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人成釉蛋白基因在COS-7细胞中的表达: 2006年; 目的:通过构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达人成釉蛋白基因。方法:分别将人成釉蛋白基因克隆入非融合和融合真核表达载体pcDNA 3.1和pEGFP-C3中,证实克隆正确后,用脂质体介导将载体转染哺乳动物细胞COS-7,通过免疫组织化学、W estern B lot等方法检测成釉蛋白在哺乳动物细胞中的表达。结果:表达的绿色荧光蛋白融合蛋白所发出的荧光位于细胞浆中,胞核中无荧光,与免疫组化结果一致,说明人成釉蛋白位于细胞浆中。W estern B lot检测显示在COS-7细胞中表达的成釉蛋白的分子量为65×103,分泌至培养基中的成釉蛋白的分子量为62×103。结论:成功在哺乳动物细胞中表达了人成釉蛋白,为研究成釉蛋白合成后的修饰加工和成釉蛋白的结构,为今后进一步研究成釉蛋白结构和功能的关系奠定了基础。; 田宇鲁红倪龙兴肖明振余擎; 关键词：免疫组化绿色荧光蛋白蛋白基因 COS-7细胞

五倍子提取液对实验性根面龋再脱矿作用的影响被引量：2: 2006年; 目的:探讨中药五倍子提取液对实验性根面龋的抑制作用。方法:以50%五倍子提取液为实验药物,38%氟化双氨银[Ag(NH3)2F],2%氟化钠(NaF)为阳性对照,去离子水为阴性对照。测量实验性根面龋再脱矿中脱矿量与时间的关系及总矿物质损失量。结果:38%Ag(NH3)2F抑制脱矿作用最强,其余依次为50%五倍子提取液、2%氟化钠、去离子水。50%五倍子提取液与38%Ag(NH3)2F、2%氟化钠无显著性差异(P>0.05),各药物处理组与去离子水比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:50%五倍子提取液对Ca2+溶出量及总矿物质损失量具有显著的抑制作用,对Ca2+溶出量的抑制作用优于2%NaF。; 姚乃晖唐荣银; 关键词：五倍子根面龋脱矿

牛牙骨质附着蛋白N末端氨基酸序列分析被引量：2: 2004年; 目的 :对牛牙骨质附着蛋白进行N末端氨基酸序列分析 ,为牙骨质附着蛋白的克隆表达提供一定的理论依据。方法 :应用乙酸和盐酸胍提取法获取牛牙骨质附着蛋白 ,鉴定纯度后进行N末端氨基酸序列分析。结果 :所获得的牛牙骨质附着蛋白纯度 >95 % ,N末端 15个氨基酸残基为 :Ile、Pro、Leu、Asp、Pro、Val、Ala、Gly、Cys、Lys、Glu、Pro、Ala、Ala、Asp。结论 :测得的氨基酸序列具有特异性。; 吕昕田宇肖明振倪龙兴李艳君; 关键词：氨基酸序列分析

银汞合金粘结修复的临床应用研究被引量：5: 2005年; 目的 :探讨银汞合金粘结修复的临床疗效。方法 :将 12 0例 2 0 4个后牙邻面龋或邻牙合面龋患牙随机分为两组 ,分别采用银汞合金粘结修复和常规银汞充填修复。结果 :银汞合金粘结修复组和常规银汞充填组 1年后复查 ,临床修复效果无显著性差异 ,2～ 3年后复查 ,两组间疗效有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :银汞合金粘结修复可明显提高修复体的固位力。; 吉凯田宇马红新; 关键词：银汞合金粘结修复粘接剂

人成釉蛋白C端肽的大量表达及纯化: 2007年; 目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,加入诱导剂IPTG至终浓度为0.1mmol/L,32℃继续振荡诱导培养5h,收集细菌,诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱Ni-NTA结合蛋白,收集洗脱蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。②离子交换层析缓冲液(pH 7.4,50 mmol/L Tris·Cl)平衡Q SapharoseHP层析柱,将初步纯化的蛋白样品加在Q Sapharose HP凝胶介质上,梯度洗脱结合的蛋白,收集洗脱峰,制样,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定洗脱蛋白。结果:①表达重组人成釉蛋白C端肽的金属螯合亲和层析结果:诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱下Ni-NTA结合蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳法电泳证实获得初步纯化的重组人成釉蛋白C端肽,其中仍含一些杂蛋白。②重组人成釉蛋白C端肽的离子交换层析结果:获得多个蛋白洗脱峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳法证实获得纯化的重组人成釉蛋白C端肽。结论:获得了纯化的人成釉蛋白重组蛋白。; 田宇鲁红倪龙兴肖明振余擎蒲勤路凡; 关键词：色谱法亲和色谱法离子交换

一种新型纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程的可行性研究被引量：15: 2005年; 目的:对一种新型纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,采用细胞计数和扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法研究nHAC浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果:人PDLCs在nHAC支架上形成良好贴附并增殖,扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,细胞在nHAC上生长旺盛,伸展充分,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与空白对照组相比无显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。; 鲁红吴织芬田宇袁乃梅; 关键词：纳米羟基磷灰石牙周膜细胞细胞相容性细胞毒性

人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性: 2007年; 目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫后,颈动脉取血,分离血清并用饱和硫酸铵纯化,制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体,用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效价。用WesternBlot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。结果:①ELISA检测结果:表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10000。②WesternBlot显示:成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达,相对分子质量约为65000,在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。结论:制备了抗人成釉蛋白抗体,为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础,从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白,并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65000。; 田宇鲁红倪龙兴肖明振余擎蒲勤路凡; 关键词：牙胚牙釉质蛋白质类抗体

应用生长因子-支架构建方式的组织工程方法再生牙周组织的实验研究被引量：13: 2005年; 目的:观察评价生长因子-支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨纳米羟基磷灰石材料(nHAC)和重组人骨形成蛋白 -2 (rhBMP-2 )用于牙周组织工程的可行性。方法:将rhBMP-2与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:rhBMP-2-nHAC-膜复合植入组较空白对照组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用生长因子-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而rhBMP-2和nHAC有望用作牙周组织工程的生长因子和支架材料。; 鲁红吴织芬田宇储庆袁乃梅; 关键词：牙周组织再生

应用细胞-支架构建方式的组织工程方法促进牙周组织再生的实验研究被引量：28: 2005年; 　目的:观察评价细胞 -支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨自体牙周膜细胞(PDLCs)和纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)分别用作牙周组织工程种子细胞和支架材料的可行性。方法:改良组织块法体外培养动物自体PDLCs,传代扩增后接种到nHAC三维支架上,再植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯 (e-PTFE)膜,以单纯翻瓣组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:自体PDLCs-nHAC-膜复合植入组较单纯翻瓣组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用细胞-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而自体PDLCs可作为牙周组织工程的种子细胞,nHAC可作为牙周组织工程的支架材料。; 鲁红吴织芬田宇陈书军储庆; 关键词：牙周组织再生种子细胞

牙胚组织中成釉蛋白表达免疫组织化学和原位杂交的特点: 2006年; 目的:观察人牙胚组织中成釉蛋白的表达特点。方法:实验于2002-02/04在解放军第四军医大学口腔内科实验室完成。取孕5个月流产男性胎儿(产妇知情同意),截取上、下颌骨,常规方法制备人牙胚组织石蜡切片。用兔抗人AMBN多克隆抗体,对人牙胚组织石蜡切片和正常狗牙周组织石蜡切片进行免疫组织化学染色。标记人成釉蛋白cDNA探针,对人牙胚组织石蜡切片进行原位杂交。结果:①免疫组织化学染色发现成釉蛋白由内釉上皮细胞在分化为成熟成釉细胞前开始表达,分泌期成釉细胞高度表达并持续整个釉质形成期,新形成的牙釉质染色阳性;成牙本质细胞在分泌牙本质基质之前开始表达成釉蛋白,在牙本质形成过程中成牙本质细胞持续表达成釉蛋白,呈弱阳性,前期牙本质中呈弱阳性染色;上皮根鞘细胞染色阳性。狗牙周组织染色发现牙骨质表层细胞呈强阳性染色,新形成的牙骨质中可见阳性染色颗粒,呈网状分布。②对人牙胚组织石蜡切片的原位杂交显示,成釉蛋白在成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞中有表达,表达部位与免疫组织化学结果一致。结论:内釉上皮首先表达成釉蛋白,之后前成牙本质细胞达成釉蛋白。成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘细胞表达成釉蛋白。; 田宇鲁红倪龙兴肖明振余擎; 关键词：牙釉质蛋白质类免疫组织化学 DNA探针原位杂交

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