国家自然科学基金(30772542)
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 相关作者：毛伟征马贵亮李杨朱新红齐宏更多>>
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- rmhTNF-α联合抗IL-6抗体对胃癌SGC-7901细胞杀伤作用的研究被引量：1
- 2013年
- 目的:研究rmhTNF-α联合抗IL-6抗体对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。方法:(1)将已培养的SGC-7901细胞株分为a、b、c、d、e组,a、b、c、d组分别加入浓度为10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml的rmhTNF-α,e组加入等量PBS。ELISA检测不同时间点SGC7901细胞上清液中IL-6的分泌量,MTT法检测细胞培养24 h、32 h、40 h、48 h的凋亡情况。(2)将SGC-7901细胞分为f、g、h、i组,f组加入rmhTNF-α,浓度分别为10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml;g组加入不同浓度的rmhTNF-α与浓度为100 ng/ml的IL-6,h、i组加入不同浓度的rmhTNF-α与浓度分别为1:62.5和1:125的抗IL-6抗体。MTT法测细胞培养48 h的凋亡情况。荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果:(1)IL-6分泌五组差别具有统计学意义(P<0.05),a、b、c、d组IL-6浓度均高于e组(P<0.05),a、b、c组相比各时间点IL-6浓度逐渐升高(P<0.05),c、d组差别无统计学意义。(2)细胞存活率a、b、c、d组与e组差别具有统计学意义(P<0.05),a、b、c、d组内比较差别有统计学意义(P<0.05),显示杀伤作用40 h后减弱,c、d组差别无统计学意义。(3)细胞存活率f、g组比较差别具有统计学意义(P<0.05),h、i组与f组差别有意义(P<0.05),h、i组比较,i组细胞存活率较低。结论:rmhTNF-α可以促进SGC-7901细胞分泌IL-6;抗IL-6抗体可以增强rmhTNF-α对SGC-7901细胞的杀伤作用。
- 牟挺马贵亮朱新红毛伟征林存智
- 关键词：IL-6胃癌
- 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强肿瘤坏死因子α诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡作用的研究被引量：3
- 2013年
- 目的研究核转录因子-κb（NF—κb）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝（MTr）法检测不同浓度的PDTC和TNF-α以及两者联合应用对SGC-7901细胞增殖的抑制率：采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况：Westernblot检测SGC-7901细胞survivin和easpase-3蛋白的表达。结果PDTC在15、30、60和100μmol／L浓度时．对SGC-7901的细胞生长抑制率分别为（12．14±0．91）％、（20．00±1．11）％、（37．63±1．01）％和（41.46±1．07）％．均可抑制细胞增殖（P〈0．01）。TNF-α为25mg／L时，对SGC．7901细胞的生长抑制率为（2．38±0．67）％，与对照组（1．50±0．81）％相比，差异无统计学意义（F=28．28，P〉0．05）：而在50、100和150mg／L浓度时，对SGC-7901细胞的生长抑制率分别为（4．53±0．85）％、（4．43±0．70）％和（4．74±1．07）％，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。PDTC15μmol／L分别与25、50、100和150mg／L的TNF．仅联合应用时，对SGC-7901的细胞生长抑制率则分别为（18．94±1．10）％、（30．23±0．89）％、（41．55±0．94）％和（53．34±0．98）％，与单用TNF—α或单用15μmol／LPDTC比较，细胞生长抑制率增加（P〈0．01）。Hoechst检测结果显示，TNF-α100mg／L组、PDTC15μmol／L组及两者联合应用组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01），且联合用药组细胞凋亡率增高最为显著（P〈0．01）。PDTC（15μmol／L）与TNF-α（100mg／L）联合用药与单用TNF—α（100mg／L）比较，细胞survivin蛋白表达明显降低（P〈0．01），与单用PDTC（15μmol／L）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；但caspase-3蛋白的表达联合用药组较两者分别单用时显著增加（P〈0．01）。结论PDTC可增强TNF-α对人SGC-7901细
- 曹明争毛伟征马贵亮李杨
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α核转录因子-ΚB吡咯烷二硫代氨基甲酸盐凋亡
- 人TNF-α重组慢病毒载体构建及其脐血间质干细胞表达被引量：10
- 2010年
- 目的构建带有人TNF-α基因的慢病毒载体,并且观察该基因在体外人脐血间质干细胞中的表达。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从PCD DNA-TNF-α质粒中获得人TNF-α基因,利用Infusion技术重组构建慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-TNF-α,在脂质体Lipofectamine 2000介导下与结构质粒pHelper 1.0和包膜质粒pHelper 2.0共转染293T细胞包装生产慢病毒。将人脐血间质干细胞分为实验组(pGC-FU-TNF-α)、空载体对照组(pGC-FU-EGFP)及空白组(脐血间质干细胞),分别用重组慢病毒、空载慢病毒、PBS感染后,采用RT-PCR以及ELISA方法检测TNF-α表达。结果所获TNF-α基因测序证明与GenBank中序列一致;重组慢病毒载体质粒pGC-FU-TNF-α经鉴定正确;三质粒共转染293T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为2×107TU/L,感染脐血间质干细胞后RT-PCR、ELISA检测3组细胞均有TNF-α表达,其中实验组大量表达TNF-α,与其余两组比较差异有显著性(F=11.677、21.321,P<0.01)。结论成功构建带有TNF-α基因的慢病毒载体并实现在脐血间质干细胞中的表达,为脐血间质干细胞转基因治疗胃癌的应用奠定基础。
- 马贵亮毛伟征杨堃安岗岱震波
- 关键词：慢病毒感染脐血间质干细胞
- 脐血间充质干细胞靶向胃癌移植瘤的实验研究被引量：6
- 2011年
- 目的探讨脐血间充质干细胞靶向胃癌的可能性。方法将胃癌细胞SGC一7901注射到裸鼠腹股沟皮下，建立胃癌裸鼠模型，荷胃癌小鼠随机分为脐血间充质干细胞组与成纤维细胞组，每组5只（n=5）。荧光染料SP—DiI染色人类脐血问充质干细胞及成纤维细胞，分组注射到对侧腹股沟皮下。10d后处死裸鼠，取出肿瘤、注射部位、肝脏、脾脏和肺脏组织，连续切片分别制成冷冻切片和常规HE染色，荧光显微镜下观察冷冻切片中间充质干细胞和成纤维细胞在各组织中的分布。结果脐血问充质干细胞在荷胃癌小鼠肿瘤部位中的荧光面积为（0．0150±O．0079），注射点、肝脏、脾脏和肺脏组织中的荧光面积分别为（0．0043±0．0039）、（0．0010±0．0005）、（0．0015±0．0012）和（0．0014±0．0008），肿瘤部位中的荧光面积与其他部位相比差异有统计学意义（P〈0．01）；成纤维细胞主要集中于注射点位置，在肿瘤组织、肝脏、脾脏和肺脏内均未发现它的存在，在两组裸鼠移植瘤中，脐血间充质干细胞的分布与成纤维细胞相比差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论人类脐血间充质干细胞能趋向到胃癌组织中，利用此特性可望将其作为载体应用到胃癌的诊断和治疗中。
- 赵宝成王振军毛伟征安岗
- 关键词：间充质干细胞胃肿瘤动物模型靶向性
- TNF-α联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901抑制作用的研究被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨TNF-α联合奥沙利铂对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制、凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的TNF-α、奥沙利铂及两者联合应用对SGC-7901细胞抑制率;采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况。结果:浓度为20、40、80和160μg/mL的奥沙利铂对SGC-7901的细胞生长抑制率为(29.11±0.63)%、(41.05±0.97)%、(47.69±1.03)%和(56.26±0.93)%,均可抑制细胞增殖(P<0.01);浓度为25 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(2.39±0.65)%,抑制作用不明显,浓度为50、100、150 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(4.51±0.86)%、(4.63±0.53)%和(4.75±1.05)%,可抑制细胞增殖(P<0.05);奥沙利铂(20μg/mL)与25、50、100和150 mg/L的TNF-α联合应用时对SGC-7901的细胞生长抑制率为(36.34±0.76)%、(45.51±0.83)%、(51.47±0.67)%和(58.78±0.97)%,与单用TNF-α(100mg/L)或奥沙利铂(20μg/mL)比较,细胞生长抑制率增加(P<0.01);Hoechst检测结果显示,单独应用100 mg/L TNF-α、单独应用20μg/mL奥沙利铂及两者联合应用均有细胞凋亡现象,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01)。结论:TNF-α可增强奥沙利铂对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能为TNF-α、奥沙利铂分别激活不同的Caspase,并级联和放大有关凋亡信号,因而对细胞凋亡产生了协同作用。
- 齐宏毛伟征马贵亮
- 关键词：胃肿瘤肿瘤坏死因子Α奥沙利铂细胞凋亡
- 脐血干细胞表达转基因TNF-α联合溶瘤病毒对小鼠胃癌移植瘤抑制和杀伤作用被引量：3
- 2015年
- 目的探讨脐血间质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)表达转基因肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)联合溶瘤病毒-新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)抑制和杀伤胃癌的作用。方法构建带有人TNF-α基因的慢病毒载体,感染人脐血间质干细胞,获得重组慢病毒感染的脐血间质干细胞(MSC-TNF-α)。人胃癌细胞SGC-7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型,荷瘤裸鼠分为MSC-TNF-α组、MSC-TNF-α联合溶瘤病毒组和生理盐水(NaCl)对照组,每组5只;对3组裸鼠瘤周分别注射MSC-TNF-α、MSC-TNF-α+溶瘤病毒和NaCl,隔日1次,共3次;第4周取材,观察注射前后瘤体生长情况。反转录PCR法测定3组胃癌组织中TNF-αmRNA表达;病理切片观察瘤体坏死面积及肿瘤细胞凋亡情况。结果 MSC-TNF-α组裸鼠肿瘤体积为(1.40±0.23)cm3,MSC-TNF-α+溶瘤病毒组为(0.94±0.28)cm3,NaCl组为(2.88±0.28)cm3,MSC-TNF-α+溶瘤病毒组与MSC-TNF-α组比较,差异有统计学意义,t=2.39,P=0.044;MSC-TNF-α组与NaCl组比较,差异有统计学意义,t=7.72,P<0.001。MSC-TNF-α组TNF-αmRNA相对表达量为5.96±0.87,NaCl组为1.71±0.75,两组比较差异有统计学意义,t=6.652,P<0.001;MSC-TNF-α+溶瘤病毒组为5.81±1.11,与NaCl组比较,差异有统计学意义,t=6.423,P<0.001;MSC-TNF-α组与MSC-TNF-α+溶瘤病毒组比较,差异无统计学意义,t=0.229,P=0.825。病理切片显示,MSC-TNF-α+溶瘤病毒组坏死面积最大。Hoechst凋亡检测示,MSC-TNF-α+溶瘤病毒组细胞凋亡率最高,两治疗组肝脏和肾脏功能检测均正常。结论转基因脐血间质干细胞旁分泌TNF-α联合溶瘤病毒对胃癌细胞具有明显的抑制杀伤作用。
- 朱新红马贵亮毛伟征李谦战淑惠周少飞林存智
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α脐血干细胞溶瘤病毒裸鼠
- 氟尿嘧啶联合TNF-α对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用被引量：2
- 2018年
- 目的研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制及凋亡诱导的作用,并探讨其机制。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测单用不同浓度5-Fu、TNF-α及两者联合应用对SGC-7901细胞增殖的抑制率;采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况。结果不同浓度的5-Fu(6.25、12.50、25.00、50.00mg/L)均可抑制SGC-7901细胞增殖(F=32.41,P<0.05);不同浓度的TNF-α(25.00、50.00、100.00、150.00mg/L)均可抑制SGC-7901细胞增殖(F=28.92,P<0.05);5-Fu (6.25 mg/L)与TNF-α(25.00、50.00、100.00、150.00mg/L)联合应用对SGC-7901细胞的增殖抑制率较单用TNF-α或5-Fu增加(F=28.05,P<0.05)。Hoechst检测结果显示,100.00mg/L TNF-α组、6.25mg/L 5-Fu组及二者联合应用组均有细胞凋亡现象(F=124.03、46.23,P<0.05),且联合用药组细胞凋亡率增高(F=124.03,P<0.05)。结论 TNF-α可增强5-Fu对人胃癌细胞SGC-7901增殖抑制及凋亡诱导的作用,其机制可能为5-Fu、TNF-α分别激活不同的信号通路,并级联和放大相关的凋亡信号,协同抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。
- 祝志鹏徐波张丽君齐宏
- 关键词：胃肿瘤氟尿嘧啶肿瘤坏死因子-Α细胞凋亡
- 重组TNF-α慢病毒感染的脐血间质干细胞对胃癌移植瘤生长的抑制作用被引量：4
- 2012年
- 目的:以脐血间质干细胞(umbilical cord blood mesenchyme stem cell,UCBMSC)作为肿瘤坏死因子-α(tumor necro-sis factor-alpha,TNF-α)载体,研究重组TNF-α慢病毒Lv-TNF-α感染的UCBMSC对胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法:人胃癌细胞SGC-7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型。将表达TNF-α的重组慢病毒Lv-TNF-α和对照慢病毒Lv-EGFP分别感染UCBMSC后获得Lv-TNF-α感染的UCBMSC(UCBMSC-TNF-α)以及Lv-EGFP感染的UCBMSC(UCBMSC-EGFP)。荷瘤裸鼠随机分为3组:分别注射UCBMSC-TNF-α、UCBMSC-EGFP及生理盐水(NaCl),观察注射后瘤体生长情况,RT-PCR和ELISA方法分别测定各组胃癌组织中TNF-αmRNA和蛋白的表达;H-E染色观察瘤体的坏死情况。结果:成功建立SGC-7901胃癌细胞裸鼠移植瘤模型。治疗后三组荷瘤裸鼠肿瘤体积分别为(0.51±0.27)、(0.64±0.36)和(1.21±0.80)cm3,UCBMSC-TNF-α组肿瘤体积最小(F=3.88,P<0.05);RT-PCR法检测结果显示,3组荷瘤裸鼠肿瘤组织TNF-αmRNA分别为(1.92±0.12)、(1.21±0.26)、(0.81±0.22),UCBMSC-TNF-α组TNF-αmRNA表达量最大(F=54.82,P<0.01);ELISA法检测结果显示,3组荷瘤裸鼠肿瘤组织TNF-α蛋白表达分别为(148.29±3.76)、(78.22±6.24)、(42.80±3.02)pg/ml,MSC-TNF-α组表达量最大(F=694.54,P<0.01);H-E染色病理切片显示,UCBMSC-TNF-α治疗组肿瘤坏死面积最大。结论:TNF-α转基因UCBMSC可通过旁分泌TNF-α抑制胃癌的生长。
- 马贵亮张学斌朱新红李杨毛伟征
- 关键词：慢病毒TNF-Α脐血间质干细胞转基因治疗胃癌
