贵州省科技计划项目(SY[2008]3052)
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 相关作者：吴艳陈淼钱明江傅小云王宇辉更多>>
- 相关机构：遵义医学院附属医院河北联合大学附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响被引量：9
- 2011年
- 目的探讨血红素加氧酶-1（HO-1）对过氧化氢（H2O2）氧化损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）凋亡以及线粒体跨膜电位（MTMP）的影响。方法将24只健康雄性SD大鼠腹腔注射麻醉处死后取肺，分离纯化AECⅡ接种于培养板，原代培养24h后等量分为正常对照组、H2O2损伤组、HO-1保护组、HO1抑制组4组。采用0．5mmol／i。H2O2刺激AECⅡ2．5h建立细胞氧化损伤模型。制模后用0．2μmol／LHO-1或20tlmol／L锌原卟啉Ⅸ处理给予保护或抑制。处理2．5h后用荧光显微镜观察细胞的形态学变化；分别于处理0．5、1．0、1．5、2．0、2．5h5个时间点用流式细胞仪检测细胞凋亡率及MTMP去极化比例的变化。结果荧光显微镜下观察：H2O2损伤组可见大量呈绿色（凋亡早期）、红色（凋亡中晚期）荧光的凋亡细胞；HO1保护组所见绿色或红色荧光细胞明显减少；HO-1抑制组与H2O2损伤组镜下所见相似。流式细胞仪检测结果显示：与正常对照组比较，H2O2损伤组细胞凋亡率增加，且随H2O2作用时间延长逐渐增加，2．5h达峰值[0．5h：（30．27±0．74）Yo比（3．76±0．81）％，2．5h：（40．46±0．91）%比（22．74±0．60）％，均P〈0．053，MTMP去极化比例明显降低（O．99±0．21比1．91±0．16，P％0．05）；与H2O2损伤组比较，HO1保护组AECⅡ细胞凋亡率明显降低[0．5h：（5．99±0．60）％比（30．27±0．74）％，2．5h：（22，69±1．69）％比（40．46±0，91）％，均P〈0．053，MTMP去极化比例明显升高（2．02±0．12比0．99±0．21，P〈0．05）；与HO-1保护组比较，HO-1抑制组细胞凋亡率明显增加[0．5h：（30．73±1．08）％比（5．99±0．60）％，2．5h：（41．38±0．57）％比（22．69±1．69）％，均P〈0．05]，MTMP去极化比例明显降低（0．98±0．09比2．02±0．12，P〈0．05）。结论HO-1可保护AECⅡ细胞完整性，降低细胞凋亡率并且稳定MTM
- 吴艳陈淼吴双王洪敏钱明江王宇辉傅小云
- 关键词：血红素加氧酶-1凋亡线粒体跨膜电位
- 阿司匹林预处理对原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞抗氧化损伤的影响研究被引量：5
- 2011年
- 目的 观察阿司匹林对原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AEC Ⅱ）的保护效应,并探讨其抗氧化损伤的机制.方法 将原代分离、纯化、培养的离体大鼠AEC Ⅱ分为5组.过氧化氢损伤（H2O2）组在培养40 h后加入0.5 mmol/L H2O2,建立细胞氧化损伤模型;生理盐水（NS）组则加入NS ;阿司匹林预处理1、2、3（A1～3）组在加入H2O2前给予阿司匹林50、100、200μmol/L预处理.3 h后观察细胞形态学变化和贴壁细胞计数;采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率;采用免疫组化法和聚合酶链反应法检测NS组、A1～3组在培养20、40、60 h AEC Ⅱ中血红素氧合酶-1（HO-1）的蛋白及mRNA表达.结果 采用胰蛋白酶消化、免疫黏附法每只鼠可收获（2.0～2.5）×107个AEC Ⅱ,纯度和活性均＞90%.与NS组比较,H2O2组细胞间隙增宽,贴壁细胞数减少,细胞皱缩,细胞存活率（A值）明显下降（0.054 6±0.004 0比0.103 8±0.009 9,P＜0.01）;与H2O2组比较,A1～3组贴壁细胞数增多,细胞形态较完整,无明显皱缩,细胞存活率（A值）明显增加（0.066 9±0.003 9、0.071 0±0.006 5、0.078 7±0.009 2比0.054 6±0.004 0,均P＜0.01）.与NS组比较,A1～3组培养20、40、60 h时HO-1的蛋白及mRNA表达均明显增加,60 h时达峰值[蛋白（积分A值）：1.59±0.12、1.60±0.09、1.61±0.08比1.25±0.11;mRNA（Ct值比值）：24.31±1.74、30.45±2.53、32.63±3.74比22.99±1.95,均P＜0.05];但A1～3组间HO-1蛋白表达无明显差异.结论 阿司匹林通过上调HO-1表达对离体培养氧化损伤的大鼠AEC Ⅱ起保护效应;HO-1可能是其中重要的保护调节因子.
- 钱明江陈淼王洪敏高飞吴艳杨学忠
- 关键词：阿司匹林血红素氧合酶-1
