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河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A320866): 作品数：14 被引量：12H指数：2; 相关作者：杨慈清林俊堂李晗付苏雷李小英更多>>; 相关机构：新乡医学院新乡市驼人医疗器械有限公司河南省中医学院更多>>; 发文基金：河南省教育厅科学技术研究重点项目国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响: 2014年; 目的：分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法：采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d（E5）,将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到视顶盖内,然后电转基因,E12时收集胚胎;小鼠胚胎发育的15 d（E15）进行子宫内电转,将2μg/μl的shRNA-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到一侧脑室,电转基因后E20时收集胚胎。冰冻切片,采用免疫荧光组织化学和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果：在鸡胚模型中,ADAM17的超表达并不会明显的引起神经前体细胞迁移的改变,对细胞核转录因子Pax7的表达也没有影响;在鼠胚模型中,ADAM17的抑制表达能够引起神经前体细胞迁移受阻,但并没有引起大脑皮层各层的结构的变化。结论：ADAM17的抑制表达对神经前体细胞的迁移具有抑制作用,但并不会引起大脑皮层结构的改变。; 杨慈清李小英王聪睿付苏雷李晗林俊堂; 关键词：ADAM17 神经前体细胞鸡胚小鼠胚胎

鸡胚发育过程敲减神经型钙黏蛋白表达对视顶盖神经元迁移及神经丝蛋白的影响被引量：2: 2013年; 目的阐明鸡胚发育过程神经型钙黏蛋白（N-cadherin）在中枢神经系统中的作用及其对神经丝蛋白（NF）表达的影响。方法鸡胚正常培养到第3天（E3），采用鸡胚带壳开窗培养方法，取出3～4ml蛋清，开窗培养至E5，将N-cadherin干扰载体pGPU6-GFP-neo-N-cadherin-shRNA通过活体电转基因技术导入视顶盖，电转后继续培养到E12，每组收集3个胚胎，取材，固定，包埋，切片后进行荧光免疫组织化学分析相关蛋白的表达。结果鸡胚发育过程，敲减N-cadherin表达影响神经元迁移，被敲减的细胞主要停留在室管膜区，在N-cadherin受到抑制表达的区域，NF的表达也受到抑制，其表达明显减弱。结论 N-cadherin的抑制表达可导致神经元的迁移发生紊乱，影响NF的表达。; 杨慈清李琼付苏雷李晗范义峰郭志坤林俊堂; 关键词：视顶盖神经丝蛋白鸡胚

N-cadherin通过β-catenin调控鸡胚脊髓连合纤维向对侧的投射被引量：1: 2015年; 目的:阐明鸡胚发育过程中神经钙黏蛋白(N-cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)在脊髓连合纤维发育中的作用。方法:在鸡胚发育第3天(stage22),将N-cadherin和β-catenin干扰载体通过活体电转基因技术导入脊髓,电转后继续培养3 d(stage29),取材、固定、包埋和切片。分为N-cadherin干扰组、β-catenin干扰组,β-catenin和N-cadherin共同干扰组以及转染p GU6-GFP-neo表达质粒对照组;采用荧光免疫组织化学法检测N-cadherin和β-catenin蛋白表达变化;根据GFP表达结果,观察脊髓连合纤维的投射情况。结果:在鸡胚发育过程中,在脊髓抑制N-cadherin的表达会降低β-catenin的表达;在Ncadherin抑制表达72 h后观察到脊髓连合纤维向对侧的投射产生被抑制;抑制β-catenin表达出现类似向对侧投射障碍;Ncadherin和β-catenin同时被干扰时,连合纤维投射的抑制效果相似。结论:N-cadherin参与调控脊髓连合纤维的发育过程,其部分作用机制可能是通过下调β-catenin的表达实现的。; 杨慈清李小英王聪睿张必超李晗林俊堂; 关键词：鸡胚 Β-连环蛋白神经纤维

小鼠胚胎发育过程中N-Cadherin异常表达对大脑皮层神经元迁移的影响被引量：3: 2013年; 目的:探究N-Cadherin异常表达对小鼠大脑皮层发育过程中神经元迁移的影响。方法:通过小鼠活体子宫电转基因技术和RNA干扰技术相结合,在小鼠胚胎大脑皮层发育过程中实现对N-Cadherin的超表达和抑制表达,荧光免疫组化检测超表达结果,用GFP示踪N-Cadherin超表达和抑制表达后神经元在大脑皮层发育过程中的迁移特征。结果:与对照组相比,N-Cadherin超表达后有更多的GFP阳性神经元迁移到皮层的Ⅱ-Ⅳ层;N-Cadherin被抑制后大量GFP阳性神经元停滞在SVZ区。结论:N-Cadherin在小鼠大脑皮层发育过程中对神经元的迁移具有影响作用。; 付苏雷杨慈清贾阳阳李晗郭志坤林俊堂; 关键词：神经元迁移 RNA干扰

鸡胚发育早期Sonic Hedgehog在脊髓中的异位表达对形态结构及相关蛋白表达的影响: 2014年; 该文主要分析音猬因子（Sonic Hedgehog,Shh）在鸡胚发育过程中对脊髓形态结构的形成和相关蛋白表达的影响。实验过程采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3 d,将2μg/μL pCAGGS-Shh和0.25μg/μL pCAGGS-GFP质粒以1：8浓度混合,将0.1~0.5μL混合液准确地注射到神经管,在电压18 V、每次脉冲60 ms、间隔100 ms、电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6 h开始到5 d分别收集胚胎,冰冻切片,采用荧光免疫组化和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果表明,电转后6 h便可以观察到GFP的表达,24 h时Shh在脊髓中的异位表达能够诱导转录因子Nkx2.2（NK2 homeobox 2）的表达,并且能够抑制Pax7（paired-type homeobox 7）的表达,而Shh异位表达时脊髓的结构发生了明显的改变;说明Shh作为脊髓发育过程重要的信号分子,其异位表达能够诱导和抑制相关蛋白的表达,影响脊髓正常发育。; 李小英杨慈清王聪睿付苏雷李晗林俊堂; 关键词：鸡胚脊髓

一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射研究方法的建立被引量：3: 2014年; 目的建立一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。方法采用鸡胚带壳开窗培养技术,在鸡胚胚龄3d(E3),通过活体电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到脊髓腔进行定时定位活体电转,转染后3d在体视荧光显微镜下进行观察;取出GFP阳性表达的胚胎,剥离出脊髓,从顶板处破开之后将脊髓展开,用4%多聚甲醛固定1h后,对神经钙黏蛋白(N-cadherin)进行免疫荧光染色,用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染细胞核;封片后在荧光显微镜下观察神经纤维投射情况。结果对比横向切片和脊髓展开标本,两者均观察到GFP阳性转染侧的神经元纤维穿过底板沿对侧脊髓白质区边缘投射到神经结节,在脊髓展开标本中还可观察到神经纤维穿过底板再纵向向脑部投射;而N-cadherin免疫荧光染色结果表明,GFP基因的转染对机体正常的发育无明显影响。结论本实验建立了一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。; 胡阿珍杨慈清付苏雷贾阳阳李晗郭志坤林俊堂; 关键词：脊髓神经纤维鸡胚

不同Reelin基因型小鼠海马结构组织学差异被引量：1: 2016年; 目的通过对不同Reelin基因型小鼠海马区组织学结构的比较分析,为Reelin在海马结构形成中的作用提供依据。方法选择杂合子Reelin小鼠繁殖后代,在出生后10d进行基因型鉴定,设Reelin+/+、Reelin+/-和Reelin^-/-3组,每组3只小鼠。鉴定后的小鼠通过4%多聚甲醛心脏灌注后剥离全脑,通过多聚甲醛固定、蔗糖脱水后冷冻切片,采用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)为细胞核染色,用免疫荧光标记T-box brain gene 1(Tbr-1)、神经元核抗原(Neu N)和GFAP特异性表达的细胞,光学显微镜下观察、摄片后对结果进行分析。结果从DAPI染色的细胞核及Tbr-1、Neu N和GFAP标记的细胞结构可以看出,Reelin+/+型小鼠和Reelin+/-型小鼠海马区都具有相似的结构,但将Reelin+/+和Reelin^-/-型小鼠相比较,Reelin^-/-型小鼠海马结构模糊,齿状回细胞向门区扩散,海马本部的细胞层结构紊乱,出现密集双细胞带,GFAP标记细胞减少。结论 Reelin缺失表达对小鼠大脑正常结构的形成具有明显的影响。在Reelin表达缺失后海马区齿状回细胞分布弥散,海马本部细胞层的分布紊乱,胶质细胞及纤维分布减少。; 杨慈清李小英张必超郭潇周洁林俊堂; 关键词：REELIN 海马免疫荧光

大鼠肺鳞癌组织中Pokemon基因与MDM2基因表达的相关性: 2014年; 目的：探讨原癌基因Pokemon与癌基因MDM2在大鼠肺鳞癌发生发展过程中的表达及意义.方法：采用Wistar大鼠实验组灌注三甲基胆蒽与二乙基亚硝胺诱癌,对照组灌注碘油,采用原位杂交法检测肺鳞癌发生、发展各阶段的基因转录及表达水平.结果：实验组诱癌率为80％,其中支气管黏膜上皮增生28％,不典型增生17.3％,原位癌37.3％,侵袭癌26.7％,转移癌21.3％.Pokemon基因对照组与不典型增生组、鳞癌组比较差异有统计学意义;转移癌组和非转移癌组比较差异有统计学意义.MDM2基因对照组与不典型增生组、鳞癌组比较差异有统计学意义,转移癌与非转移癌比较差异有统计学意义.Pokemon基因与MDM2基因两者表达呈正相关.结论：Pokemon基因与MDM2基因在大鼠肺鳞癌的演进过程中呈现逐渐的高表达,两者可能共同参与了大鼠肺鳞癌的发生、发展过程.; 范文艳杨慈清王坦裴静静杨廷桐; 关键词：肺鳞癌 POKEMON MDM2 原位杂交

N-Cadherin异常表达对293T细胞形态结构及连环蛋白表达的影响被引量：2: 2013年; 目的:实现鸡源N-Cadherin在293T细胞中的过表达及其抑制表达,进一步分析N-Cadherin异常表达对293T细胞内源性β-catenin和α-catenin的表达及细胞形态结构的影响。方法:采用脂质体转染法,设对照、过表达和抑制表达3组,将pCAGGS-GFP、pCAGGS-N-Cadherin和pCAGGS-N-Cadherin/pGPU6-GFP-neo-N-Cadherin-shRNA质粒分别转染到293T细胞中,转染后48小时观察拍照,荧光免疫组化检测N-Cadherin和相关蛋白表达情况。结果:N-Cadherin过表达后会改变293T细胞的形态,其细胞突起明显增加,而对N-Cadherin干扰后,突起又会消失,并且外源性N-Cadherin的过表达会使得293T细胞内源性β-catenin和α-catenin的表达升高,抑制其表达β-catenin和α-catenin表达也随之减弱,并表现出β-catenin在核内的聚集。结论:异源性N-Cadherin的表达明显改变293T细胞的形态,并且内源性β-catenin和α-catenin的表达与N-Cadherin的表达呈正相关。; 李小英杨慈清范义峰贾阳阳付苏雷胡阿珍李晗林俊堂; 关键词：293T细胞 RNA干扰 Β-连环蛋白

Caspase-3和Caspase-9在PC-12细胞移植肿瘤模型中的表达及意义: 2015年; 为了在建立的PC-12细胞肿瘤移植模型基础上,对不同时间点肿瘤组织中的Caspase-3和Caspase-9的表达进行检测,探讨Caspase-3和Caspase-9在肿瘤发展过程中的作用和意义,试验将指数生长期的PC-12细胞以0.1 m L(1×107个/m L)的密度接种于出生第7天的昆明白小鼠右前肢腋窝皮下,在接种后的不同时间点(7,14,21天)分别进行取材,将肿瘤块及邻近组织一并取下,通过多聚甲醛固定、包埋剂包埋后进行冰冻切片,采用荧光免疫组织化学法对Caspase-3和Caspase-9的表达进行检测。结果表明:刚出生7天的昆明白小鼠,接种PC-12细胞后7天时便可以明显观察到肿瘤块的形成,在14天时肿瘤块最大,21天时肿块减小,到28天时肿瘤块基本消失;对照组小鼠肌肉组织中Caspase-3和Caspase-9都呈现低表达。在移植肿瘤7天的肿块实体组织中,Caspase-3和Caspase-9都呈阳性表达;在14天时实体组织中表达降低,但是在周围组织中的表达增强;在21天时周围组织的表达也减弱。说明普通昆明白小鼠幼鼠中不能够建立真正的肿瘤模型,但是短期内仍能形成瘤块,在不同时间点,Caspase-3和Caspase-9表达具有明显的区域和量的差异,但是Caspase-3和Caspase-9表达部位和表达量的变化具有相似性。; 李小英杨慈清王聪睿付苏雷林俊堂; 关键词：PC-12细胞细胞移植肿瘤 CASPASE-3 CASPASE-9

河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A320866)

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