国家自然科学基金(30600619)
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
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- 相关机构：第二军医大学上海交通大学医学院附属第九人民医院上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 绿色荧光标记共培养睾丸体细胞体内、外培养观察
- 2011年
- 目的:对Wistar大鼠睾丸间质体细胞转染携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒,为进一步标记睾丸间质体细胞移植组织工程实验奠定基础。方法:获取Wistar大鼠睾丸间质体细胞,用慢病毒转载绿色荧光对其转染标记,体外培养,在共聚焦荧光显微镜下动态观察细胞生长、增殖等情况。回植于去势鼠体内,培养一定时期后取心脏血进行雄激素的检测。结果:睾丸间质体细胞于90h后,在荧光显微镜蓝光激发波长下,可发出明亮的绿色荧光,转染率达80%。传代后的细胞仍能发出明亮的绿色荧光。回植后血清学检测有明显高于对照组的激素检出。结论:经GFP转染后的睾丸间质体细胞仍具有睾丸间质体细胞的特性。采用携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒标记睾丸体细胞中梭形及不规则形细胞(SLCs等)转染细胞效率高且持久、简便有效,且能保持睾丸间质体细胞原有生物学特性。
- 李鸣徐枫徐红霞王晓云樊星毕宏达邢新
- 关键词：绿色荧光细胞标记
- 睾丸支持细胞的基本生物学特性被引量：2
- 2008年
- 目的通过了解睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)的基本生物学特性,探讨SC鉴定的良好方法。方法联合应用复合胶原酶及差速贴壁法从睾丸组织中分离、培养SC,光镜和电镜下观察细胞的形态、MTT法测定细胞的生长曲线,观察其在体外培养条件下的增殖特性;利用免疫细胞染色及免疫荧光染色的方法,检测Fas配体(FasL)的表达,观察其免疫功能;应用吖啶橙荧光染色进行细胞鉴定。结果联合应用复合胶原酶及差速贴壁法分离、培养的细胞在光镜下呈长柱状及三角形,增殖能力强,电镜下胞核中可见特异性卫星小体,胞质中细胞器丰富,免疫细胞染色及免疫荧光染色证实其高表达FasL,吖啶橙荧光染色可见胞核中含有大量异染色质,核仁明显,证实其为SC。结论复合胶原酶及差速贴壁法分离的SC具有良好的增殖能力及免疫功能,电镜、吖啶橙荧光染色是鉴定SC方便、有效的方法。
- 韩妲丽王晓云邢新周广东刘伟曹谊林
- 关键词：支持细胞FAS配体吖啶橙
- 睾丸支持细胞与间质细胞的相互作用被引量：8
- 2008年
- 睾丸中主要包括3种细胞,支持细胞与间质细胞及生精细胞。生精细胞与生精有关;间质细胞分泌雄激素;而支持细胞主要维持睾丸曲细精管的结构、维持血睾屏障的完整性、维护睾丸组织天然免疫豁免的功能以及对生精细胞及间质细胞功能的调控,因此间质细胞与支持细胞为组织工程睾丸组织构建的潜在种子细胞。本文就间质细胞及支持细胞之间的相互作用、调控予以综述。
- 韩妲丽邢新王晓云
- 关键词：睾丸组织支持细胞间质细胞
- 共培养大鼠睾丸体细胞组织工程技术构建雄激素分泌组织被引量：8
- 2007年
- 目的探讨应用组织工程技术体内外构建具有一定形态和睾酮分泌功能组织的可行性。方法雄性 Wister 大鼠,无菌切取双侧睾丸,制备去势及移植鼠动物模型。睾丸去包膜,剪碎,胶原酶消化,经差速贴壁或直接混合共培养方法,分别获取睾丸间质细胞(Leydig 细胞)和共培养的睾丸多种体细胞,两类细胞分别与可降解生物材料聚羟基乙酸(PGA)纤维复合并进行体外培养,光、电镜观察体外组织形成过程,定期检测培养液内睾酮分泌水平。取体外培养7 d 细胞-材料复合物,分别移植于去势鼠睾丸鞘膜腔或大网膜内(n=6),不同时间点取材,通过大体观察、组织学染色和免疫细胞化学方法,检测移植鼠体内雄激素分泌组织的形成过程及血睾酮水平。结果两类细胞均与PGA 具有良好的亲和性,体外可形成具有一定睾酮分泌功能的细胞一材料复合物,体内移植2个月后,两类细胞-材料复合物在大网膜和睾丸鞘膜内均可形成具有一定形态的雄激素分泌组织,再生组织具有良好的血管化。血睾酮检测及统计分析结果表明,移植6周后,单纯 Leydig 细胞组血睾酮水平为(0.60±0.04)μg/L,共培养细胞组血睾酮水平为(0.85±0.03)μg/L,均明显高于单纯去势鼠血睾酮水平(0.56±0.05)μg/L(P<0.01),两组移植鼠相比,共培养细胞移植组血睾酮水平明显高于单纯Leydig 细胞移植组(P<0.01)。结论以共培养睾丸体细胞作为种子细胞在体内外构建雄激素分泌组织具有可行性,共培养睾丸内体细胞是雄激素分泌组织构建的良好种子细胞。
- 王晓云邢新周广东刘伟曹谊林
- 关键词：睾酮莱迪希细胞
- 大鼠睾丸Leydig细胞体外增殖研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨通过优化细胞培养体系,实现Leydig细胞的体外增殖培养。方法:联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得3周龄雄性Wistar大鼠睾丸Leydig细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液及优化培养体系培养,MTT法、细胞计数法检测培养细胞的增殖能力;分别对原代培养2h、4d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞术分析,检测细胞成分,同时检测培养细胞睾酮在hCG刺激下分泌能力变化。结果:优化培养体系能够明显促进3周龄大鼠睾丸Leydig细胞大量增殖,群体倍增时间为(2.26±0.31)d,传统培养体系培养细胞群体倍增时间为(16.32±2.14)d,两者差异有显著性(P<0.05);原代细胞经流式细胞术鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为(54.3±7.1)%,培养4d后,增殖细胞3β-HSD阳性细胞率为(93.6±4.6)%。增殖细胞均有睾酮生成功能,在hCG刺激下睾酮分泌均明显上升(P<0.05)。结论:优化培养体系能够促进差速贴壁法获得的睾丸Leydig细胞大量增殖。
- 毕宏达王晓云周广东刘伟李鸣邢新
- 关键词：LEYDIG细胞睾酮增殖
