国家自然科学基金(30571835)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学重庆工学院更多>>
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- Inhibition of Proliferation of Human Hela Cells by Small Interference RNA against Pokemon Gene
- 2008年
- 客观 transcriptional 抑压者 Pokemon (由 Zbtb7 基因编码了) 是在瘤形成的一个关键因素。在表达式上的 Pokemon 导致公开 oncogenic 转变在转基因的鼠标的在试管内和在活体内。这研究的目的是调查表示在人的颈的癌症房间指向 Pokemon 的 siRNA 的制动火箭病毒的效果。我们构造了并且识别了 recombinant 制动火箭病毒粒子表示 Pokemon 基因的 siRNA 的方法，然后证明了 recombinant 原生质标志的抑制并且评估了基因沉默效果。我们得到了的结果从殖民地形成的积极评估试验我们发现表示指向 Pokemon 的 siRNA 的制动火箭病毒让了镇压效果。我们的工作为制动火箭病毒在活体内的抑制效果和目标建筑群的设计的学习提供基础的结论。
- 邓一静倪兵姜曼杨玓李凡吴玉章
- 关键词：反转录病毒
- 骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位预测及初步鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的鉴定骨髓瘤抗原Sp17的HLA-A*0201限制性CTL表位。方法采用超基序和量化基序法预测Sp17的HLA-A*0201限制性CTL表位;用T2细胞亲和力实验和稳定性实验对该表位进行初步鉴定。结果超基序和量化基序法预测得出Sp17抗原的4个CTL表位(LLEGLTREI(19-27)I、LREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)、KEKEEVAAV(111-119)),亲和力实验结果表明LLEGLTREI(19-27)I、LREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)有较高亲和力,而KEKEEVAAV(111-119)肽亲和力较低;稳定性实验表明ILREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)与HLA-A*0201分子结合稳定性较好。结论ILREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)有可能是骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位。
- 杨玓姜曼李凡邓一静倪兵吴玉章
- 关键词：肿瘤抗原CTL表位
- Pokemon基因siRNA逆转录病毒的制备及其对Hela细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的针对多种肿瘤细胞高表达Pokemon基因的特性,制备表达针对Pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中Pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法。方法首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒;利用RT-PCR技术筛选出高表达Pokemon基因的肿瘤靶细胞。然后,将重组质粒转染靶细胞,利用实时定量RT-PCR和MTT等方法筛选出沉默效果最佳的siRNA。利用逆转录病毒包装细胞制备重组病毒,鉴定病毒滴度及其对体外培养细胞中Pokemon基因的沉默效应。结果通过酶切鉴定和测序等方法证实了预测出的四条siRNA编码DNA片段成功地构建到逆转录病毒表达载体pSilencer5.1-H1中。通过将这些重组质粒转入高表达Pokemon基因的Hela肿瘤细胞中,抗生素压力筛选出相应表达各种siRNA的细胞株,再从中筛选出了1个有50%以上沉默效应的候选siRNA。利用这一条siRNA表达质粒,在逆转录病毒包装细胞中制备出了滴度为105cfu/mL的重组病毒。此重组病毒感染Hela细胞后能显著降低其中Pokemon基因的表达。结论成功制备了表达人Pokemon基因siRNA的重组逆转录病毒,并且在体外实验中证实了该病毒能对肿瘤细胞Hela的增殖产生明显的抑制作用,为下一步的体内抗肿瘤研究提供了有力的佐证。
- 石晶磊贾正才邓一静吴玉章倪兵
- 关键词：POKEMON基因逆转录病毒RNA肿瘤治疗
- Ran HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定
- 2006年
- 目的寻找并鉴定肿瘤相关抗原Ran来源的HLA-A2.1限制性CTL表位,为临床开展基于Ran表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法应用超基序和量化基序相结合的方法初步预测Ran的HLA-A2.1限制性CTL表位,利用其与T2细胞亲和力实验以及与T2细胞结合稳定性试验初步验证预测结果。结果应用超基序和量化基序相结合的方法得到4个候选表位IMFDVTSRV(88-96),TLGVEVHPL(42-50),YVATLGVEV(39-47)和VLCGNKVDI(118-126),亲和力试验结果显示IMFDVTSRV,TL-GVEVHPL和YVATLGVEV有较高的的亲和力而VLCGNKVDI无明显亲和力,结合稳定性试验显示在这4个候选肽中IMFD-VTSRV的结合稳定性最好。结论IMFDVTSRV最有可能是肿瘤抗原Ran的HLA-A2.1限制性CTL表位。
- 李凡姜曼杨玓邓一静倪兵吴玉章
- 关键词：RAN肿瘤相关抗原细胞毒性T淋巴细胞表位
- SSX基因家族HLA-A2.1限制性CTL表位预测及其MHC-Ⅰ亲和力分析被引量：1
- 2006年
- 目的 通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测，并对其与MHC-I亲和力进行分析，为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法 利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2．1限制性CTL表位预测软件，对SSX基因家族不同成员进行CTL表位预测，然后合成SSX相关待测表位肽P1（AMTKLGFKA）、P4（AMT-KLGFNV）、P5（AMTKLGFKV）和P6（VMTKLGFKV），再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力及其结合物稳定性进行实验分析。结果与实验阳性肽（HBcAg，18～27）相比，除P1外，P4、P5、P6均显示较高的结合亲和力；而结合稳定性实验（DC50）结果显示，P1、P4与阳性对照肽（HBcAg，18～27）DC。均大于8h，而P5和P6的DC50介于2～4h之间。结论 计算机软件预测的CTL表位肽，经过体外亲和力与结合稳定性实验筛选到2条理想的表位肽，为该表位的下一步体内鉴定奠定基础。
- 何仰东吴玉章林治华贾正才姜曼黎万玲付晓岚邓一静倪兵
- 关键词：表位预测
- Pokemon基因siRNA逆转录病毒重组表达质粒的构建及鉴定被引量：12
- 2006年
- 目的针对Pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对Pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRNA的DNA片段。将此双链DNA片段克隆到pSilencer 5.1-H1 Retro vector的BamHⅠ和HindⅢ位点,构建其逆转录病毒重组表达质粒。结果表达人类Pokemon基因的siRNA逆转录病毒重组表达质粒构建成功。结论我们成功构建了人类Pokemon基因的重组逆转录病毒重组表达质粒,为下一步Pokemon基因的RNA干扰提供了实验依据,并且开辟了肿瘤基因治疗的新思路。
- 邓一静倪兵姜曼杨玓李凡吴玉章
- 关键词：POKEMON基因重组逆转录病毒RNA干扰
