上海市科学技术委员会科研基金(044119619)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：潘红芽陈万涛张志愿张萍周晓健更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会科研基金上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金更多>>
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- 细胞周期蛋白D1反义寡核苷酸调控联合顺铂抑制口腔鳞癌耐药细胞的研究被引量：3
- 2006年
- 目的通过体内外实验探讨细胞周期蛋白(cyclinD1)与舌鳞状细胞癌对顺铂(CDDP)耐药细胞系(Tca8113/CDDP)耐药的相关性。方法通过脂质体将cyclinD1正义、反义寡核苷酸序列分别导入Tca8113/CDDP细胞内。用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染细胞系和耐药细胞系体外生长增殖情况及对顺铂的敏感性。将被转染的细胞及Tca8113/CDDP细胞接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,共18只,每组6只。给予顺铂腹腔注射治疗,观察移植瘤体积变化,绘制生长曲线;称取瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织病理学变化。结果转导mRNA3′cyclinD1反义寡核苷酸的Tca8113/CDDP细胞在动物体内外生长明显受到顺铂的抑制;裸鼠皮下移植瘤抑瘤率达74%(P<0.05),移植瘤重量较对照组和转导正义寡核苷酸序列组差异均有统计学意义(P<0.05);光镜下可见反义寡核苷酸组移植瘤坏死明显。结论cyclinD1基因的反义调控联合顺铂能抑制Tca8113/CDDP细胞的生长能力及体内移植瘤的生长。研究结果提示:抑制cyclinD1可能增加口腔鳞状细胞癌对顺铂的敏感度。
- 周晓健余杨潘红芽陈万涛张萍张志愿
- 关键词：细胞周期蛋白D1顺铂
- 舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系细胞周期蛋白D1 RNA干扰的体外研究被引量：5
- 2006年
- 目的用人工合成的耐药相关基因细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的小分子干扰RNA(siRNA)处理人舌鳞癌顺铂耐药细胞系(Tca8113-CDDP),探讨对靶基因转录调控的作用效果以及剂量和时间效应关系,为耐药性逆转提供实验依据。方法CY3荧光素标记阳性对照基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)siRNA,分别于转染后4、24、48、72h在激光共聚焦显微镜下观察瞬时转染率,优化转染条件。用SYBR(绿色荧光染料法、实时定量PCR技术分析目的基因mRNA的表达情况,同时采用蛋白印迹(Westernblot)检测目的基因蛋白水平的表达。四甲基偶氮唑盐法检测cyclinD1siRNA处理后细胞对顺铂敏感性的影响。结果优化转染条件后,Tca8113-CDDP细胞中CY3的GAPDHsiRNA转染率达90%以上。转染cyclinD1siRNA后24、48hmRNA表达的抑制率为81.6%、80.7%,72h最为明显,为94.3%。在低于100nmol/L浓度下,RNA干扰抑制与剂量大小有关;当剂量进一步加大时,抑制效应则维持在“平台期”。转染24、48和72h后,cyclinD1蛋白的表达也明显下降。siRNA干扰组和对照组细胞在顺铂作用后细胞生长抑制率分别为58.4%、34.8%。结论化学合成的cyclinD1siRNA在体外实验中,对Tca8113-CDDP细胞中目的基因的沉默提高了细胞对顺铂敏感性,并呈现剂量和时间依赖效应。
- 周晓健张志愿张萍潘红芽陈万涛叶冬霞
- 关键词：顺铂
