国家科技支撑计划(2007BAD48B01)
- 作品数：31 被引量：152H指数：8
- 相关作者：刘志昕王健华张雨良冯团诚余乃通更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学福建出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备被引量：8
- 2010年
- 用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获得了含BBTV CP基因的重组质粒pET30a-CP。将重组质粒转化Codon plus表达菌,在25℃、0.4mmol/L IPTG条件下诱导6h或过夜,经12%SDS-PAGE电泳分析可知,该重组菌表达了一个与预期分子量大小一致的His-CP融合蛋白,约为30ku,且主要以包涵体的形式存在。多次洗涤包涵体后得到高纯度的融合蛋白,用其免疫家兔,获得BBTV CP蛋白抗血清。间接ELISA法测定抗血清效价大于51200。Western blot分析表明,抗血清能与融合蛋白特异性结合。
- 余乃通冯团诚王健华张雨良刘志昕
- 关键词：香蕉束顶病毒CP基因原核表达纯化
- 香蕉束顶病毒Haikou2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备
- 2012年
- 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产。BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究。本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2 ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备。结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3 h。融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清。Western blot实验表明抗血清具有特异性;酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954μg/mL浓度的表达纯化蛋白。
- 谭老喜王洪星张雨良王健华章绍延周朋余乃通刘志昕
- 关键词：原核表达抗血清制备
- 高粱花叶病毒Hcpro、CP和PIPO基因酵母双杂交载体构建及自激活验证
- 2012年
- 采用同源克隆技术获得侵染甘蔗高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)的Hcpro、CP、PIPO基因片段。将该基因片段连接至pGBKT7载体,分别构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-Hcpro、pGBKT7-CP和pGBKT7-PIPO,经PCR、酶切及测序鉴定,证明重组诱饵载体构建成功后,将重组质粒导入Y2H Gold酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性。含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/-His营养缺陷平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对ADE2、HIS3报告基因无自激活作用。研究结果为下一步利用酵母双杂交系统检测与高粱花叶病毒Hcpro、CP、PIPO蛋白相互作用的甘蔗蛋白提供基础。
- 张雨良黄启星张树珍王健华余乃通刘志昕
- 关键词：CP酵母双杂交诱饵载体
- 香蕉镰刀菌枯萎病拮抗放线菌的分离筛选及作用机制的初步研究
- 香蕉镰刀菌枯萎病是一种对外检疫性病害，是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)侵染引起的维管束系统性的病害，又称巴拿马病、黄叶病。本实验对从海南省东方、八所、黄流、三亚和...
- 秦涵淳王敏黄俊生
- 关键词：香蕉镰刀菌枯萎病生物防治放线菌菌株筛选拮抗机制
- 棕榈象甲Rhynchophorus palmarum入侵中国的风险分析被引量：1
- 2010年
- 运用国际植物检疫措施实施标准(ISPM)的有害生物风险分析(PRA)程序,建立棕榈象甲入侵风险分析评估模型,采用定性分析和多指标综合评估相结合的方法进行分析。结果显示,国内分布情况(P1),风险值为3;潜在的经济危害性(P2),风险值为2.6;寄主植物的经济重要性(P3),风险值为3;传播扩散的可能性(P4),风险值为1.64;风险管理难度(P5),风险值为2.33。棕榈象甲的综合风险性值为2.46,符合高风险检疫性害虫条件,对我国的棕榈科植物威胁很大。
- 黄山春覃伟权李朝绪阎伟
- 关键词：有害生物风险分析风险值棕榈科植物检疫性害虫检疫措施寄主植物
- 甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化被引量：4
- 2011年
- 为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。
- 张雨良熊国如王健华张树珍官梅花杨文君刘志昕
- 关键词：甘蔗黄叶病毒RNA干扰烟草转化
- 海南岛实蝇群落的多样性分析被引量：15
- 2010年
- 2007～2009年在海南岛内海口、文昌、三亚、儋州、琼中、吊罗山、尖峰岭和霸王岭等8个地方,选择代表性区域,采用实蝇性诱捕剂和蛋白引诱法对8个地区实蝇群落的生物多样性进行分析。结果表明,海南实蝇可全年发生,其中,尖峰岭的实蝇种类丰富度最高,有18种,其次是霸王岭和琼中,有15种,吊罗山14种,海口和三亚均为12种,文昌和儋州的实蝇种类丰富度低,同为11种;海南区域实蝇群落优势种为桔小实蝇[Bactrocera(Bactrocera)dorsalis(Hendel)],常见种有差异;海口和琼中实蝇群落常见种同为瓜实蝇[B.(Zeugodacus)cucurbitae Coquillett];吊罗山和霸王岭常见种同为锈红实蝇[B.(Z.)rubigina Wang&zhao];文昌、三亚、儋州和尖峰岭无常见种。3年的试验结果表明,实蝇群落多样性指数均以三亚最低。各地实蝇种类相似性变化不大,相似性系数为0.36～0.76。
- 李伟东刘福秀周卫川林明光冯香善徐卫韩玉春
- 关键词：实蝇桔小实蝇多样性
- 瓜实蝇的有效积温及其在中国的年发生代数预测被引量：9
- 2008年
- 瓜实蝇Bactrocera cucurbitae Coquillett是世界上重要的检疫性害虫,通过在14、18、22、26、30、34℃温度下孵化和饲养实验,测定该虫卵、幼虫、蛹、产卵前期、世代的发育起点温度和有效积温分别是8.0982℃、4.5245℃、4.5245℃、7.4751℃、10.0019℃和28.8506、162.7462、145.7249、166.5126、503.8343日度。根据该虫的致死温度和有效积温模型,运用数学分析和地理信息系统技术,预测了瓜实蝇在中国的适生区和年发生代数,结果表明:该虫可在中国48.96%地区发生(气象站点所代表的地区),1年发生2-12代,以4～6代为主。
- 李伟东肖琼艾洪木陈寿铃周卫川
- 关键词：瓜实蝇有效积温适生性年发生代数
- 槟榔黄化病叶片差异表达蛋白筛选与鉴定被引量：4
- 2010年
- 以相同品种,树龄、长势一致的黄化病槟榔和健康槟榔叶片为试材,采用TCA(三氯乙酸)/丙酮法制备蛋白质样品,结合双向电泳-质谱结合技术,分析病原菌-槟榔互作后差异表达蛋白。结果表明,双向电泳SDS-PAGE胶中黄化病槟榔叶片与健康叶片平均蛋白质点数分别为1081个和960个,其中差异明显的点34个。选择5个差异蛋白点进行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定,并进行数据库查询,结果鉴定了2个蛋白质,分别为核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶和蕈状支原体高同源蛋白,这些蛋白质可能参与了槟榔黄化病发生和发展过程。另外3个蛋白点在数据库中未检索到同源性和匹配率较高的蛋白质,认为是未知蛋白。
- 曾莉娟李涛王健华张雨良刘志昕
- 关键词：槟榔蛋白质双向电泳
- 海南香蕉条斑病毒的检测被引量：4
- 2010年
- 香蕉条斑病毒(Banana streak virus,BSV)是香蕉上一种重要的病毒。本文运用血清学检测法和PCR检测法对海南主栽巴西蕉(Musa Cavendish,AAA)、粉蕉(Musa Pisang Awak,ABB)进行了BSV的调查检测。结果表明,参试无症状或症状各异的样品血清学检测结果均为阴性,说明这些被测品中可能不含有游离BSV粒子;上述样品中部分样品的PCR检测结果却为阳性,将PCR扩增的特异条带回收、测序和比对,显示确实扩增到BSV部分基因组序列。结合血清学检测结果,说明海南部分香蕉的基因组已经整合了BSV的基因组序列。
- 陈善辉王健华曾燕君刘志昕
