山西省科技攻关计划项目(200903110)
- 作品数：6 被引量：10H指数：3
- 相关作者：王琦申慧琴武希润张瑞刘燕更多>>
- 相关机构：山西医科大学山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IDO基因稳定转染HepG_2细胞系的建立被引量：3
- 2012年
- 目的建立稳定转染IDO基因的HepG2细胞系,为进一步研究IDO基因在肝癌免疫逃逸中的作用奠定基础。方法应用脂质体将真核细胞表达质粒pcDNA3.1-IDO和空载质粒pcDNA3.1转染入HepG2细胞,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养,用反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法验证获得的表达细胞株。结果经RT-PCR和Western blotting检测证实空质粒转染组和空白对照组HepG2细胞无IDO基因及蛋白的表达,而重组质粒组的HepG2细胞表达IDO基因和蛋白。结论 pcDNA3.1-IDO质粒体外稳定转染人肝癌细胞HepG2,可以有效地使IDO基因在RNA水平和蛋白水平均表达,成功建立了稳定转染基因IDO的HepG2细胞系,为进一步探讨该基因的功能奠定了一定基础。
- 刘春亮冯惠枝刘燕卜晓倩申慧琴张瑞唐运萍王琦
- 关键词：HEPG2细胞稳定转染
- 吲哚胺2,3-二氧化酶对HepG2细胞生物学行为影响的研究被引量：1
- 2011年
- 吲哚胺2,3-二氧化酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）是细胞内一种含亚铁血红素的酶,是肝脏以外惟一可催化色氨酸分子中吲哚环氧化裂解,从而沿犬尿酸途径进行分解代谢的限速酶,可将色氨酸分解为L-犬尿酸、吡啶甲酸和喹啉酸等多种代谢物.
- 张路英张瑞申慧琴罗静刘燕卜晓倩刘春亮王琦
- 关键词：肿瘤浸润细胞黏附
- FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸联合治疗对荷胃癌615小鼠细胞毒性淋巴细胞的影响被引量：3
- 2013年
- 目的研究FOLFOX4化疗方案与1-D-甲基色氨酸（1-methyl—D—tryptophan，1-D—MT）联合应用对荷胃癌小鼠的免疫耐受的影响。方法用脂质体转染法，将IDO—peDNA3．1质粒和pcDNA3．1（＋）质粒稳定转染MFC细胞，设定空白对照组；用RT—PCR和Westernblot法检测吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO）mRNA和蛋白表达；建立荷胃癌615小鼠模型，分别给予生理盐水、FOLFOX4、1．D．MT和FOLFOX4＋1-D—MT治疗。利用抑瘤率检测小鼠成瘤情况，流式细胞术检测各组小鼠脾脏中细胞毒性淋巴细胞（cytotoxicity Tlymphocyte，CTL）数量的变化，RT—PCR检测颗粒酶B（granzymeBGZMB）mRNA表达量的变化。结果（1）与MFC和空质粒生理盐水组相比，IDO生理盐水组肿瘤体积大，生长快，差异有统计学意义（P〈0．05）；与IDO生理盐水组比较，FOLFOX4组、1-D—MT组和联合组肿瘤体积均变小，重量减轻，其抑瘤率分别为83．5％±0．4％、81．8％±0．4％、95．7％±0．8％，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）给予生理盐水的IDO阴性对照组CTL及GZMBmRNA含量（22．1％±4．2％、0．370±0．019）较MFC组（46．9％±4．1％、0．450±0．017）、空质粒组（47．6％±4．8％、0．450±0．018）明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；联合组（64．5％±2．5％、0．660±0．019）和1-D—MT组（55．3％±2．5％、0．560±0．015）与FOLFOX4组（34．2％±3．2％、0．330±0．012）相比，CTL及GZMBmRNA含量明显升高（P〈0．05），且联合治疗组较1—D—MT组升高更明显，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论FOLFOX4与1-D—MT联合应用提高CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，降低肿瘤的免疫逃逸能力。
- 康贵云申惠琴武希润刘小丽李哲萍李建稳王改赵柯王琦
- 关键词：肿瘤逃逸
- 吲哚胺2,3-双加氧酶上调人肝癌细胞人类白细胞抗原-G的表达
- 2012年
- 目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)对肝癌细胞人类白细胞抗原-G(humanleucocyte antigen-G,HLA-G)表达的影响。方法:用脂质体lipofectamine^(TM)2000将pcDNA3.1-IDO重组质粒稳定转染入肝癌SMMC-7721细胞作为实验组(pcDNA3.1-IDO质粒转染组),同时设置空载体对照组(pcDNA3.1转染组)和空白对照组(未转染组),用RT-PCR和Western blot鉴定实验组和2个对照组细胞IDO mRNA和蛋白的表达,然后分别给予实验组细胞IDO的抑制剂(2.5 mmol/L 1-D-MD和底物(200μmol/L L-色氨酸)干预48 h,进一步用实时荧光定量PCR和Westernblot检测上述5组细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达水平。结果:RT-PCR和Western blot显示空载体对照组和空白对照组未见IDO表达,而实验组细胞高表达IDO。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,实验组HLA-G mRNA和蛋白表达水平较空载体对照组和空白对照组均明显上调(P均<0.05),给予1-D-MT和L-色氨酸干预后此效应可逆转。结论:在肝癌SMMC-7721细胞,IDO可以上调HLA-G的表达,色氨酸降解途径参与了此调节过程。
- 孙建莉何冬梅张敏任晓静申慧琴武希润王琦
- 关键词：3-双加氧酶人类白细胞抗原-GSMMC-7721细胞
- 1-甲基色氨酸对荷肝癌小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察1-甲基色氨酸（1-MT）对荷肝癌小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法建立荷肝癌小鼠皮下移植瘤模型。实验分为hepG2组、空质粒组、吲哚胺2，3双加氧酶（ID0）生理盐水组、ID05-氟尿嘧啶（5-FU）组、ID01-MT组、ID01-MT和5-FU联合处理组，每组各8只。观测各组小鼠成瘤情况肿瘤体积差异以及常规病理检查变化，并采用免疫组化法检测肿瘤组织内IDO表达情况。结果与hepG2和空质粒生理盐水组比较，IDO生理盐水组肿瘤体积大、生长快（P〈0．05）。与ID0生理盐水组比较，5-FU组、1-MT组和联合处理组肿瘤体积较小、重量减轻，其抑瘤率分别为86．54％、79．95％、94．46％，差异有统计学意义（P〈0．05）。其中联合用药组效果最好（P〈0．05），5-FU组与1-MT组两者间肿瘤体积变化无显著差异（P〉0．05）。HE病理切片观察各处理组可见癌细胞密度减少，坏死区域增加。各处理组外周血甲胎蛋白（AFP）降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IDO可促进肝癌细胞的生长，参与了肝癌细胞的免疫逃逸；1-MT对人肝癌小鼠皮下移植瘤生长具有抑制作用，与化疗药联合应用效果更好。
- 刘燕张瑞武希润申慧琴刘小丽张路英卜晓倩王琦
- 关键词：1-甲基色氨酸肝细胞癌免疫治疗
- FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸联合治疗对荷胃癌小鼠调节性T细胞的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸(1-D-methyl tryptophan,1-D-MT)联合应用是否有利于改善荷胃癌小鼠的免疫耐受状态。方法:用脂质体转染法,将pcDNA3.1-IDO质粒和pcDNA3.1(+)空质粒稳定转染MFC细胞,并设未转染组;用RT-PCR和Western blot法检测未转染组、空质粒转染组和pcDNA3.1-IDO转染组IDO mRNA和蛋白的表达;然后建立荷胃癌小鼠皮下移植瘤模型,并设未转染组、空质粒转染组,IDO+生理盐水(NS)组、FOLFOX4组、1-D-MT组和FOLFOX4+1-D-MT联合处理组,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏中Treg细胞数量变化;RT-PCR检测FOXP3 mRNA表达量变化。结果:IDO mRNA与蛋白表达在稳定转染pcDNA3.1-IDO质粒组细胞较未转染组、空质粒转染组表达量明显增加(P<0.05)。IDO+NS组小鼠脾脏Treg细胞比例及FOXP3 mRNA含量较未转染组、空质粒组均明显增多(P<0.05)。FOLFOX4+1-D-MT组和1-D-MT组与FOLFOX4组相比,Treg细胞比例及FOXP3 mRNA含量均明显降低(P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT组降低更明显(P<0.01)。结论:通过抑制Treg的增殖及降低FOXP3 mRNA表达,FOLFOX4与1-D-MT联合应用可降低机体免疫逃逸能力。
- 康贵云李哲萍刘晓丽武希润申慧琴王琦
- 关键词：FOLFOX4胃癌调节性T细胞
