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沉默Vsx1基因后金鱼胚胎的差异蛋白质组学研究被引量：2: 2009年; Vsx1基因是与金鱼眼睛空间模式形成相关的调控基因和二倍体依赖型机制的侯选目标基因.为进一步探究Vsx1在金鱼胚胎发育过程中的功能及其调控方式,采用反义寡核苷酸技术抑制Vsx1的表达,应用双向凝胶电泳(2-DE)进行蛋白分离,经PDQuest软件图谱分析,质谱分析初步鉴定,获得了Vsx1沉默引起的13个差异蛋白质,如Prohibitin-2(PHB2)、Nme2 protein等,并对这些差异蛋白质可能直接或间接地受到Vsx1的调控机理和Vsx1在金鱼胚胎发育过程中的功能进行了初步的理论分析,为进一步阐明Vsx1的功能和调控机制奠定了良好的基础.; 喻小燕陈妍曹晶谢锦云; 关键词：VSX1 反义寡核苷酸金鱼胚胎蛋白质组双向凝胶电泳

金鱼雌核发育单倍体胚胎不同发育时期的差异蛋白质组学研究被引量：1: 2009年; 为了进一步研究在金鱼雌核发育过程中不同发育阶段的单倍体蛋白质表达水平的差异,阐明单倍体不能正常发育的机制,利用金鱼雌核发育单倍体尾鳍出现期两个不同发育时期(W1,W2)的胚胎为材料,进行了比较蛋白质组学分析.结果鉴定到了一些与发育调控、神经发育、细胞分化等相关的12个差异蛋白质,并根据功能差异将其分为五种不同类型,这些差异蛋白质的鉴定为进一步阐明单倍体的发育异常机制奠定了良好的基础.; 喻小燕陈锋菊谢锦云; 关键词：金鱼胚胎蛋白质组双向凝胶电泳

受精卵反义寡核苷酸显微注射影响因素的研究被引量：1: 2007年; 以金鱼受精卵为材料,通过胚胎培养探讨反义寡核苷酸显微注射剂量、受精卵质量、胰酶消化浓度等对受精卵反义寡核苷酸显微注射的影响.研究表明,反义寡核苷酸注射剂量在4.6nL、胰酶消化浓度在0.4%的情况下,选用质量较好的受精卵注射,显微注射效果较好,可为之后的基因功能研究提供材料保障.利用显微注射法导入反义寡核苷酸来研究基因的功能,是研究基因功能的有效途径.; 喻小燕曹晶陈妍谢锦云梁宋平; 关键词：金鱼反义寡核苷酸技术显微注射胚胎培养

金鱼雌核发育单倍体发育过程中的比较蛋白质组学研究被引量：3: 2008年; 前期已有工作发现在金鱼雌核发育单倍体中一些与发育调控相关的重要蛋白质表达受阻导致单倍体的发育畸形。为了进一步阐明单倍体的发育机制,共收集了3个不同发育时期金鱼单倍体胚胎(HE-1、HE-2、HE-3)进行雌核发育单倍体的差异蛋白质组研究。研究采用二维凝胶电泳进行分离,利用PDQuest软件进行图谱分析,质谱分析初步鉴定到了15个差异蛋白质。这些蛋白质在金鱼雌核发育单倍体的发育中起着重要作用,为进一步阐明单倍体的发育机制奠定了良好的基础。; 张玲周新文谢锦云黄树林; 关键词：金鱼胚胎发育过程双向电泳蛋白质组

基于质谱的BLAST方法在金鱼胚胎蛋白质鉴定中的应用: 2006年; 未知基因组及蛋白质序列数据库有限的物种的蛋白质组学分析是当前一些非模式生物物种蛋白质组学研究领域的瓶颈之一.基于同源性搜索的BLAST方法(MSBLAST),是近年新发展起来的一种用于未知基因组的蛋白质鉴定的搜索工具,已成功应用于许多未知基因组物种的蛋白质鉴定.SPITC化学辅助方法是本实验室建立的一种改进的denovo质谱测序方法.采用MSBLAST方法对经Mascot软件数据库搜索未能鉴定到的19个金鱼胚胎蛋白质进行鉴定,其中12个蛋白质是直接测序后进行MSBLAST搜索得到的结果,另外7个蛋白质是联合MSBLAST和SPITC衍生方法得到的鉴定结果.实验结果证明,采用MSBLAST方法进行蛋白质的跨物种鉴定具有可行性和可靠性,给蛋白质的跨物种鉴定提供了一条新的途径.; 张玲徐东陈锋菊谢锦云梁宋平; 关键词：从头测序蛋白质组学

金鱼胚胎蛋白质双向凝胶电泳方法建立及优化: 2009年; 以金鱼胚胎为材料，以不同样品制备方式、裂解液成分、固相pH梯度胶条的选择、凝胶浓度为侧重点，建立并优化金鱼胚胎总蛋白质组最佳双向凝胶电泳技术条件。研究表明，采用匀浆器匀浆含硫脲和NP-40裂解液提取蛋白，应用pH值为3～10的非线性IPG胶条和浓度14％的SDS-PAGE凝胶进行双向电泳，经优化电泳电流、时间等参数后，获得了重复性和分辫率理想的金鱼胚胎总蛋白质双向电泳图谱，为金鱼胚胎蛋白质组分析奠定了基础，为揭示金鱼单倍体发育异常的机制提供了技术保障。; 喻小燕陈妍曹晶谢锦云; 关键词：金鱼胚胎蛋白质组双向凝胶电泳

大鼠背根神经节细胞质膜的双水相法纯化及其蛋白质组学研究(英文)被引量：2: 2009年; 大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞是一种初级感觉神经元,能传导触觉、痛觉、温觉等神经冲动.为了对少量的DRG组织细胞进行质膜蛋白质组学分析,综合利用差速离心与双水相相结合的方法富集DRG质膜.然后通过SDS-PAGE、CapLC-MS/MS和生物信息学方法对其中的蛋白质进行鉴定和分析.Western blotting图谱扫描后经过Quantity One软件分析,双水相纯化后的质膜与差速离心后得到的粗质膜相比相对浓度增加了2.3倍,与匀浆液相比增加了15倍.经过大鼠IPI数据库以及相关文献检索,有729个蛋白质得到鉴定,其中547个蛋白质具有GO(gene ontology)注释信息,有159(21.8%)个蛋白质定位在质膜上.通过对大鼠DRG质膜的蛋白质组学研究,得到了大鼠DRG的质膜蛋白质的分析数据,且提供了一种适用于少量样品的蛋白质组学的分析路线.; 熊霞沈剑英李建军张海王贤纯梁宋平; 关键词：背根神经节质膜双水相蛋白质组学

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国家自然科学基金(90408017)