国家自然科学基金(30600681)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：邢晓为向红杨幼波王维袁洪更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅三医院中南大学更多>>
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- 小鼠睾丸生精新基因SRG4原核表达与纯化被引量：4
- 2007年
- 目的：原核表达小鼠睾丸生精新基因SRG4, 并对重组蛋白进行纯化, 为研究SRG4的生物学功能奠定基础.方法：应用RT-PCR从小鼠睾丸中扩增SRG4 C端包含一个Sad1_UNC like domain的587 bp片段, 将PCR产物克隆至pUCm-T载体.随后, cDNA片段亚克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE-30中, 测序鉴定.将重组质粒PQE-30-SRG4转化大肠杆菌M15, IPTG诱导, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化.结果：成功地构建了原核表达质粒PQE-30-SRG4.IPTG诱导4 ～5 h, SRG4融合蛋白表达量达最高.Western blot分析证实, IPTG诱导表达的蛋白是SRG4融合蛋白.Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的SRG4融合蛋白.结论：重组质粒PQE-30-SRG4能在大肠杆菌M15中表达, 包含Sad1_UNC like domain的纯化SRG4融合蛋白可用于研究SRG4在精子发生中的生物学功能.
- 邢晓为袁洪王维
- 关键词：原核表达融合蛋白精子发生
- SPAG4L在人类睾丸中的表达研究
- 2010年
- 目的:观察人类睾丸新基因SPAG4L在人类不同发育阶段睾丸及隐睾中的表达,为了解该基因在精子发生中的功能奠定基础;方法:收集流产胎儿、成年人、老年人及隐睾患者的睾丸组织,应用RT-PCR和组织原位杂交技术检测SPAG4LmRNA的表达;结果:RT-PCR和组织原位杂交技术检测结果发现,SPAG4L在胎儿睾丸中几乎检测不到,在成年及老年男性睾丸中均有高表达,主要在精母细胞和圆形精子细胞中表达;在隐睾患者的睾丸中,精母细胞大量凋亡,SPAG4L表达明显下调;结论:SPAG4L主要在精子发生减数分裂阶段表达,受生长发育调控,提示该基因可能在精子发生减数分裂阶段发挥着重要的生理功能。
- 邢晓为李昌琪张建伟
- 关键词：睾丸隐睾精子发生
- SUN基因家族新成员TSARG4的特性研究
- SUN 蛋白是真核生物中一类比较保守的蛋白家族。到目前为止,人们已经对该蛋白家族的4个成员进行了深入研究,他们分别是 SUN1,SUN2,SUN3和 SPAG4.在前期研究中,作者从人类睾丸文库中分离到了一条长为1252...
- 邢晓为袁洪闾宏伟王维王一平
- 关键词：睾丸精子发生基因功能
- 文献传递
- 核纤层蛋白B1的功能及其在神经系统疾病和肿瘤中的研究新进展
- 2018年
- 核纤层蛋白B1 (Lamin B1)是核纤层蛋白家族重要成员之一,其主要功能在于维持细胞核骨架完整性,并通过影响染色体分布、基因表达及DNA损伤修复等参与细胞的增殖和衰老。其表达异常与多种疾病有关,如神经系统疾病(神经管畸形,ADLD)及肿瘤(胰腺癌)等,是潜在的药物靶点和肿瘤标志物。对Lamin B1功能的深入研究,将有助于对相关神经系统疾病和肿瘤发生发展的分子机制的了解并为治疗靶点研究提供新方向。
- 刘思阳伍勇杨林飞李小花黄利华邢晓为
- 关键词：细胞核骨架细胞活动神经管畸形肿瘤
- 人TSARG4真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立被引量：7
- 2009年
- 目的:构建人TSARG4基因真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染TSARG4的HeLa细胞系。方法:应用RT-PCR从人睾丸中扩增TSARG4的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到pUCm-T载体中测序验证。随后,将TSARG4进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中。用脂质体将经过测序、验证的pcDNA3.1(+)/TSARG4质粒转染HeLa细胞,通过G418筛选建立TSARG4稳定转染的HeLa细胞系。RT-PCR和组织原位杂交技术检测TSARG4在稳定转染的HeLa细胞系中的表达。结果:成功构建了pcDNA3.1(+)/TSARG4表达质粒,建立了稳定转染的HeLa细胞系。RT-PCR和组织原位杂交检测结果表明,TSARG4基因在该细胞系中成功表达。结论:TSARG4真核表达载体成功构建和稳定转染HeLa细胞系的建立为进一步体外研究TSARG4的功能奠定了基础。
- 杨幼波向红邢晓为
- 关键词：基因表达转染RT-PCR
- 人睾丸新基因SPAG4L的原核表达与纯化被引量：2
- 2010年
- 目的原核表达人睾丸生精相关基因SPAG4L,并对重组蛋白进行纯化,为下一步研究SPAG4L的生物学功能奠定基础。方法运用RT-PCR从人睾丸中扩增编码SPAG4L126-379的基因片段,并将PCR产物克隆至pUCm-T载体。用限制性内切酶EcoR I和Hind III消化后,将目的片段克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE30中。重组质粒PQE-30-SPAG4L经酶切和测序验证后,转化大肠杆菌JM15,IPTG诱导融合蛋白表达。SPAG4L融合蛋白以westernblot进行鉴定,最后用NI-NTA磁性琼脂糖珠进行纯化。结果成功构建了重组表达质粒PQE-30-SPAG4L,并能够在大肠杆菌JM15中诱导表达,经Western blot分析证实,IPTG诱导表达的是SPAG4L融合蛋白。建立小规模的SPAG4L融合蛋白表达、纯化系统,获得了带有6个组氨酸标签的纯化的SPAG4L融合蛋白。结论成功地对人睾丸生精相关基因SPAG4L进行了体外原核表达,获得了纯化的融合蛋白蛋白,为进一步研究该蛋白在精子发生中的生物功能奠定了基础。
- 蒋先镇杨明刚邢晓为
- 关键词：克隆原核表达融合蛋白
- pEGFP-C3/Tsarg1融合蛋白在GC-1 spg细胞中的表达与定位
- 2010年
- 目的构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体并在GC-1spg细胞中表达,为研究Tsarg1在生精过程中的机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从大鼠睾丸中扩增Tsarg1的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到T载体中测序验证。随后,将Tsarg1cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-C3,筛选阳性克隆,构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体。脂质体介导重组体pEGFP-C3/Tsarg1转染GC-1spg细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位。结果成功构建了pEGFP-C3/Tsarg1真核表达质粒,EGFP-Tsarg1融合蛋白能够在GC-1spg细胞中表达,Tsarg1蛋白定位于细胞胞浆。结论 pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体的成功构建及带GFP标签的Tsarg1融合蛋白在GC-1spg细胞中的成功表达为进一步研究Tsarg1的生物学功能奠定了基础。
- 张懿邢晓为
