安徽省自然科学基金(11040606M181)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 人乙酰肝素酶基因增强子的初步筛选与鉴定
- 2013年
- 目的:初步筛选并鉴定出人乙酰肝素酶(HPSE)基因内具有增强子(enhancer,enh)活性的DNA片段。方法:增加Kpn I、Sal I酶切位点,将含有报告基因增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)质粒载体pEGFP-N1改造为pEGFP-MU。选取HPSE基因5'端启动子上、下游的DNA序列并分为10个片段,分别命名为enhx(x分别等于1、2、3……10),每段长1 200 bp,相邻两段间重复200 bp。分别扩增上述10个片段和猿猴病毒40(SV40)增强子序列,分别插入pEGFP-MU,以构建重组质粒pEGFP-MU-enhx和pEGFP-MU-SV40e,并用脂质体2000转染肝癌细胞BEL-7402、胃癌细胞SGC-7901,荧光显微镜和流式细胞仪分析上述候选序列对启动子(CMV)转录活性的影响。结果:琼脂糖凝胶电泳和DNA测序结果显示,PCR克隆序列与GeneBank中序列完全一致。酶切电泳和测序结果显示,重组质粒pEGFP-MU-enhx和pEGFP-MU-SV40e构建符合要求。瞬时细胞转染、荧光显微镜和流式细胞仪分析发现,重组质粒pEGFP-MU-enh6、pEGFP-MU-enh7和pEGFPMU-enh8在人BEL-7402、SGC-7901细胞中表达增强,与阳性对照质粒pEGFP-MU-SV40e相似,其余重组质粒表达较弱。结论:成功克隆人HPSE基因10个增强子候选序列片段,并正确构建重组质粒pEGFP-MUenhx;其中第6、7和8候选片段可能具有增强子活性。本研究为后续进一步筛选和鉴定有活性的增强子序列缩小了搜寻范围,并为将来利用HPSE增强子进行肿瘤基因治疗提供了实验依据。
- 陈晓鹏杨来志葛国朝崔巍屠佳田野
- 关键词：乙酰肝素酶增强子启动子肿瘤质粒
- 乙酰肝素酶转录因子在恶性肿瘤中的表达调控
- 2012年
- 乙酰肝素酶（heparanase,HPSE）是目前发现的哺乳动物细胞中唯一能切割细胞外基质中硫酸肝素蛋白多糖侧链—硫酸乙酰肝素的一种葡萄糖醛酸内切酶,在肿瘤的进展过程中发挥着重要作用。HPSE在恶性肿瘤中常有高表达,
- 屠佳陈晓鹏
- 关键词：乙酰肝素酶转录因子恶性肿瘤
- 乙酰肝素酶与肿瘤转移及治疗应用被引量：1
- 2012年
- 乙酰肝素酶（也称类肝素酶,heparanase,HPSE）是目前发现的动物细胞中唯一能够降解细胞外基质中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖侧链的内源性糖苷酶,与肿瘤侵袭和转移密切相关,可作为评价肿瘤患者临床预后的一个指标。
- 田野陈晓鹏
- 关键词：乙酰肝素酶肿瘤
