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AFP基因修饰树突状细胞瘤苗治疗肝移植瘤的实验研究: 2009年; 目的探讨pAdBM5-mAFP-DC瘤苗对C57BL／6J小鼠移植性肝癌发生、发展的阻断作用。方法 40只C57BL／6J小鼠随机分为A、B、C、D、E组，每组8只。以免疫表达mAFP基因的重组腺病毒转染DC（pAdBM5-mAFP—DC）为A组；空pAdBM5质粒免疫为B组；以免疫表达mAFP基因的质粒DNA（pAdBM5-mAFP）为C组；单纯免疫DC为D组；以注射单纯PBS为对照组的E组。免疫方法：A组和D组在每只小鼠的右腋下注射5×10^5个细胞；B组和C组在每只小鼠的右腋下注射10．0μg质粒；E组仅注射0．1mlPBS。每周注射1次，连续免疫4次。在初次免疫后的第3周给所有小鼠移植Hepa1-6肝癌细胞。观察小鼠移植瘤的生长情况。于移植肿瘤第14天处死小鼠，观察成瘤情况，计算抑瘤率。结果 A组有3只小鼠未长出移植瘤。处死小鼠称瘤重，发现A组瘤重与其他各对照组瘤重比较差异有显著性（P〈0．05或0．01）。A、B、C、D各组肿瘤抑制率分别为：68．31％、13．23％、52．1％和38．54％，A组抑瘤率显著高于其它各组（P〈0．05或0．01）。结论重组pAdBM5-mAFP—DC瘤苗免疫小鼠，可在一定程度上使小鼠获得免疫保护，降低肝癌的发生率。; 谢裕安匡志鹏李媛媛罗小玲吴继宁; 关键词：树突状细胞移植性肝癌树突状细胞瘤苗

树突状细胞的诱导及抗肿瘤作用探讨: 2009年; 目的：从人外周血诱导树突状细胞（DC），分析其免疫学特性及抗肿瘤作用。方法：分离人外周血DC前体细胞，采用rhGM-CSF、rhIL-4和肿瘤抗原联合诱导，分析DC表型，采用混合淋巴细胞反应检测DC激发T淋巴细胞增殖能力；乳酸脱氢酶4h释放法检测肿瘤抗原致敏DC与CD3AK混合物的杀瘤活性。结果：DC前体细胞经rhGM—CSF、rhIL-4和肿瘤抗原共同诱导2周，可获得大量成熟DC，其中第7～15天，DC增殖最明显。至第15天，DC纯度达90％以上。DC具有典型的树突状或裙褶样突起，高表达CD86、CD40、HLA—DR、CD83、CDIa分子，能强烈刺激T淋巴细胞增殖。CD3AK细胞与肝癌抗原致敏DC的混合物具有很强的杀伤BEL-7402肝癌细胞的作用，杀伤率显著高于CD3AK细胞（P〈0．01）。结论：可从人外周血诱导培养获得大量功能成熟的DC，能激活T淋巴细胞增殖和显著增强CD3AK细胞的抗肿瘤活性。; 吴继宁罗小玲谢裕安匡志鹏梁安民; 关键词：树突状细胞免疫学特性抗肿瘤作用

肝癌患者与正常人外周血树突状细胞的诱导与功能的比较研究: 2012年; 目的对比研究肝癌患者和正常人外周血树突状细胞(DC)的诱导及其功能异同,探讨能否从肝癌患者外周血诱导出功能正常、具有抗肿瘤作用的DC疫苗。方法取肝癌患者和正常人外周血分离DC前体细胞,应用rhGM-CSF、rhIL-4及肝癌细胞抗原诱导DC。观察DC生长过程的形态学变化,以流式细胞术检测DC表面分子;ELISA法检测DC培养上清中IL-12水平;3H-TdR掺入法检测肝癌细胞抗原致敏DC刺激T细胞增殖的能力;乳酸脱氢酶4小时释放法检测肝癌细胞抗原致敏DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀瘤活性。结果从肝癌患者和正常人外周血DC前体细胞诱导的DC具有相似的生长过程和细胞形态及功能,其表面分子HLA-DR、CD1a、CD83、CD80、CD86、ICAM-1的表达水平、DC培养上清中IL-12水平、DC刺激T细胞增殖的能力以及所诱生的CTL杀瘤活性等方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论可从肝癌患者外周血诱导出功能正常并具有抗肿瘤作用的DC瘤苗,为以DC基础的肝癌的免疫治疗提供实验依据。; 罗小玲谢裕安梁安民匡志鹏吴继宁; 关键词：肝肿瘤树突状细胞抗肿瘤作用

肝癌树突状细胞瘤苗诱导抗肿瘤作用的研究被引量：7: 2007年; 目的:研究负载肝癌抗原的肝癌树突状细胞(dendritic cell,DC)瘤苗诱导的抗肿瘤作用。方法:于体外用rhGM-CSF和rhIL-4从肝癌患者外周血诱导DC,并用肝癌细胞抗原冲击致敏,制成负载肝癌抗原的肝癌DC瘤苗。肝癌DC瘤苗活化自体T淋巴细胞分化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic of T-lymphocytes,CTL),采用流式细胞术检测CTL分型;乳酸脱氢酸(LDH)4 h释放法检测CTL对肝癌细胞的特异性杀伤作用。MTT法检测肝癌DC瘤苗及其活化CTL培养上清对肿瘤细胞的抑制作用;ELISA法检测肝癌DC瘤苗活化的CTL培养上清中IL-12、IFN-γ和TNF-α水平。结果:经肝癌DC瘤苗活化后的T淋巴细胞群中,CD56+细胞数量显著减少,CD4+T和CD8+T细胞数量增加,其中以CD8+T细胞增加较明显;细胞毒实验显示,该CTL对自体肝癌细胞具有较强的杀伤作用,而对与致敏DC的肝癌抗原无关的CT26结肠腺癌细胞无明显杀伤作用;单纯肝癌DC瘤苗或其激活的CTL培养上清也表现出较强的抑瘤作用,而且这种抑瘤作用具有广谱性,可抑制多种肿瘤细胞的生长;在CTL培养上清中可检测到IL-12、TNF-α和IFN-γ的含量。结论:肝癌DC瘤苗不仅诱导了对肝癌细胞的特异性CTL杀伤作用,而且可激活CD4+T和CD8+T细胞分泌IL-12、TNF-α和IFN-γ等细胞因子,以非杀伤方式直接或间接地抑制肿瘤细胞生长,发挥非特异性的抗肿瘤作用。; 罗小玲谢裕安匡志鹏吴继宁梁安民; 关键词：癌症疫苗树突细胞

肝癌组织中浸润树突状细胞的数量和表面分子表达的临床意义被引量：2: 2007年; 目的:研究人肝癌组织中浸润树突状细胞(DC)的数量和表面分子表达的临床意义。方法:原发性肝细胞癌(肝癌)术后组织标本30例,采用免疫组化方法(即用型两步法SupervisionTM)检测肝癌组织中DC标志蛋白S-100的表达;从肝癌组织中分离浸润性单个核细胞,流式细胞术检测DC的表面分子表达,并用RT-PCR技术检测肝癌组织IL-10、TGF-β1和VEGF-AmRNA。结果:肝癌组织中DC的数量少,高分化肝癌组织中DC浸润数量[(27.22±15.38)个/HPF]高于低分化肝癌[(11.92±8.56)个/HPF](P<0.01);肝癌组织中浸润DC的表面分子如CDla、HLA-DR、CD80、CD86和CD54等MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子,共刺激分子和黏附分子存在低表达或不表达,与肝癌的分化程度密切相关。在mRNA水平上,IL-10、TGF-β1和VEGF-A基因在肝癌组织中的表达显著高于正常肝组织(P<0.001,P<0.05)。结论:肝癌组织中浸润DC的数量减少并存在功能缺陷,与肝癌分化程度密切相关。; 罗小玲葛莲英谢裕安匡志鹏吴继宁梁安民王娟; 关键词：肝癌树突状细胞细胞表面分子

负载肝癌抗原的树突状细胞瘤苗诱导的抗肿瘤作用: 2008年; 目的探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞(DC)体外经自体肝癌细胞抗原致敏后诱导的抗肿瘤作用。方法肝癌患者外周血经梯度密度离心法分离,获得DC前体细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DC。制备自体肝癌细胞抗原,体外脉冲DC,检测DC诱导自体T细胞增殖能力及细胞毒性T细胞(CTL)在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性,并检测肿瘤抗原致敏DC分泌的IL-1 2水平。结果经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能分泌IL-1 2和诱导较强的自体T细胞增殖,且能诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对3 LL LEWIS肺癌细胞、H 2 2肝癌细胞则无明显的杀伤作用。结论肝癌患者外周血DC经自体肝癌细胞抗原致敏后能诱导高效而特异的抗肝癌免疫,其机制可能与增强T细胞应答和诱导机体产生肿瘤特异CTL而发挥特异性的抗肿瘤作用有关。; 吴继宁谢裕安罗小玲匡志鹏; 关键词：树突状细胞肝癌抗原 CTL 抗肿瘤

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广西壮族自治区自然科学基金(0448069)

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