博士科研启动基金(03200823)
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
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- 基因重组Kringle 5蛋白急性经口毒性试验研究
- 2010年
- 目的检测基因重组Kringle 5蛋白的急性经口毒性,为其临床应用提供医学毒理学依据。方法采用小鼠急性经口毒性试验并采用霍恩法测定半数致死量(LD50)。结果 1周内试验动物未见明显中毒症状及死亡发生,采用霍恩法测定LD50>10g/kg。结论基因重组Kringle 5蛋白属实际无毒级。
- 陈显久解军张悦红牛勃
- 关键词：急性毒性试验小鼠KRINGLE
- Kringle5基因工程制备方法的研究进展
- 2011年
- Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原的第5个饼环区结构,在体外具有抑制内皮细胞增殖、迁移的生物学活性,在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成及肿瘤的生长和转移,在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中具有广阔的应用前景。本文对国内外采用基因工程方法制备Kringle5的研究进展作一综述,为Kringle5蛋白基因工程药物的开发提供参考。
- 陈显久牛勃赵荣瑞
- 关键词：KRINGLE5基因工程
- 基因重组Kringle 5蛋白遗传毒性试验研究被引量：1
- 2011年
- 目的检测基因重组Kringle 5蛋白的遗传毒性,为其临床应用提供医学毒理学依据。方法采用国内外遗传毒性试验指导原则推荐的标准组合中Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验检测基因重组Kringle 5蛋白的致突变作用。结果 Ames试验中,Kringle 5蛋白各组回变菌落数均未超过自发回变菌落数2倍,且无剂量-反应关系,故Ames试验结果为阴性,说明Kringle 5蛋白对鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100和TA102 4个菌株均未呈现遗传毒性。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中,Kringle 5蛋白各剂量组雌雄性别微核形成率与阴性对照结果比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明该Kringle 5蛋白骨髓微核试验结果为阴性。小鼠精子畸形试验中,各实验组与阴性对照组结果比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明该Kringle 5蛋白精子畸形试验结果为阴性。结论基因重组Kringle 5蛋白无遗传毒性。
- 陈显久解军张悦红牛勃
- 关键词：KRINGLE5AMES试验微核试验精子畸形试验
- 血管新生抑制剂Kringle5结构及改造研究进展
- 2010年
- Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原（plasminogen,Pgn）的第5个饼环区结构（kringle domain）,在体外具有抑制内皮细胞增殖,抑制内皮细胞迁移的生物学活性，在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成（angiogenesis），甚至可抑制肿瘤的生长和转移，在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中有广泛的应用前景。现将其近几年的研究情况综述如下。
- 陈显久牛勃赵荣瑞
- 关键词：KRINGLE5血管新生抑制剂糖尿病视网膜病变纤维蛋白溶酶原内皮细胞增殖内皮细胞迁移
- 固定金属亲和层析法纯化重组Kringle 5蛋白工艺的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立固定金属亲和层析法(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化重组Kringle 5蛋白的工艺,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定基础。方法常规制备IMAC蛋白上样样品,分别采用pH梯度洗脱和咪唑梯度洗脱的方法获取Kringle 5蛋白洗脱液,分段收集洗脱样品,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western blot鉴定其反应原性。结果咪唑梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度达98%以上,得率为21.3 mg/柱体积,但不能充分将Kringle 5蛋白与杂蛋白分离;pH梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度在98%以上,得率为62.7 mg/柱体积,且可与杂蛋白充分分离。结论 已建立了重组Kringle 5蛋白的纯化方法,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定了基础。
- 陈显久解军张悦红牛勃
- 关键词：KRINGLE纯化
- 重组Kringle5蛋白发酵工艺的优化
- 2012年
- 目的建立优化重组Kringle5蛋白发酵工艺。方法应用高密度发酵法建立并优化含Kringle5表达载体的工程菌的发酵技术,采用紫外分光光度计检测菌体密度(A60)0,称量菌体干重,并经SDS-PAGE检测Kringle5蛋白表达量。结果重组Kringle5蛋白工程菌高密度发酵的优化条件为:BP-5菌种,2×YT培养基,30℃基础培养时间7 h,42℃诱导培养时间6 h,pH值为7.0,空气流量为1 vvm,溶氧控制大于50%,搅拌转速控制为800～1 200 r/min;目的蛋白占全菌总蛋白的38.4%,菌体干重达(14.28±0.11)g/L。结论已建立并优化了重组Kringle5蛋白的高密度发酵工艺,为其新药开发奠定了技术基础。
- 陈显久杨利军解军张悦红牛勃
- 关键词：KRINGLE基因重组发酵纤维蛋白溶酶原
