国家自然科学基金(30600666)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 相关作者：魏丽惠王建六赵丽君孙蓬明宋一一更多>>
- 相关机构：北京大学福建省妇幼保健院柏林洪堡大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省科技计划重点项目福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同雌激素受体表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性分析被引量：1
- 2009年
- 目的分析并比较不同雌激素受体（ER）表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性。方法采用实时荧光定量lit-PCR技术检测子宫内膜癌细胞系RL-952[ERα、ERβ表达均阳性（±）]、HEC-1A[ERa表达弱阳性（±）、ERβ表达阴性（-）]、HEC-1B[ERα、ERβ表达均（-）]细胞中ERαmRNA的表达。采用345通量转录因子芯片检测RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子的活性，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测不同转录活性的转录因子NFKBp65、p38MAPK以验证芯片检测结果。结果ERαmRNA在RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中表达水平依次递减，分别为（6780±282）、（684±84）、（168±38）copy／ng。转录因子NFκBp65、p38MAPK的转录活性采用ELISA方法检测（分别为2．0±0．4、0．9±0．5，P=0．020）与芯片检测（分别为3003±530、882±538，P=0．017）结果一致。在345个转录因子中，筛选出与ER功能相关的差异表达的转录因子共28个，与ER（±）的RL-952细胞相比，ER（-）的HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子活性同时上调的有13种，同时下调的有15种。转录因子TTF（1）-1、NRF-1、TCE的活性与ERamRNA表达水平呈明显线性正相关关系（r=0．523，P=0．037），而转录因子RFX123和Ikaros的活性与ERamRNA表达水平呈明显非线性负相关关系（r=-0．312，P=0．041）。结论转录因子芯片检测是筛选子宫内膜癌致病机制中主要转录因子的先进技术。转录因子TTF（1）-1、NRF-1、TCE可能与ER（±）子宫内膜癌中的信号传导通路相关；转录因子RFX123和Ikaros可能与ER（-）子宫内膜癌中的信号传导通路相关。
- 孙蓬明魏丽惠赵丽君刘宁王建六宋一一陈贤绿林灏
- 关键词：子宫内膜肿瘤转录因子
- 人ERRα基因小分子干扰RNA慢病毒载体构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建并鉴定靶向人ERRα基因的小分子干扰RNA的慢病毒载体。方法针对ERRαmRNA设计了4条si RNA,并构建pGCSIL-GFP-siERRα慢病毒质粒,PCR扩增阳性克隆并测序鉴定。用pGCSIL-GFP-siERRα、pHelp-er1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将慢病毒干扰RNA及含有ERRα过表达载体共转染293T细胞,Western-blot检测ERRα表达,观察蛋白表达抑制效果。结果 PCR和测序结果与设计的干扰序列一致,病毒滴度达2×109TU/ml。转染细胞中ERRα蛋白表达显著降低。结论成功构建高表达、高效率的人ERRα基因小分子干扰RNA慢病毒载体,为进一步研究ERRα在细胞核内转导中的作用机制和靶向ERRα治疗奠定基础。
- 孙蓬明毛晓丹林芬蔡良知吴齐斌宋一一
- 关键词：RNA干扰
- 孤儿核受体-雌激素受体相关受体α-1亚型在卵巢癌中表达的临床意义被引量：2
- 2008年
- 目的:明确孤儿核受体-雌激素受体相关受体(Estrogen receptor-related receptors,ERRs)α-1亚型在卵巢癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组化方法检测人ERRα-1在45例卵巢癌组织标本和15例正常卵巢组织中的mRNA和蛋白表达情况;采用ELISA方法分析各样本的血清CA125水平;随访指标为整体生存时间和无瘤生存时间。结果:免疫组化分析表明ERRα-1在卵巢癌组织中的表达率显著高于正常组织(P<0·05)。定量PCR分析表明卵巢癌组织中ERRα-1的mRNA平均表达丰度显著高于正常卵巢组织(P<0·05)。卵巢癌患者血清CA125水平分析显示ERRα-1阳性组CA125明显升高(P<0·05)。随访结果显示ERRα-1阳性的卵巢癌患者的整体生存时间比ERRα-1阴性患者明显减少(P<0·05),但两组无瘤生存时间并无差异(P>0·05)。结论:ERRα-1可能在卵巢癌的发生发展中起重要作用,ERRα-1表达增加与卵巢癌的预后不良有关。
- 孙蓬明魏丽惠王建六袁淑惠宋一一Jalid Sehouli
- 关键词：卵巢癌孤儿核受体临床预后肿瘤标记物
- ERRα过度表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨孤儿受体-雌激素受体相关受体α(ERRα)在子宫内膜癌Ishikawa细胞中过度表达对内分泌治疗的影响。方法重组并构建含有绿色荧光蛋白(GFP)和G418耐药筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa后采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况。使用不同浓度的ICI182780处理子宫内膜癌Ishikawa细胞、Ishikawa-空载体细胞(Ishikawa-空)和ERRα过度表达的(Ishikawa-ERRα)细胞,流式细胞技术检测分析10-6mol/LICI182780对细胞诱导的凋亡情况。结果瞬时转染pEGFP-N1-ERRα质粒后,Ishikawa在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRα的表达增加。流式细胞仪细胞凋亡分析表明,ERRα过度表达导致子宫内膜癌细胞Ishikawa耐受ICI182780的诱导凋亡作用(P<0.05)。结论 ERRα过度表达为激素依赖性的子宫内膜癌细胞株Ishikawa提供了一种耐受内分泌治疗的机制。
- 孙蓬明宋一一高敏毛晓丹赵丽君林芬魏丽惠
- 关键词：内分泌治疗耐受机制
