国家自然科学基金(30571831)
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
- 相关作者：王建伟李江涛刘颖斌彭淑牖刘付宝更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院新疆医科大学附属肿瘤医院更多>>
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- 胆囊癌肝转移模型的建立和高转移细胞亚群的筛选被引量：10
- 2006年
- 目的建立胆囊癌肝转移模型并通过模型筛选高转移亚群细胞,为胆囊癌肝转移研究提供良好的实验工具。方法胆囊癌GBC-SD细胞在含10％胎牛血清的RPMI1645体外培养、胰蛋白酶分离、生理盐水制备细胞悬液1×107／ml,4-6周龄裸小鼠脾脏接种建立胆囊癌转移模型;从实验动物肝转移灶中分离肿瘤细胞,经过原代、传代培养,同样的方法建立转移模型,进行第二轮和第三轮高转移表型胆囊癌细胞亚群的筛选。光镜下观察转移灶和筛选细胞的形态特征;抽提细胞与实验动物肝组织DNA,PCR扩增三对人类特异的微卫星序列。结果建立了裸小鼠胆囊癌肝脏转移模型,转移灶分布肝实质各处,但以边缘为主。左叶多受侵犯,部分全肝转移。组织学观察转移病灶为腺癌。第一轮、第二轮、第三轮出转移模型在接种后10周、7周、5周形成肉眼转移灶,转移率为60％、70％、90％。从第三轮转移灶中筛选出高转移胆囊癌细胞亚群,命名为GBC-SD／M3。与亲代细胞GBC-SD相比,所筛选的GBC-SD／M3具有相似的形态特征。GBC-SD、GBC-SD／M3在微卫星D14S68、D18S69、D20S199位点扩增产物片段完全相同,荷瘤裸鼠肝脏没有扩增出相应的产物片段。结论本实验成功建立了胆囊癌肝转移模型;从转移模型中筛选出高转移胆囊癌细胞亚群GBC-SD／M3,与亲代细胞GBC-SD相比,形态和遗传背景保留一致性,但具有更高转移能力。
- 刘颖斌何小伟王建伟李江涛李克强刘付宝薛建锋朱锦辉李兵彭淑牖
- 关键词：胆囊肿瘤肿瘤转移
- VEGF反义寡核苷酸对人胆囊癌细胞VEGF、Flt-1及KDR mRNA和蛋白水平表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的体外研究 Oligofectamine 介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1及 KDR 在 mRNA 和蛋白水平的表达及生长增殖和凋亡的影响。方法运用 Oligofectamine 介导的 VEGF ASODN 和 SODN 转染人胆囊癌细胞 GBC-SD,半定量 RT-PCR 检测各组细胞 VEGF、Flt-1及 KDR mRNA 转染前后不同时间的表达变化、ELISA 测定转染后各组细胞培养上清液 VEGF 蛋白浓度。结果 ASODN 组及 ASODN+Oligofectamine 组都能显著抑制 VEGF、Flt-1及 KDRmRNA 的表达,且 VEGF ASODN+Oligofectamine 的抑制作用比 ASODN 更强(P>0.05)。ELISA 测定结果显示 ASODN 组及 ASODN+Oligofectamine 组均抑制 VEGF 蛋白的分泌(P<0.05),且 ASODN+Oligofectamine 组的 VEGF 蛋白浓度低于 ASODN 组(P>0.05)。结论 VEGFASODN 能抑制人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1和 KDR 在 mRNA 水平的表达和 VEGF 蛋白的表达,从而促进 GBC-SD 细胞的凋亡;Oligofectamine 能明显增强 VEGF ASODN 的抑制效果。
- 方河清李海军刘颖斌王许安马孝明孔颖陈燕陈德琴翁伟宏张志平KR Devkota王建伟李江涛曹利平彭淑牖
- 关键词：内皮生长因子
