国家自然科学基金(30271523)
- 作品数：14 被引量：22H指数：4
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- 塞来昔布延缓Han：SPRD大鼠肾衰竭进展的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的通过观察塞来昔布（CXB）对常染色体显性多囊肾病（ADPKD）动物模型Han：SPRD大鼠的作用，从而研究CXB延缓肾衰竭进展的机制。方法选取3周龄杂合（cy／＋）Han：SPRD大鼠共57只，随机分成3组（每组19只）进行实验。按照CXB在饲料中的含量分为对照组（0mg·kg^-1·d^-1）、小剂量组（3mg·kg^-1·d^-1）和大剂量组（10mg·kg^-1·d^-1）。在大鼠4、6、8、10、12和16周龄时测定血清BUN、Scr。ELISA法检测16周龄大鼠血浆6-酮前列腺素F1α（6-keto—PGF-1α）和血栓烷B2（TXB2）的含量。实时荧光定量PCR法检测大鼠肾组织肿瘤坏死因子α（TNF—α）的mRNA水平。免疫荧光共聚焦显微镜检测TNF—α和环氧化酶2（COX-2）的蛋白表达。Western印迹检测16周龄大鼠TNF—α的蛋白表达量。结果对照组BUN、Scr持续升高，分别于6、8周龄时即大于正常范围；至16周龄时，BUN为（26．56±9．19）mmol／L，Scr为（95．08±67．54）μmol／L；CXB小剂量组和大剂量组均能减缓BUN、Scr上升速度，减小其上升幅度。16周龄大鼠CXB小剂量组血浆中6-keto—PGF-α和TXB2[（1831．68±233．31）ng／L和（156．62±9．29）ng／L1和大剂量组两者的含量[（1148．57±105.80）ng／L和（157．87±10．16）ng／L]均显著低于对照组[（2792．26±830．48）ng／L和（248．88±93．72）ng／L]（均P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果示，16周龄大鼠肾组织小剂量组和大剂量组TNF—α mRNA水平均显著低于对照组（均P〈0．05）。免疫荧光共聚焦显微镜显示，对照组TNF-α和COX-2在小管间质区高表达，小剂量组和大剂量组荧光强度显著减弱。与对照组比较，CXB小剂量组和大剂量组大鼠肾组织蛋白表达量显著减少，差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论CXB可能通过抑制COX-2的活性，阻止膜磷脂释放花生四烯酸代谢产物6-keto—PGF-1α和TXB2，减少炎性因子TNF-α的含量，正�
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：多囊肾常染色体显性6-酮前列腺素F1Α血栓烷B2塞来昔布
- Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞凋亡的影响被引量：4
- 2005年
- 摘 要 目的:观察Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞 (HKC)凋亡的影响,探讨Cyr61在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)发病中的作用及机制。 方法:RT PCR扩增Cyr61基因全长,构建pcDNA3. 1 +Cyr61重组质粒,转染并筛选获得稳定转染pcDNA3. 1+Cyr61的HKC细胞。经RT PCR、Northern、Westernblot鉴定转染细胞系基因的整合及表达。对空白HKC、空质粒pcDNA3. 1转染的HKC、Cyr61转染的HKC和囊肿衬里上皮细胞去血清培养 72h后,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,Westernblot检测磷酸化Akt和Bad含量。 结果:构建了pcDNA3. 1+Cyr61重组质粒并获得稳定转染该质粒的HKC细胞。空白HKC与质粒pcDNA3. 1转染组之间上述指标无显著差异(P>0 05),Cyr61基因转染组与空白组、pcDNA3. 1转染组相比,凋亡指数显著降低 (P<0. 01),磷酸化Akt和磷酸化Bad含量显著增高 (P<0 .01 ),Cyr61基因转染组与囊肿衬里上皮细胞之间上述指标无显著差异 (P>0. 05);在Cyr61抗体存在下,Cyr61基因转染组的上述指标与空白组无显著差异 (P>0 .05 )。 结论:过表达Cyr61的HKC对去血清诱导的凋亡特性与囊肿衬里上皮细胞相似,过表达的Cyr61可能通过自分泌途径,促进Akt和Bad磷酸化,抑制细胞凋亡,参与ADPKD囊肿形成和发展。
- 沈学飞梅长林张岩赵海丹刘亚伟戴兵王文靖许涛
- 关键词：PCDNA3凋亡基因过表达囊肿衬里上皮细胞肾小管上皮细胞ADPKD
- 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球系膜细胞细胞外基质及其降解基因表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究多囊蛋白-1氨基段（PC-INF）融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞（RMC）Ⅳ型胶原及其降解调控基因表达的影响。方法用实时荧光定量RT-PCR法检测PC-1NF融合蛋白对RMCIV型胶原和细胞外基质（ECM）降解调控基因基质金属蛋白酶、金属蛋白酶1组织抑制剂（MMP-2、TIMP-1）表达的作用。ELISA方法检测培养的细胞上清液中Ⅳ型胶原含量的变化。免疫细胞化学方法观察融合蛋白对细胞核因子c-jun和c-fos表达的影响。Western印迹检测融合蛋白对蛋白激酶C（PKC）-α信号转导通路的影响。结果4mg／LPC-1NF融合蛋白作用48h后，RMCⅣ型胶原mRNA从（103±16）降至（82±11）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），培养上清液中的IV型胶原含量也明显降低；MMP2mRNA从（1150±90）升至（2770±）拷贝，106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而TIMP-1mRNA从（5530±480）降至（3040±370）拷贝，106GAPDH，与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）。DAB染色显示，融合蛋白作用后，RMC的c-jun和c-fos表达受到明显抑制。RMC经不同浓度PC-1NF融合蛋白作用48h后，随着融合蛋白浓度升高。PKC-α的表达逐渐减弱。结论PC-1NF融合蛋白可通过上调促进ECM降解的MMP-2和抑制ECM降解的TIMP-1之间的比值而促进Ⅳ型胶原降解；还可能通过PKC-α信号转导通路，抑制c-ju．和c-fos表达，从而抑制RMC的增殖和ECM的合成。
- 关天俊梅长林王文靖付莉莉赵海丹蔡厚安
- 关键词：常染色体显性多囊肾病细胞外基质系膜细胞
- 塞来昔布通过抑制COX-2活性抑制Han：SPRD大鼠肾囊肿生长被引量：2
- 2009年
- 目的:观察塞来昔布(celecoxib,CXB)对常染色体显性遗传性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)模型Han:SPRD大鼠肾囊肿生长的作用,探讨其可能的作用机制。方法:3周龄杂合(cy/+)Han:SPRD大鼠随机分成3组(n=19):小剂量(3mg·kg-1.d-1)、大剂量(10mg·kg-1.d-1)CXB作用组及空白对照组。大鼠饲养至16周龄,称取体质量(TBW)及双肾质量(2K),计算2K/TBW;取肾组织行H-E染色及特殊染色,观察肾间质炎细胞浸润程度,测定囊肿指数、纤维化指数;采用免疫荧光共聚焦扫描法检测肾组织环氧化酶(COX)-2、增殖细胞核抗原(PCNA)共染的荧光斑表达丰度,采用Western印迹法检测肾组织COX-2、PCNA蛋白表达量。结果:小剂量CXB作用组大鼠2K/TBW低于空白对照组,差异有统计学意义[(1.10±0.009)%vs(1.33±0.02)%,P<0.05]。与空白对照组相比,小剂量、大剂量CXB作用组大鼠肾间质炎细胞浸润程度评分减轻[(2.6±0.26)、(2.8±0.31)vs(3.7±0.33),P<0.05],肾囊肿指数[(42.9±6.56)、(47.1±7.28)vs(64.8±6.71)]、纤维化指数[(11.2±2.63)、(10.1±3.30)vs(16.3±4.16)]明显降低(P<0.05)。小剂量CXB作用组大鼠肾组织COX-2、PCNA共染的荧光斑强度较空白对照组明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,小剂量、大剂量CXB作用组大鼠肾组织COX-2[(0.326±0.011)、(0.409±0.008)vs(0.814±0.012),P<0.05]、PCNA表达量明显降低[(0.763±0.051)、(0.925±0.042)vs(0.988±0.031),P<0.05]。结论:3、10mg·kg-1.d-1塞来昔布可能通过抑制COX-2活性,减轻炎细胞浸润而发挥抑制Han:SPRD大鼠肾囊肿生长的作用。
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：塞来昔布环氧化酶2常染色体显性多囊肾囊肿
- 塞来昔布对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质重塑的影响
- 2010年
- 目的研究塞来昔布（CXB）对Han：SPRD大鼠肾细胞外基质（ECM）重塑的影响，探讨其抑制多囊肾肾间质纤维化的作用机制。方法选取杂合（cy／＋）交配后第4代雄性、3周龄、体质量（68．54-16．6）g的Han：SPRD大鼠共57只，随机分成对照组（CXB：0mg·kg^-1·d^-1）、CXB小剂量组（CBX：3mg·kg^-1·d^-1）、CXB大剂量组（CBX：10mg·kg^-1·d^-1），每组19只。另选19只SD大鼠作为正常对照。饲料中加入CXB喂食13周后，处死动物。倒置显微镜下分析肾组织纤维化指数；实时荧光定量PCR检测肾组织胶原Ⅳ（COLⅣ）、基质金属蛋白酶（MMP）2、金属蛋白酶2组织抑制剂（TIMP）和转化生长因子（TGF）B1mRNA的表达；免疫荧光共聚焦扫描法检测COLIV、MMP-2、TIMP-2、TGF-β1与PCNA共染的蛋白丰度；蛋白免疫印迹法检测TGF-81的表达。结果与对照组相比，小剂量组和大剂量组均能显著减少肾囊肿指数（42．90±6．56和47．10±7．28比64．80±62．71，均P〈0．05）、纤维化指数（11．20±2．63和10．10±3．30比16．30＋4．16，均P〈0．05）和间质炎性细胞的浸润（2．60±0．26和2．80±0．31比3．70±0．33，均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组COLⅣ、TIMP-2和TGF．B1mRNA的表达量显著低于对照组（均P〈O．05），而MMP-2mRNA的表达量显著高于对照组（均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组COLlV荧光强度较对照组显著减弱，差异有统计学意义（20．30±5．11比61．40±4．51，P〈0．01；27．50±6．73比61．40±4．51，P〈0．05）。小剂量组和大剂量组MMP．2／TIMP-2比值较对照组增高，差异有统计学意义（4．88＋1．52和3．63±1．67比0．35±0．13，均P〈0．05）。小剂量组和大剂量组TGF—β1蛋白表达比对照组均显著减少。结论塞来昔布可能通过下调TGF-β1、增加MMP-2／TIMP-2比值、促进胶原Ⅳ的降解来抑制肾小管间质的纤维化。
- 许涛王素霞叶朝阳梅长林
- 关键词：多囊肾常染色体显性细胞外基质塞来昔布
- 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响
- 2009年
- 常染色体显性多囊肾病（ADPKD）是最常见的遗传性肾病之一，85％-90％ADPKD的发生是由多囊蛋白1基因的编码产物多囊蛋白1（PC—1）的结构与功能异常所致。既往研究发现，稳定过表达人PKD1全长cDNA的犬远端肾小管上皮细胞（MDCK细胞）的生长率与凋亡率均降低。在前期工作中，我们成功制备了PC-1氨基段（PC-1NF）较为特征性的LRR—WSC区融合蛋门，并发现PC-1NF融合蛋白能抑制大鼠肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质合成。
- 关天俊梅长林赵海丹付莉莉王文靖邹祝英
- 关键词：融合蛋白系膜细胞凋亡氨基常染色体显性多囊肾病细胞外基质合成
- ZNF262在常染色体显性多囊肾病患者肾组织中的表达及意义
- 2006年
- 目的:检测锌指蛋白262(ZNF262)在正常肾组织及不同发病阶段多囊肾组织中的表达,并以增殖细胞核抗原(PCNA)为对照,初步探讨ZNF262在常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)中的作用。方法:根据肾小球滤过率(GFR)大小对ADPKD(n=8)进行分期,观察其影像学、常规病理检查结果,采用半定量RT-PCR方法检测人正常肾组织(n=8)、早期多囊肾组织(n=4)、晚期多囊肾组织(n=4)中ZNF262和PCNA的表达,并对上述组织中ZNF262和PCNA的表达进行相关性分析。结果:与正常肾组织相比,ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾组织中的表达均显著增多(P<0.01),且晚期多囊肾组织表达高于早期多囊肾组织(P<0.05)。ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾及正常肾组织中的表达存在显著的相关性(r1=0.842 6,r2=0.902 1,r3=0.883 5,均P<0.05)。结论:与正常组织相比,ZNF262不仅在ADPKD高表达,并且随着病程进展表达逐步增高,这与PCNA的表达具有显著的相关性。提示ZNF262可以作为检测ADPKD的指标,并有助于临床进展分期的判别。
- 王素霞王丽刘亚伟付莉莉许涛梅长林
- 关键词：增殖细胞核抗原
- 塞来昔布通过阻断丝裂原活化蛋白激酶信号途径抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(CXB)能否通过阻断丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖。方法:原代培养多囊肾囊肿衬里上皮细胞,以不同浓度CXB(0、2.5×10-6、5×10-6、1×10-5、2×10-5、3×10-5、4×10-5、5×10-5mol/L)处理细胞,采用BrdU法检测细胞增殖状态。ELISA法检测各组血管内皮生长因子(VEGF)的含量。荧光定量PCR技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化MAPK的mRNA含量,Western印迹法检测PCNA、MAPK和磷酸化MAPK的表达。结果:CXB对囊肿衬里上皮细胞的增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性,其中2×10-5mol/L CXB作用24 h的抑制作用最强,抑制率为(63.9±1.2)%;CXB可减少囊肿衬里上皮细胞VEGF的分泌,而且抑制作用具有时间、浓度依赖性。CXB剂量依赖性减低PCNA和磷酸化MAPK的mRNA和蛋白表达。结论:CXB明显抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,抑制细胞产生VEGF;其作用与干扰MAPK磷酸化,部分阻断MAPK信号转导通路有关。
- 许涛曲巍梅长林叶朝阳王素霞付莉莉
- 关键词：塞来昔布丝裂原活化蛋白激酶囊肿衬里上皮细胞
- RNA干扰对比观察HIF1α和HIF2α在人肾癌细胞中的作用及机制被引量：6
- 2006年
- 目的:运用RNA干扰(RNAi)方法对比观察HIF1α和HIF2α在人肾癌细胞的作用并探讨相关机制。方法:分别将化学合成的HIF-1α和HIF-2α小片段寡核苷酸脂质体瞬时转染人肾癌细胞(A498),人正常肾小管上皮细胞(HK-2)和A498分别加入培养基和脂质体作为对照组。用RT-PCR或免疫印迹等观察RNAi 24 h后一些基因如VEGF、ET-1、bcl-2和Ki67的改变,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察细胞的凋亡情况。结果:与HK-2相比,A498高表达HIF-1α和HIF-2α,RNAi后两基因基本被沉寂。HIF-1α干扰后ET-1、bcl-2和Ki67均下调,伴随凋亡或坏死细胞增多,而HIF2α干扰后,仅VEGF下调较为明显。结论:HIF-1α和HIF-2α均有一定程度调节血管生成基因的作用,但HIF-1α尚具备一定的调节肿瘤细胞增殖功能,可能通过调节凋亡抑制基因实现。提示HIF-1α和HIF-2α可能存在不同的转录调控功能和基因结合位点。
- 王丽王素霞梅长林
- 关键词：低氧诱导因子RNA干扰
- 人肾组织磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳的建立与优化被引量：1
- 2006年
- 目的:利用二维凝胶电泳法分离人肾组织磷酸化蛋白质组。方法:利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集人肾组织磷酸化蛋白。样品浓缩除盐后,进行一维等电聚焦分离和二维SDS电泳分离提取人肾组织磷酸化蛋白。结果:成功提取了人肾组织磷酸化蛋白,并得到了磷酸化蛋白的双向凝胶电泳图谱。结论:磷酸化蛋白富集技术与二维凝胶电泳技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步研究人肾组织磷酸化蛋白奠定基础。
- 刘亚伟戴兵梅长林沙伟张岩熊锡山
- 关键词：蛋白质组学磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳
