂组（A-SB组）、模型＋电针组（A-EA组）、模型＋电针非穴位组（A-NEA组）和模型＋电针穴位＋p38MAPK抑制剂组（A-EA-SB组）.模型制备前1～4d及模型制备过程中,A-EA组和A-EA-SB组电针刺激穴位,采用疏密波2/100 Hz,强度以出现轻微肌颤为宜,30 min/次,1次/d,A-NEA组采用同样的频率以及强度电针刺激穴位旁开0.5 cm处,A组、A-SB组、A-EA组、A-NEA组和A-EA-SB组静脉注射内毒素5 mg/kg,C组和SB组给予等容量生理盐水.模型制备成功后SB组、A-SB组和A-EA-SB组静脉注射p38MAPK抑制剂5μmol/kg,C组给予等容量生理盐水,其余各组给予等容量无水乙醇.静脉注射内毒素或生理盐水后6h,取颈动脉血样行血气分析后放血处死动物,取肺组织行病理学观察并进行肺损伤评分,计算肺湿重/干重（W/D）比值,测定肺组织MDA含量及SOD活性,检测磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）及Nrf2表达水平.结果 与C组比较,A组、A-SB组、A-EA组、A-NEA组和A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量、p-p38MAPK及Nrf2表达水平升高,SOD活性降低（P＜0.05）;与A组比较,A-EA组和A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量降低,SOD活性、p-p38MAPK及Nrf2表达水平升高（P＜0.05）;与A-EA组比较,A-EA-SB组肺损伤评分、W/D比值、肺组织MDA含量升高,SOD活性、p-p38MAPK及Nrf2表达水平降低（P＜0.05）.结论 p38MAPK信号通路介导了电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤,其机制与其上调Nrf2表达有关.
- 高雪松宫丽荣余剑波史佳董树安吴丽丽张圆
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶类电刺激疗法NF-E2相关因子2
- 依达拉奉联合针灸对老年颅内出血术后脑损伤的治疗作用被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨依达拉奉联合针灸对老年颅内出血术后患者认知功能的影响。方法:选取颅内出血行微创颅内血肿清除术后的老年患者100例,随机分为对照组和联合治疗组,分别给予依达拉奉及依达拉奉联合针灸疗法。实施格拉斯哥昏迷指数(GCS)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS评分)和事件相关电位P300检测,测定治疗前后外周血C反应蛋白(CRP)、基质金属蛋白酶(MMP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)。结果:联合治疗组疗效好于对照组(90%vs 72%,P<0.05)。两组间治疗前GCS评分、NIHSS评分均无显著差异(P>0.05),治疗后联合治疗组GCS评分[(51.2±6.7)分]优于对照组[(42.3±5.2)分,(P<0.05)]。治疗后NIHSS评分[(35.4±11.2)分]优于对照组[(51.9±13.7)分,(P<0.05)]。治疗前两组间T-SOD、MMP-9、CRP和P300潜伏期、波幅没有显著差异(P>0.05)。联合治疗组治疗后T-SOD[(51.2±6.7)U/L]和P300波幅[(5.99±0.54)V]高于对照组,MMP-9为(35.4±11.2)mg/L、CRP为(54.2±16.7)mg/L,P300潜伏期为(295.68±18.07)ms,均低于对照组(P<0.05)。结论:依达拉奉与针灸疗法联合可显著改善老年急性颅内出血后脑损伤患者的认知功能状态,可能与其阻断氧自由基级联反应以及缩短P300潜伏期和升高P300波幅有关。
- 姜连浩余剑波
- 关键词：依达拉奉针灸颅内出血脑损伤
- 急性肺损伤中线粒体动力学变化被引量：1
- 2015年
- 背景急性肺损伤（acute lung injury，ALI）病因复杂，病情发展迅速，死亡率高，是临床常见的急危重症。目的探讨ALI时线粒体动力学变化及影响因素。内容ALI时线粒体融合减少及分裂增加，致线粒体片段化，功能失调。线粒体动力学的这些改变与体内活性氧（reactive oxygen species，ROS）生成过多、炎症因子过度释放及细胞凋亡等有关。趋向随着ALI时线粒体动力学变化机制的不断深入研究，可望为ALI的治疗提供新思路。
- 刘伟余剑波
- 关键词：急性肺损伤活性氧炎症因子
- CORM-2通过p38MAPK信号通路对脂多糖刺激大鼠肺巨噬细胞中线粒体分裂蛋白Fis1的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨CORM-2通过p38分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号通路对脂多糖（LPS）刺激大鼠肺巨噬细胞中线粒体分裂蛋白Fisl的影响。方法将传代培养的大鼠肺泡巨噬细胞以2×105／mL密度接种于96孔板。培养24h后，采用随机数字表法将其分为4组：正常对照组（C组）、LPS组（L组）、CO释放剂CORM-2＋LPS组（LC组）、p38MAPK抑制剂SB203580＋CORM-2＋LPS组（LCS组）。细胞孵育24h时，应用试剂盒测定线粒体MDA含量及SOD活力，应用Westernblot测定HO-1、线粒体相关分裂蛋白Fisl和p38的表达。应用RT—PCR测定HO-1和FislmRNA含量的表达。结果与c组比较，L组MDA[2．43±0．12 vs．3．59±0．07]含量、HO-1[1．31±0．27 vs．1．65±0．41]、Fisl[1．27±0．23 vs．1．65±0．41]、p38[1．01±0．24 vs．1．36±0．17]表达水平升高，SOD[81．7±1．62 vs．54．7±1．62]活力降低（P〈0、05）；与L组比较，Lc组MDA[3．59±0．07 vs．3．08±0．52]含量、Fisl[2．01±0．35 vs．1．48±0．39]表达水平降低，SOD[54．7±1．62VS．67．4±1．32]活力、HO-1[1．65±0．41 vs．2．25±0．18]、p38[1．36±0．17 vs．1．78±0．23]表达水平升高（P〈0、05）；与LC组比较，LCS组MDA[3．08±0．52vs．4．16±0．19]含量、Fisl[1．48±0．39vs．1．96±0．31]表达水平升高，SOD[67．4±1．32vs．45．9±1．52]活力、HO-1[2．25±0．18 vs．1．78±0．19]、p38[1．78±0．23VS．1．12±0．29]表达水平降低（P〈0、05）。结论HO-1／CO抑制LPS刺激大鼠肺巨噬细胞中线粒体分裂蛋白Fisl表达机制与p38MAPK信号通路有关。
- 康元元史佳余剑波傅强张圆宫丽荣董树安
- 关键词：血红素加氧酶1肺巨噬细胞脂多糖SB203580
- PKCα/HO-1信号通路在LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用:与线粒体融合的关系被引量：1
- 2018年
- 目的评价蛋白激酶Cα/血红素氧合酶-1(PKCα/HO-1)信号通路在LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用及其与线粒体融合的关系。方法肺泡Ⅱ型上皮细胞以2×10^5个/ml密度接种于96孔培养板,采用随机数字表法分为5组(n=40):对照组(C组)、Go6976组(G组)、内毒素组(L组)、内毒素+Go6976组(LG组)和内毒素+二甲基亚砜组(LD组)。LG组加入Go69765μmol/L,LD组加入等容量0.1%二甲基亚砜,30min后L组、LG组和LD组分别加入LPS10μg/ml制备肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤模型,G组加入Go6976 5μmol/L,C组加入等容量PBS。各组均孵育24h后收集细胞,检测丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用q-PCR法及Westernblot法测定细胞PKCα、HO-1以及线粒体融合蛋白1(Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩蛋白1(OPA1)及其mRNA的表达水平。结果与C组比较,L组、LG组和LD组MDA和ROS含量升高,SOD活性降低,PKCα、HO-1及其mRNA的表达上调,Mfn1、Mfn2和OPA及其mRNA的表达下调(P<0.05),G组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与L组比较,LG组MDA和ROS含量升高,SOD活性降低,PKCα、HO-1、Mfn1、Mfn2和OPA1及其mRNA的表达下调(P<0.05),LD组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论PKCα/HO-1信号通路激活是LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的内源性保护机制,可能与促进线粒体融合有关。
- 赵晏民史佳余剑波张圆宫丽荣董树安
- 关键词：蛋白激酶CΑ血红素加氧酶-1脂多糖类肺泡
- 线粒体抗氧化应激系统与融合-分裂研究进展被引量：4
- 2014年
- 氧化应激反应发生于机体活性氧自由基产生和消除动态失衡、机体抗氧化应激系统功能下降时。由于可造成严重组织和器官损伤，已逐渐引起关注。目前，已发现线粒体内多种抗氧化应激因子如维生素E、维生素C、超氧歧化酶、谷胱甘肽、旷硫辛酸、胆红素等均与抗氧化应激相关。
- 王颖余剑波
- 关键词：机体抗氧化线粒体内活性氧自由基氧化应激反应超氧歧化酶抗氧化应激
