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大鼠骨髓基质干细胞分离培养及向成骨、成脂诱导分化的研究被引量：4: 2015年; 目的利用细胞原代及传代培养技术将大鼠骨髓基质干细胞诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,为其进一步应用奠定基础.方法全骨髓法分离大鼠骨髓基质干细胞,传代后分别在成骨、成脂诱导条件下继续培养,采用碱性磷酸酶染色、茜素红染色及油红"O"染色观察其成骨及成脂分化结果.结果第2代大鼠骨髓基质干细胞成骨诱导9 d后碱性磷酸酶染色呈阳性细胞,连续诱导14 d后可见矿化结节形成,成脂诱导14 d后可见脂肪细胞形成.结论随着诱导条件的不同,大鼠骨髓基质干细胞在体外可定向分化为成骨细胞和脂肪细胞.; 王艳双; 关键词：骨髓基质干细胞成骨细胞脂肪细胞

梅花鹿鹿茸I型胶原诱导骨髓基质干细胞成骨分化及其分子机制的研究被引量：6: 2013年; 目的探讨梅花鹿鹿茸Ⅰ型胶原诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化及其分子机制.方法采用CCK-8法选择诱导分化和促成骨的最佳浓度;采用分光光度法检测ALP活性,并用改良Gomori法进行ALP染色,采用茜素红法进行钙化结节染色.采用RT-PCR法检测成骨分化的关键因子RunX2 mRNA的表达,成骨标志物ALP mRNA的表达,并进行半定量分析.结果 2.5g·L-1的鹿茸Ⅰ型胶原促进BMSCs的增殖使ALP活性降低,5～40 g·L-1的鹿茸Ⅰ型胶原抑制BMSCs的增殖,呈时间、剂量依赖性,5g·L-1的鹿茸Ⅰ型胶原使ALP活性增加显著且促进钙化结节的形成.RT-PCR检测5g·L-1的鹿茸Ⅰ型胶原上调RunX2、ALP基因的表达,而2.5g·L-1的鹿茸Ⅰ型胶原则下调RunX2、ALP基因的表达.结论梅花鹿鹿茸Ⅰ型胶原可以通过上调RunX2基因的表达诱导BMSCs向OB分化,且与浓度密切相关.; 王艳双罗速张大方曲晓波李娜谭寅凤李枫王秀丽; 关键词：CCK-8 RUNX2 ALP

骨髓基质干细胞(BMSCs)细胞毒最佳实验条件的研究被引量：2: 2014年; 目的探讨CCK-8法和MTT法在骨髓基质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)细胞毒实验中的最佳实验条件.方法取对数生长期的P3大鼠BMSCs,制成不同浓度的细胞悬液,于96孔培养板中培养24 h,分别用CCK-8法、MTT法检测其吸光度(A)值,根据细胞浓度与A值关系曲线确定两种方法各自的最适细胞浓度;取最适浓度的细胞于0.5,1,2,3,4和5 h 6个不同时间点,分别于450,490,595 nm处测定吸光度A值,确定两种方法最佳的检测时间和最适检测波长;采用CCK-8和MTT法检测5个浓度的鹿茸Ⅰ型胶原对BMSCs的增殖的影响.结果 CCK-8法测得的A值与细胞数目之间的线性相关性优于MTT法;CCK-8法、MTT法最佳检测波长分别为450,490 nm,最佳检测时间分别为1,4 h;在检测鹿茸Ⅰ型胶原蛋白对BMSCs的增殖的影响时,CCK-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小.结论 CCK-8法与MTT法检测结果相比线性相关性好,灵敏度高,准确性好.在BMSCs细胞毒检测中CCK-8法优于MTT法.; 王艳双曲晓波李枫谭寅凤; 关键词：MTT法 BMSCS

梅花鹿鹿茸Ⅰ型胶原对大鼠成骨样细胞(ROS1728)的影响及其分子机制的研究被引量：5: 2016年; 该文研究梅花鹿鹿茸I型胶原(SPC-I)对大鼠成骨样细胞ROS1728的影响,为SPC-I抗骨质疏松的治疗提供理论依据。采用贴壁法培养大鼠成骨样细胞ROS1728,通过CCK-8法检测SPC-I对ROS1728细胞增殖的影响,利用RT-PCR法检测成骨相关基因Runx2,osernix,ALP,Coll-I,OC的表达,利用Western-bolt法检测Runx2蛋白的表达。结果表明SPC-I质量浓度5g·L^(-1)组轻度抑制ROS1728细胞的增殖,但能够明显促进ROS1728细胞特异性转录因子Runx2,osterix m RNA的表达,Runx2蛋白的表达,以及标志基因ALP,Coll-I,OC m RNA的表达(P<0.01),并且呈现出时间依赖性。SPC-I质量浓度2.5,10 g·L^(-1)组均明显抑制ROS1728细胞的增殖(P<0.01),并抑制相关基因的表达。该实验证明质量浓度5 g·L^(-1)组轻度抑制ROS1728细胞的增殖,但可以明显增强ROS1728细胞的功能,通过调控Runx2基因的表达,促进ROS1728细胞的分化、成熟。; 王艳双罗速张大方曲晓波李枫; 关键词：分子机制

梅花鹿茸I型胶原对破骨细胞的影响及其分子机制被引量：8: 2013年; 目的探讨梅花鹿茸Ι型胶原(SPC-Ι)对破骨细胞的影响及其分子机制。方法采用全骨髓细胞诱导法培养破骨细胞、成骨细胞。设对照组(给予完全培养液)、诱导组(给予高糖-DMEM诱导液)、SPC-Ι(2.5、5、10 g/L)组,除对照组外,其他组给予含核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)各40 ng/mL的高糖-DMEM诱导液,条件培养7 d,每隔3天更换培养液补足药物质量浓度。经HE染色、抗酒石酸盐性磷酸酶(TRAP)染色,倒置显微镜下观察细胞形态;分光光度计检测TRAP活性,RT-PCR法检测TRAP、核因子-κB受体活化因子(RANK)、RANKL、骨保护素(OPG)基因的表达,Western blotting法检测RANK蛋白的表达。结果与破骨细胞组比较,SPC-Ι5、10 g/L组TRAP阳性细胞减少,TRAP活性降低,TRAP、RANK、RANKL基因的表达及RANK蛋白的表达下调(P<0.01);与对照组比较,质量浓度2.5、10g/L组OPG基因表达上调,RANKL/OPG的值减小(P<0.01),2.5 g/L质量浓度组的作用不显著。结论 SPC-Ι对破骨细胞的生成及分化具有抑制作用,该作用通过RANKL/OPG信号转导途径调控TRAP基因、RANK基因的表达实现的。; 王艳双罗速张大方曲晓波王秀丽谭寅凤李枫; 关键词：破骨细胞 RANKL

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国家自然科学基金(81073158)